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文档简介

1、、实验目的1、学习凝胶 (Gel) 层析法的基本原理；2、掌握葡聚糖凝胶( Sephadex)柱层析的操作技术。二、实验原理凝胶层析又称排阻层析， 凝胶过滤， 渗透层析或分子筛层析等 。 对于某种型号的凝胶， 一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被排 阻在外，只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外 (所用洗脱液的体积为外水 体积)；而一些小分子不被排阻，可自由扩散，渗透进入凝胶内部的 筛孔，尔后又被流出的洗脱液带走 (所用洗脱液的体积为内水体积) 。 分子越小，进入凝胶内部越深，所走的路程越多，故小分子最后流出 柱外，而大分子先从柱中流出。 一些中等大小的分子介于大分子与小 分子之间，只能进入一部分凝胶

2、较大的孔隙，亦即部分排阻，因此这 些分子从柱中流出的顺序也介于大、 小分子之间。 这样样品经过凝胶 层析后，分子便按照从大到小的顺序依次流出，达到分离的目的。三、仪器、材料和试剂 1、仪器：内直径为 1cm，外直径为的层析柱，恒流泵、收集器、酶标仪、 试管、烧杯、移液枪。 2、材料与试剂：交联葡聚糖、双蒸水、蛋白溶液样品。四、实验步骤1、装柱 将交联葡聚糖溶液用玻璃棒引流导入层析柱中， 要注意， 不能让柱子中有气泡，可以边装边用玻璃棒搅拌2、上样装好柱后，用移液枪将柱子中上面的水吸出，再用移液枪将 1ml 的蛋白溶液加入层析柱中。3、洗脱和收集打开恒流泵和收集器装置， 待样品刚好渗入到凝胶中时， 再向层 析柱中加入 3-4ml 的蒸馏水， 此时盖上层析柱的上盖， 将上盖的细管 插入到盛有双蒸水的烧杯中， 调节恒流泵的速度和收集器时间， 开始 洗脱收集。4、样品的检测收集一段时间后，将样品取出，依次编号，依次加入200 l 到酶标版上， 选用一个孔加入双蒸水作为对照， 用酶标仪在 280nm下测 检测。五、实验结果及分析1、实验结果：序号2468101214吸光 度A0051序号16182022242628吸光 度A2、蛋白质样品洗脱曲线：收集样品时设置的时间为

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