丹参的化学成分及其制剂的指纹图谱与质量标准研究进展

1、丹参的化学成分及其制剂的指纹图谱与质量标准研究进展? 综述讲座? 丹参的化学成分及其制剂的指纹图谱与质量标准研究进展 曹冬,黄喜茹,王建华,刘伟娜,侯海妮(河北医科大学药学院,石家庄市050017) 中图分类号R282.5文献标识码A文章编号10010408(2005)17-一133903 丹参为唇形科植物丹参(Salviamihiorrhizabge)的干燥 根及根茎,主要产于四川,山西,河北,江苏,安徽等省.其始载 于神龙本草经,被列为上品.中医理论认为,丹参性味苦,微 寒,归心,肝经,具有祛淤止痛,活血通经,清心除烦之功效.丹 参及其制剂对治疗心,脑血管疾病,癌症,中风,肝炎等疾病及 抗

2、衰老均有良好的效果”】.近年来,国内,外学者对丹参的化学 成分,药效学,药理学,药动学等方面进行了大量研究.本文拟 对丹参的化学成分及其制剂的指纹图谱与质量标准研究等方 面的进展作一综述,以为其深入研究提供参考. 1化学成分 丹参的化学成分主要分为2类:脂溶性二萜醌类和水溶性 酚酸类l. 1.1丹参脂溶性成分 丹参脂溶性成分是丹参的主要有效成分,且含量较高,有 较强的生理活性,该类化合物主要有:丹参酮I,丹参酮A,丹 参酮隐丹参酮,丹参酸甲酯,丹参新酮,二氢丹参酮I,次 0Z4bnln 图1高效液相色谱 1.青霉素V钾 Fig1HPLC 1.phenoxymethylpenicillinpot

3、assium 并按”2.1”项下色谱条件进样测定,结果RSD一0.93%. 2.7稳定性试验 取”2.6”项下青霉素V钾溶液,分别于室温下放置0,2,4, 6,8,lOh后按”2.1”项下色谱条件进样,结果发现在8h后,主 峰面积趋于下降,而杂质峰增多.表明青霉素V溶液在8h内 稳定. 2.8回收率试验 取已知含量的片剂(批号:0209104)细粉适量(约相当于青 霉素V钾12mg),置于50ml容量瓶中,共3份,分别准确加入 一 定量青霉素V钾对照品,按”2.3”项下方法操作,配成约相 当于样品测定浓度80%,100%,120%的溶液,各按”2.I”项下 色谱条件进样20l测定,记录峰面积,

4、结果详见表1. 表1回收率试验结果 Tab1Resultsofrecoverytest - k河北省卫生厅资助项目(04102) #硕士研究生.研究方向:药物分析研究.电话:03116265623. 通讯作者:教授,硕士生导师.研究方向:中西药物分析研究.电 话:03116265623.Email:huangxr(.ca 中国药房2005年第16卷第17期 2.9样品含量测定 取”2.2”,”2.3”项下溶液各20l,按”2.1”项下色谱条件进 样测定,记录色谱峰面积.按外标法计算供试品中青霉素V钾 的含量,并与咪唑催化一汞盐形成的分光光度法(简称咪唑法) 比较,结果详见表2

5、. 表2样品含量测定结果 Tab2Contentdeterminationresultsofsamples 3讨论 2000年版中国药典(二部)收载的青霉素V钾片的含 量测定方法中,所用的咪唑溶液配制较为繁琐且不稳定,在放 置数日后,其紫外吸收度往往超过0.05. 青霉素V钾中有诸多杂质存在,如合成中的副产物对羟 基青霉素V,放置过程中的降解产物青霉素V噻唑酸等.在电 位滴定法和咪唑法中都很难排除这些物质的干扰,往往有含量 偏高造成结果误差大的现象.运用HPLC法对青霉素v钾进 行含量测定时,不但操作简便,同时还能排除以上所述干扰因 素,结果更为准确可靠,可用于青霉素V钾片的质量控制. 取青霉

6、素V钾对照品适量,加水溶解并稀释成约浓度为 m0g/ml的溶液,于200nm400nm波长范围内扫描,结果在 268nm及274nm有最大吸收,故选择268nm检测可提高检测 灵敏度. 参考文献 【I】国家药典委员会编.中华人民共和国药典(二部)【S】. 2000年版.北京:化学工业出版社,2000:353,354. 【2】胡昌勤.高效液相色谱法在抗生素质控分析中的应用(下 册)【M】.北京:气象出版社,2001:4. (收稿日期:20041017修回日期:2005-03-04) ChinaPharmacy2005Vo1.16No.171339 甲丹参酮,准丹参酮,红根草邻醌,丹参二醇以及紫丹

7、参甲素, 乙素,丙素,丁素,戊素,己素等.其中,丹参酮是丹参治疗 冠心病的主要有效成分之一【3】,且含量可达0.5%以上,将其磺 化制成丹参酮磺酸钠后,不仅可增加水溶性有利于制剂, 而且提高了药理活性.此外,丹参中还有某些含量较低的化合 物,如异丹参酮I,异丹参酮A,异丹参酮异隐丹参酮, 异二氢丹参酮I,7一a一乙氧基罗列酮,丹参螺旋内酯,新隐丹 参酮,鼠尾草卡偌醇,阿罗卡二醇以及丹参新醌甲,乙,丙,丁 等. 1.2丹参水溶性成分l 目前,人们已从丹参中分离出多种水溶性化合物,如丹参 素,原儿茶醛,迷迭香酸,迷迭香酸甲酯,紫草酸,咖啡酸,异阿 魏酸,铁锈醇,替告吉宁,鼠尾草酚,鼠尾草列醇和丹酚

8、酸A,B, C,D,E,F,G等.其中,丹参素和原儿茶醛含量较高,活性较 强,是丹参治疗冠心病的主要有效成分,二者常作为丹参原药 材及其制剂的质量控制指标成分.最近有研究发现,丹酚酸A, B的抗心肌缺血,缺氧活性较丹参素和原儿茶醛更强.其中,丹 酚酸A是目前已知最强的抗氧化化合物之一,且其还具有改 善记忆,降低抗癌药阿霉素毒性等作用.鉴于丹酚酸A在丹参 中含量高于丹参素和原儿茶醛,将其作为定性,定量指标成分 可能较丹参素和原儿茶醛更有意义. 2丹参及其制剂的指纹图谱与质量标准研究 据统计,丹参制剂在110种以上.定性鉴别上述2类成分 或定量测定其某种有效成分含量,已成为评价丹参及其制剂质 量的

9、重要方法.定性鉴别包括:指纹图谱的宏观定性,薄层色谱 定性;含量测定方法包括:薄层扫描(TLC)法,高效液相色谱 (HPLC)法,气相色谱法,高效毛细管电泳法,薄层层析一紫外 分光光度法等.指纹图谱是目前国际公认的控制中药或天然药 物质量最有效的方式.人们凭借实用的指纹图谱不仅可确认该 产品的真伪,同时能判断其稳定性.近年来,人们对丹参药材及 其制剂的指纹图谱研究日益广泛,现归纳如下: 2.1丹参药材及有效部位的指纹图谱研究 刘艳华等”采用HPLC法,以AlltechCl(250mm×4.6mm, 51am)为色谱柱,1%冰醋酸水溶液一1%冰醋酸甲醇溶液为流 动相,采用梯度洗脱,流速

10、1.0ml/min,检测波长281nm,建立 丹参药材的指纹图谱.结果表明,建立指纹图谱方法的精密度 和重现性试验中各共有峰相对峰面积的RSD<5%,符合相关 规定,可作为控制丹参药材内在质量的标准.李伟等依据薄 层色谱斑点上的Rf值,斑点颜色和大小以及整个色谱的指纹 分析,对不同产地,采收期,品级及品种的鼠尾草属植物进行鉴 别,通过数码摄影实现了对丹参药材水溶性物质群和脂溶性物 质群薄层色谱指纹特征的提取与表达.结果表明,将以往数值 分类法的研究成果用于中药材物质群指纹特征的表达,用信息 量来量化指纹图谱的特征信息,可得出中药材真伪,优劣的判 断依据.李磊等建立丹参水溶性有效成

11、分HPLC指纹条形码 图谱,以此鉴别不同产地丹参与其它鼠尾草属丹参伪品,并进 行质量评价.实验以正宗丹参和市场上丹参伪品为分析对象, 选择适宜的水溶性成分萃取方法和HPLC分析条件,构建丹参 HPLC指纹图谱,并进行归一化处理,将相同条件下的指纹条 形码图谱进行相互比较.结果显示,所建立的构建丹参水溶性 成分HPLC指纹条形码图谱的方法有较好的重现性和稳定 性,该技术能对丹参的道地性进行鉴别,并能对相关成分进行 半定量,从而可全面评定丹参品质.顾铭等用国产高速逆流 色谱(HSccc)分离纯化丹参药材,选用正己烷一乙醇一水体 1340ChinaPharmacy2005Vo1.16No.17 系为

12、流动相,固定相保留率达78.8%,采用分步洗脱.结果表 明,3个产地丹参各分离得到12个洗脱组分,经HPLC仪和紫 外光谱仪检测证明,3张HSCCC洗脱图谱中对应洗脱峰为同 一 组分;HSCCC洗脱图谱不包含非共有峰,且对应洗脱峰保留 时间的相对标准偏差(RSD)<3%,符合国家标准关于制订指 纹图谱方法学资料规定的技术参数,说明HSCCC作为制订丹 参药材指纹图谱的方法具有可行性.季一兵等利用毛细管电 泳技术建立丹参中药材的指纹图谱,采用以50/m×50cm未涂 渍毛细管柱,以20mmol/L硼砂溶液作缓冲液,运行电压为 15kV,检测波长为210nm.结果表明,建立

13、的指纹图谱中有11 个共有峰,且方法学考察符合规定的标准.该法准确,简便,可 作为控制丹参药材内在质量的有效手段.杨广德等建立丹参 的反相高效液相色谱(RPHPLC)定性,定量分析方法,采用 PlanetsilC18分析柱(150mm×4.6mm,5m),甲醇一水(45: 55)为流动相,流速为1.0ml/min,检测波长为270nm,柱温为 室温,对丹参乙醚提取部位进行指纹图谱定性分析,并对丹参 中的有效成分丹参酮和隐丹参酮进行定量测定.结果表 明,在色谱条件下,1l份不同丹参药材供试品中乙醚提取部位 的RPHPLC指纹图谱中可检出11个位置相对稳定的色谱 峰,确定其中9个共有峰作

14、为定性鉴别的指标峰;丹参药材中 丹参酮和隐丹参酮的含量分别为0.102%0.494%和 0.021%-0.139%.研究表明,丹参脂溶性部位RPHPLC指 纹图谱定性和有效成分定量分析方法具有较强的针对性和准 确性,可用于丹参及其制剂的质量控制. 2.2丹参制剂的指纹图谱研究 施超欧等”叫利用HPLC法及液一质联用技术对丹参注射 液进行质量分析,试验初步建立了丹参注射液指纹图谱所需的 HPLC分析方法,同时确定了其中几个强峰的组分及其分子 量,为建立丹参注射液的指纹图谱提供了定性依据.李茜等”川 研究了丹参葡萄糖注射液的HPLC指纹图谱测定方法,试验以 原儿茶醛为对照品,应用HPLC法,以Al

15、ltimaC8(250mm× 4.6mm,5ttm)为色谱柱,1%冰醋酸水溶液一1%冰醋酸甲醇溶 液为流动相,采用梯度洗脱,检测波长为281nm,分析时间为 65min,流速为1.0ml/min.结果显示,丹参葡萄糖注射液有6 个共有峰,同时以HPLCMS分析了主要成分的归属.结果 表明,该法准确,重现性好,为丹参葡萄糖注射液的指纹图谱质 量控制提供了依据.王宜祥等采用HPLC法研究香丹注射 剂及原药材的指纹图谱.结果显示,丹参及香丹注射剂的指纹 图谱有较好的相关性.该研究有助于香丹注射剂的质量控制. 此外,据多方面报道,采用HPLC指纹图谱对市场多种复方丹 参制剂进行比较研究,并对

16、其中主要活性成分进行定量分析, 得出不同厂家或批次的复方丹参制剂的指纹图谱差异较大,提 示应规范该制剂的质量控制标准. 2.3有效成分的含量测定 2.3.1TLC法:TLC法多用于丹参药材及其复方制剂中单 一 有效成分的测定,具有操作简便,分离效果好,结果准确的特 点.吕东等”.采用TLC法鉴别了复方丹参胶囊中高原丹参,三 七及冰片,并在480rim的条件下扫描测定高原丹参中丹参酮 的含量.结果显示,5批样品每粒胶囊均含丹参酮lI0.459mg- 0.557mg.刘玉珍等采用TCL法对保心宁胶囊中丹参,枳壳, 当归进行定性鉴别,并应用TLC法对丹参中丹参酮的含量 进行测定.该法简便,结果准确,

17、重现性好,可作为该制剂的质量 控制方法.余孝东”噪用TLC法对安神口服液中的酸枣仁,地 黄,丹参进行定性鉴别,并测定该制剂中原儿茶醛的含量.结果 中国药房2005年第16卷第17期 显示,TLC色谱中斑点清晰,易于识别,原儿茶醛的平均回收 率为102.3%,RSD=0.99%.该法简便,准确,可靠,制剂质量 可控.除上述报道外,应用TLC法进行质量标准研究的丹参制 剂还包括:复方丹参颗粒剂,复方丹参口服液,葆春长寿灵胶 囊,筋骨痛消丸,五灵丸,脑血栓片,健脑益智冲剂,养心生脉冲 剂等25种. 2.3.2HPLC法:HPLC法多用于丹参药材及其复方制剂中 有效成分的测定,具有精密度高,测定结果准

18、确的特点.洪馨 等”eI建立了同时测定复方丹参滴丸中丹参素和原儿茶醛含量 的HPLC法,以c.s为色谱柱,甲醇一水一冰醋酸(19:80:1) 为流动相,检测波长为279nm.结果表明,丹参素和原儿茶醛浓 度分别在10-80mg/L和216mg/L范围内与峰面积线性关 系良好,平均回收率分别为99.5%和99.7%,RSD分别为 1.6%和1.3%.该法简便,灵敏,准确,样品处理简便,易行.张 翠莲等”建立RPHPLC法测定复方丹参注射液中丹参素及 原儿茶醛的含量,并比较不同厂家复方丹参注射液的质量.结 果,丹参素和原儿茶醛的线性范围分别为7.5150.0bLg/ml和 2.550.0bLg/m

19、l,r一0.9999;平均回收率丹参素为101.07% (RSD一1.26%,n一5),原儿茶醛为101.84%(RSD一 1.54%,n一5).肖引等”噪用HPLC法测定清脂通络胶囊中 原儿茶醛的含量,以C.s为色谱柱,甲醇一水一冰醋酸(5: 110:1)为流动相,检测波长为280nm.结果,加样回收率为 95.49%,RSD一1.2%,3批样品中原儿茶醛含量的平均值为 0.005%.该法简便,准确,分离度较好,结果稳定.李彬等”.建 立了HPLC法测定补脑丸中丹参酮的含量,以Kromasil Cls(250ram×4.6mm;5m)为色谱柱,甲醇一水(80:20)为流 动相,流速

20、为1.2ml/min,检测波长为268nm.结果表明,丹参 酮A线性范围为0.16g-0.48tg,r一0.9999,平均回收率 100.8%,RSD一2.3%.该法简便,准确,可有效控制补脑丸产 品质量.此外,应用HPLC法进行质量标准研究的丹参制剂还 包括:丹参注射液,注射用丹参灭菌粉末,丹参口服液,肝福冲 剂,丹参片,妇健冲剂,安神补心丸,通脉冲剂,丹参舒心片(胶 囊),丹黄口服液,中风回春片,降粘抗栓片,乐脉颗粒等. 2.3.3其它方法:李广胜等20采用比色法对丹参口服液中总 酚酸性成分进行含量测定,得出回收率为(98.84±0.86)%, RSD一0.87%.该方法简便,快

21、速,准确度高,重现性好,可作 为丹参口服液的质量控制方法.利用丹参中的水溶性酚酸类在 紫外区(281±3)am波长处有最大吸收,脂溶性隐丹参酮在 442nm-452nm波长处有最大吸收的特性,可通过测定丹参药 材和制剂的吸收值来控制质量.该法多用于丹参液体制剂有效 成分的含量测定,具有操作简便,结果准确,重现性好等优点. 何建国等噪用一阶导数光谱法测定复方丹参注射液中原儿茶 醛的含量,测定波长为268nm,平均回收率为98.1%,RSD一 1.23%.该法作简便,易行,具有实用性.许腊英等采用紫外 分光光度法测定参芪胶囊中丹参素含量.该法测定精密度高, 重现性好,25h内测定结果稳定

22、,可用于控制该产品的质量. 3展望 综上所述,指纹图谱仅限于研究极少数的丹参制剂,定量 方法也不全面,仍有几十种丹参制剂的质量标准项为空白.鉴 于对丹参及其制剂的研究现状,笔者认为应加强指纹图谱与 质量标准方面的研究,以为药品的质量控制,新产品的生产和 开发,市场监督检验,临床合理用药等方面提供有效的科学检 测方法和依据. 参考文献 中国药房2005年第16卷第17期 1】国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)S】. 2000年版.北京:化学工业出版社,2000:58. 2】余世春,琚小龙,段广勋.丹参的化学成分和药理活性研 究概况J】.安徽卫生职业技术学院,2002,1(2):43.

23、3】ZhouGY,ZhaoBL,HouJW,eta1.Protectiveeffectsof sodiumtanshinoneAsulphonateagainstadriamycin inducedlipidperoxidationinmiceheartsinvivoandin vitroJ】.PharmacolRes,1999,40(6):487. 4】刘艳华,赵陆华,黄剑,等.丹参HPLC指纹图谱的研 究J】.中国药科大学,2002,3(2):127. 5】李伟,黎先春,王小如.丹参药材物质群薄层色谱指纹 特征的提取与表达J】.世界科学技术一中医药现代化, 2003,5(1):58. 6】李磊,黎先春,王小如.丹参品质鉴定和评价的HPLC 指纹条形码技术J】.中草药,2003,34(7):649. 7】顾铭,欧阳藩,苏志国.高速逆流色谱法分离纯化丹参 并尝试制订中药指纹图谱J】.生物工程,2000,19 (6):740. 8】季一兵,郑朝华,陈玉英.丹参的毛细管电泳指纹图谱研 究J】.中成药,2003,25(12):953. 9】杨广德,贺浪冲,李永茂.丹参有效部位指纹图谱定性和 有效成分定量分析方法研究J】.药物分析杂志,2003, 23(6):409. 1删施超欧,陶萍.丹参注射液主要