瘰疬清胶囊药效学研究

1、    瘰疬清胶囊药效学研究作者：罗宇慧 彭蕴茹 叶其正 王志刚 石磊 沈明勤【摘要】  目的观察瘰疬清胶囊对动物的止咳、抗炎及提高机体免疫力的作用。方法小鼠灌胃瘰疬清胶囊16.0，8.0和4.0 g生药/kg后，采用浓氨水喷雾法进行止咳实验，观察动物咳嗽潜伏期及咳嗽次数。大鼠灌胃瘰疬清胶囊8.0，4.0和2.0 g生药/kg的后，采用大鼠慢性炎症琼脂肉芽肿法，观察肉芽肿湿重及抑制率的变化，采用角叉菜胶致大鼠足肿胀法，测定大鼠足肿胀度及足肿胀抑制率。注射环磷酰胺（CY）造成小鼠免疫功能低下模型，观察灌胃瘰疬清胶囊16.0，8.0和4.

2、0 g生药/kg后，小鼠免疫功能的改变。结果瘰疬清胶囊能明显延长小鼠咳嗽潜伏期和减少咳嗽次数，对大鼠慢性炎症琼脂肉芽肿具有一定的抑制作用，对角叉菜胶致大鼠足肿胀具有一定的抑制作用，瘰疬清胶囊能明显对抗CY作用，提高免疫抑制小鼠的免疫功能。结论瘰疬清胶囊对实验动物具有一定的止咳、抗炎及提高机体免疫力的作用。 【关键词】  瘰疬清胶囊； 动物； 止咳； 抗炎； 免疫功能瘰疬清胶囊由生牡蛎、夏枯草、七叶一枝花、玄参等组成，临床上主要用于 治疗 瘰疬，颈部淋巴结核。本实验主要观察瘰疬清胶囊对动物的止咳、抗炎及提高机体免疫力的作用，为临床应用提供实验依据。1 器材 1.1 动物清洁级

3、KM小鼠：兼有，体重1822 g；清洁级SD大鼠：，体重280360 g，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证号：SCXK（沪）2002-0010号。1.2 试药瘰疬清胶囊（干粉）：含6.88 g生药/g，批号20030718，江苏省中医药研究院中药制剂研究室提供。枸橼酸喷托维林片（咳必清）：每片含枸橼酸喷托维林25 mg，批号020118-2，苏州医药集团有限公司生产。浓氨水：分析纯，批号981125，益林化工厂生产。乙酰水杨酸肠溶片(阿司匹林)：25 mg/片，批号20020404，南京第二制药厂生产，使用时以蒸馏水配成浓度为10 mg/ml的药液供灌胃给药。琼脂：批号980424，

4、 中国 药品生物制品检定所。角叉菜胶(Type)：批号232-524-2，美国SIGMA公司生产。环磷酰胺粉针(CY)：200 mg/瓶，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号2003041521。盐酸左旋咪唑片：25 mg/片，南京第二制药厂,批号20010104。5%鸡红细胞悬液的制备：由市售肉鸡采血约10 ml，以肝素生理盐水抗凝，再按11加入注射用0.9% NaCl液(NS)，充分混匀洗涤后，3 000 r/min离心15 min，弃去上清液，余下的红细胞再洗涤23次。取洗净离心后的红细胞4 ml，用NS液配制成5%浓度，现配现用。1.3 仪器S-888型超声波雾化器，中外合资道芬 电子

5、有限公司生产；PB303-N千分之一电子天平 上海产；隔水式电热水浴箱；BH-2OLYMPUS显微镜：日本进口。2 方法 2.1 小鼠止咳实验14取小鼠50只，称重，随机分为5组，每组10只，各半，分别为模型对照组（蒸馏水20 ml/kg）、阳性药咳必清对照组(0.05 g/kg)和瘰疬清胶囊大、中、小剂量组(16.0，8.0和4.0 g生药/kg)。各组动物灌胃(ig)给药，给药量均为20 ml/kg，给药1 h后各动物分别置于喷雾箱内，用超声波雾化器以相同强度将浓氨水雾化后喷入活动箱内，喷雾1 5 s后，立即观察动物咳嗽潜伏期（在吸入氨水气雾后至发生咳嗽所需时间为潜伏期），并记录2 min

6、内的咳嗽次数，各给药组与模型对照组进行组间t检验统计学处理。2.2 大鼠肉芽肿实验14肉芽肿模型：大鼠背部中线处取2.0 cm×2.0 cm面积脱毛，消毒，皮下注射2%琼脂(56水浴保温)2 ml，注射后立即凸起球状包块即成。隔日取50只肉芽肿模型大鼠，全，随机分5组，每组10只，分别为模型对照组(蒸馏水10 ml/kg)、阳性药阿司匹林组(0.1 g/kg)、瘰疬清胶囊大、中、小3个剂量组 (8.0，4.0和2.0 g生药/kg)。各组动物ig给药，给药量均为10 ml/kg。ig 1次/d，连续给药7 d，每日观察肉芽肿变化，末次药后1 h脱椎处死大鼠，剪开肉芽部位皮肤，剥离肉芽

7、肿琼脂块，称取湿重，各给药组与模型对照组进行组间t检验统计处理。肉芽肿抑制率(%)按下列公式 计算 ：抑制率（%） =模型对照组均值 - 给药组均值模型对照组均值 ×100%2.3 大鼠足肿胀实验 14取大鼠50只，称重，随机分为5组，每组10只,全，分别为模型对照组（蒸馏水10 ml/kg）、阿司匹林组（0.1 g/kg）、瘰疬清胶囊大、中、小3个剂量组(8.0，4.0和2.0 g生药/kg)。给药量均为10 ml/kg。用足跖测定器测量每只大鼠左后肢正常足跖容积（10 ml注射器，上口刻有标记，内含中性洗涤剂的水溶液，通过硬塑料管连接另一5 ml注射器），用记号笔在大鼠左后肢踝关

8、节周围做一标记，将大鼠左后肢浸入容器，使注射器上口标记与大鼠后肢关节标记和液面重叠，多余液体则抽入5 ml注射器内，抽入注射器内的液体量即为足跖容积。测量完给药前的正常足跖容积后，各组动物ig给药，30 min后,于左后肢足跖皮下注入1%角叉菜胶0.1 ml，注射0.5 h后（给药后1 h）按上述方法测量0.5，1，2，4，6，8 h的足跖容积,记录结果，并分别按下式计算肿胀率（%）和抑制率（%）。各给药组与模型对照组进行t检验统计处理。肿胀率（%）=致炎后足跖容积致炎前足跖容积 致炎前足跖容积×100% 抑制率（%） =对照组平均肿胀度 - 给药组平均肿胀度对照组平均肿胀度

9、5;100%2.4 小鼠免疫实验2.4.1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验取小鼠60只，随机分为6组，每组10只, 各半。分别为正常组和环磷酰胺（CY）模型组(蒸馏水20 ml/kg)、阳性药左旋咪唑组(25 mg/kg)、瘰疬清胶囊大、中、小剂量组(16.0，8.0和4.0 g生药/kg)。各组动物灌胃(ig)给药，给药量均为20 ml/kg，ig 1次/d，连续给药7 d，第5天除正常对照组外，每组动物腹腔注射CY 40 mg/kg (0.1 ml/10 g)，第6天各重复注射1次，末次给药后1 h小鼠腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.5 ml/只。再经2 h后脱颈椎处死动物，酒精消毒腹部，腹腔注射生

10、理盐水2 ml，轻揉腹部，剪开皮肤，暴露腹膜，剪一小口用消毒吸管吸取腹腔细胞悬液0.2 ml，涂敷于玻片上，然后将玻片平放于潮湿的培养皿内在37的孵育箱内孵育30 min。再用NS冲洗去未粘附的细胞，待 自然 晾干后，甲醇固定15 min，姬氏染色，计数100个巨噬细胞，按下列公式计算吞噬百分率和吞噬指数。各给药组与模型对照组进行t检验统计处理。吞噬百分率 （%）= 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数观察的100个巨噬细胞数×100%吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数100个巨噬细胞数2.4.2 小鼠PHA诱导淋巴细胞转化率实验取小鼠60只，体重1822 g，随机分为6组，每组10只, 各半。分别

11、为正常组和CY模型组(蒸馏水20 ml/kg)、阳性药左旋咪唑组(25 mg/kg)、瘰疬清胶囊大、中、小剂量组(16.0，8.0和4.0 g生药/kg),其中瘰疬清胶囊大剂量相当于拟临床人日用量的24倍。将供试药品在超净工作台中配成相应浓度并紫外线消毒后，各组动物灌胃(ig)给药，给药量均为20 ml/kg，ig1次/d，连续给药8 d，于给药第1天起，每只小鼠每天肌内注射PHA 10 mg/kg ( 0.1 ml/20 g)，共3 d，第6天除空白对照组外,其余各组动物腹腔注射CY 40 mg/kg(0.1 ml/10 g)，第7天重复注射1次,末次药后1 h小鼠眼眶后静脉丛取血，推片，甲

12、醇固定,姬氏染色，水洗，晾干，高倍镜下计数100个淋巴细胞中淋巴母细胞数，按下式 计算 淋巴细胞转化率。各给药组与模型对照组进行t检验统计处理。淋巴细胞转化率 （%）= 转化细胞数转化细胞数+未转化细胞数×100%2.4.3 小鼠血清溶血素水平测定取小鼠60只，体重1822 g，随机分为6组，每组10只, 各半。分别为正常组、CY模型组(蒸馏水20 ml/kg)、阳性药左旋咪唑组(25 mg/kg)、瘰疬清胶囊大、中、小剂量组(16.0，8.0和4.0 g生药/kg)。将供试药品在超净工作台中配成相应浓度并紫外线消毒后，各组动物灌胃(ig)给药，给药量均为20 ml/kg，1次/d，

13、连续给药12 d，于给药后第5天各组动物腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.2 ml/只进行免疫,再于给药后第10天除正常对照组外，每组动物腹腔注射CY 40 mg/kg (0.1 ml/10 g)，第11天重复注射1次，末次给药后1 h小鼠眼眶后静脉丛取血，离心，取10 l血清用生理盐水稀释100倍，与5%鸡红细胞悬液0.5 ml及10%补体0.5 ml混合，37恒温水浴中保温30 min后，0冰水浴中终止反应，离心，取上清液于贝克曼DU640型紫外分光光度计540 nm波长处比色,测光密度(OD)值，另设不加血清的空白对照,取上清液作为比色时调0的基准。以OD值作为判定血清溶血素水平的指标。各给药组与模型对照组进行t检验统计处理。2.4.4 小鼠血清免疫球蛋白水平测定取小鼠60只，体重1822 g，随机分为6组，每组10只，各半。分别为正常组和CY模型组(蒸馏水20 ml/kg)、阳性药左旋咪唑组(25 mg/kg)、瘰疬清胶囊大、中、小剂量组(16.0，8.0和4.0 g生药/kg),其中瘰疬清胶囊大剂量相当于拟临床人日用量的24倍。将供试药品在超净工作台中配成相应浓度并紫外线消毒后，各组动物灌胃(ig)给药，给药量均为20 ml/kg，1次/d，连续给药8 d，于给药后第6天除正常对照组外，每组动物腹腔注射CY 40 mg/kg (0.1 ml/10 g)，第