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文档简介

1、Western blotting 所需要试剂配方1、超纯水2、30%Acr/Bic（29.1）、1.5mol/L Tris.Hcl（Ph=8.8） 、0.5mol/L Tris.Hcl（Ph=6.8） 、1.0mol/L Tris.Hcl 、10%SDS3、 10%AP使用前加1000ul超纯水）、转移缓冲液、TBS TBST TEMED甲醇、吐温 204、样品5、 上样缓冲液、电转缓冲液、Fermentas、蛋白 Maker6、PVDF膜7、脱脂奶粉8、一抗9、二抗试剂配制：(1)30%Acr/Bic(29 : 1)丙烯酰胺（Acr）29g甲叉双丙烯酰胺（Bic）1g超纯水至100ml溶解后

2、4C保存，使用时恢复至室温且无沉淀。(2)1.5mol/L Tris.Hcl(Ph=8.8)Tris (MW121.14)45.43g超纯水200ml溶解后，用浓盐酸调 pH至8.8，最后用超纯水定容至 250ml，室温下保存。(3)0.5mol/L Tris.Hcl(Ph=6.8)Tris (MW121.14)15.14g超纯水200ml溶解后，用浓盐酸调 pH至6.8,最后用超纯水定容至 250ml，室温下保存。(4)1.0mol/L Tris.HclTris (MW121.14)30.29g蒸馏水200ml溶解后，用浓盐酸调 pH至所需点（见下所示），最后用蒸馏水定容至 250ml，高温

3、灭菌 后室温下保存。PhHcl7.4约 17ml7.5约 16ml7.6约 15ml8.0约 10ml(5) 10%SDSSDS10g蒸馏水至100ml50 C水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。(6) 10%过硫酸铵AP(使用前加1000ul超纯水)过硫酸铵(AP)0.1g超纯水至100ml溶解后，4 C保存，保存时间为 1周。(7) 10*转移缓冲液甘氨酸(MW75.072.9g*10Tris (MW121.145.8g*10SDS0.37g*10甲醇200ml*10蒸馏水至1000ml溶解后室温保存，次溶液可重复使用35次(次溶液最好保存在 4度冰箱，最多使用 5次左右，不然影响转移效率)。(8) TBS缓冲液1 mol/L Tris HCl ( pH7.5)10mlNaCI8.8g蒸馏水至1000ml可以配制成10X TBS缓冲液进行保存，稀释10倍使用(9) TBST缓冲液20% Tween201.65mlTBS700ml混匀后即可使用，最好现用现配(10)电转缓冲液Tris (MW121.143

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