2015版药典沉降菌检测操作规程

1、1 / 7题目：洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期:2015年 月 日修订日期：年 月曰审核：日期：2015年 月 日生效日期：2016年 月 日批准：日期:2015年 月 日发放份数：版次：第1版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：阐述洁净室空气中沉降菌检测操作规程，保证药品质量，防止生产环境 对产品的污染。2.范围：适用于本公司洁净区（室）的沉降菌的监测。3.责任：沉降菌检测员。4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落：细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法

2、收集空气中的活性微生物粒子， 通过专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。4.1.3沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目， 以个/皿表示。4.2测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生 物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数， 以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基：高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定2 / 7培养皿:一般采用90mM 15mn硼硅酸玻璃培养皿。使

3、用前将培养皿置于121 C湿热灭菌20min。培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。将培养基加热熔化，冷却至约45C在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32C恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8C的坏境中存放。4.3.2测试时间：对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。433采样点数目及其布置：最少采样点数目：沉降菌的最少采样点数可按表1确定。在满足最少

4、测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见表2表1最少采样点数目面积（m）洁净度等级AB级C级D级v102-32210-v2042220-v4082240-v1001642100-V200401033 / 7注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室， 指的是房1可面积。表2最少培养皿数洁净度等级所需90mm培养皿数（以沉降4h计）A14B2C2D2采样点的布置：除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀布置。在日常监控时，那些与产品相邻近的区域，以及可能与产品直接接触的空气 及设备附近应考虑增加取样点和取样次数（与产品非接触区相比，这些区域应视 为关键区）:人员活

5、动频繁或人员较集中的区域也应视为关键区，需加强监控。取样点一股布置在趾离地面0.8-1.0m之间或操作平台的高度。取样时，取样没备会对气流产生干扰，取样时应避免可能对气流组织的干扰。尽量避免在回风口附近取样（距离Im以上），且测试人员应在取样口的下风 侧，并尽量少走动。434测试步骤：4.341采样方法:用无菌容器（如不锈钢储槽）将预先培养的培养皿（无菌平皿）带至待测区，将 培养皿取出，放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上， 盖后倒置。 检测时记下培养皿打开的起始时间和结束时 间。4 / 74.3.4.2培养：全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培

6、养。32C培养，时间为72小时。每批培养基应有对照试验， 检查培养基本身是否污染， 可每批选定三个培养 皿做对照培养。4.3.4.3菌落计数:用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，是否有遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上计数。4.3.5注意事项：测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 采取一切措施防止人为对样本的污染。对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。由于细菌种类繁多， 差别甚大， 计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔 细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染

7、的应剔除。测试状态:沉降菌测试前， 被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求， 静压差必须控制 在规定值内。沉降菌测试前，被测试洁净区己经过消毒。测试状态有静态和动态两种，在空调系统验流时、长期停产恢复生产前、设 施设备大修复产前进行静态测试，在日常监测时进行动态监测。测试人员：测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。静态测试时，室内测 试人员不得多于2个人。结果计算：用计数方法得出各个培养皿的菌落数。平均菌落数的汁算见下式：计算公式：5 / 7艺MiM=_n式中M为平均菌落数（CFUMi表示1,2,3,n号平皿菌落数；n表示平皿总数。6.标准：洁净度级别沉降菌平均菌落数（CFU皿）以4h计AV1B5C50D1007.结果评定：用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。若某洁净区的菌落数超过评定标准， 则必须对此区域先行消毒， 然后重新测 试两次，测试结果必须合格。8.偏差纠正一旦发现空气微生物监测结果超标，一般可以采取以下行