脑利钠肽前体proBNP作业指导书

1、XXXXXX 医院检验科免疫室 分析项目作业指导书Elecsys E 170/E 411脑利钠肽前体(proBNP)文件编号：LAB OP- MY020第1页，共6页版差A/0生效日期：2008-02-011. 分析原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：201d标本、生物素化的抗脑利钠月t前体单克隆抗体和钉(Ru)标记的抗脑利钠肽前体单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，

2、通过光电倍增管进行测定。Elecsys自动将标本产生的光电信号与从脑利钠肽前体定标液得出的Cutoff值相比较。2. 标本要求血清：按标准常规方法采集或用含有分离胶的试管。血浆：含肝素锂或肝素胺抗凝剂。标本稳定性：20C25c稳定3天，在2 8度可稳定6天，-20oC可稳定12个月。含沉淀的标本使用前需离心；不要使用加热 灭活的标本；标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试齐I：M 链霉亲和素包被的微粒(透明瓶

3、盖)，1瓶，6.5ml o粒子浓度0.72mg/ml ,含防腐剂。R1:生物素化的抗脑利钠肽前体单克隆抗体(灰盖)，1瓶，9ml,浓度1.5ug/l ,磷酸缓冲液40mmol/l , pH7.4含防腐剂。R2： Ru(bpy)32+标记的抗脑利钠肽前体单克隆抗体(黑盖)，1瓶，9ml。浓度高于1.7ug/ml ,磷酸缓冲液40mmol/l , pH7.4含防腐剂。校准品：Cal 1阴性定标液(白盖)，2*1mlCal 2阳性定标液(黑盖)，2*1ml质控品：Elecsys 脑利钠肽前体质控品 1和2 (PreciControl Cardiac )货号 03530477其他所需材料：Elecsy

4、s2010/cobas e 411分析仪需要：货号 11662988, Elecsys 系统缓冲液(ProCell ) 6X380S升货号 11662970, Elecsys 测量池清洗液(CleanCell ) 6X380毫升货号 11930346, Elecsys 添加剂液(SysWash 1X500S升货号 11933159, Elecsys 系统清洗液支架(Adapter for SysClean )货号 11706802, Elecsys 2010 反应杯(Assay Cup)货号 11706799, Elecsys 2010 吸样头(Assay Tip )E170/cobas e

5、601分析仪需要：货号 12135019,Elecsys系统缓冲液(ProCell M )货号 12135027,Elecsys测量池清洗液(CleanCell M ')货号 03023141,Elecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯(PC/CC-Cup货号 12102137,Elecsys反应杯 / 吸样头盒(AssayCups/AssayTips CombimagazineM)货号 03023150,Elecsys废物盒(wasteliner)XXXXXX 医院Elecsys E 170/E 411文件编号：LAB OP- MY020检验科免疫室第2页，共6页版本：A/0分析项

6、目作业指导书生效日期：2008-02-01货号 03027651, Elecsys 系统清洗液支架(SysClean Adapter M)各种分析仪均适用的材料货号11298500, Elecsys系统清洗液(SysClean) , 5X 100ml系统洗液4.仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411/e 601全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批脑利钠肽前体试剂盒必须用新鲜试剂和脑利钠肽前体Cal 1,Cal 2 定标一次。另外，以下情况需要再次定标：Elecsys2010 : 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）各种

7、分析仪均适用的情况：根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；根据规定进行多次标定。5.操作步骤（以E 170为例）5.1校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在 Application Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单 Calibration 中进行即可。3.2进入Calibration Status菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK®）或两点定标（TWCPOINT键）、跨距定标（SPAN!）、多点定标（FULL键）,再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE将定标物放入在 CalibrationCal

8、ibrator中定义好的位置，点Start,再点Start ,仪器开始定标。在 Calibration 一Status菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor 键看每个定标物的反应曲线。5.2样本检测程序：单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection ,在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点 SAVE®,样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection ,在Sequence No栏输入起始标本号，然后

9、选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点 REPEA T输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在 Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内，按START®,输入该批上机标本的起始标本号，再点START®,仪器自动开始推架检测标本。6.质量控制用Elecsys脑利钠肽前体质控品1和2（PreciControl ）。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法仪器会自动根据Cal 1和Cal 2的测

10、定值计算Cut-off值。每一个标本的结果以有反应性或无反应性以及Cutoff指数形式（标本信号/ Cutoff ）报告。8.参考范围从参考组的信息中得出最合适的域值125pg/ml。9.分析性能精密度严格按照修订方案的NCCLSEP-5A文件规则：每天6次，1伏；E170上批内精确性，n=21。使用试剂，人血清和质控测定得到重复性。SDR CV直如下表所示：Elecsys2010/e411批内精密度总精密度XXXXXX 医院检验科免疫室 分析项目作业指导书Elecsys E 170/E 411文件编号：LAB OP- MY020第3页，共6页版本：A/0生效日期：2008-02-01均值标准

11、差CV% 标准差CV%pg/mlpmol/lpg/mlpmol/lpg/mlpmol/l人血清117520.74.670.563.2人血清235541.98.6812.4人血清31068126人血清4496258686.910.31.811413.52.3proBN艰控143451.27.690.911.8proBN艰控2678180011813.91.814617.22.2E170批内精密度总精密度均值标准差CV%标准差标准差CV%pg/mlpmol/lpg/mlpmol/lpg/mlpmol

12、/lpg/mlpmol/l人血清147455.94.330.510.949458.328.73.395.8人血清2800594585101.1782792432137.884.1人血清3136821614118.513.980.913143155149057.83.7proBN艰控120825.51.740.210.820023.68.951.064.5proBN艰控23786447114.513.534002472144173.6分析灵敏度5pg/ml（0.6pmol/L）分析灵敏度只能区分空白与最低限。功能灵敏度50pg/ml （5.9pmol/L）功能灵敏度指NT-proBNP佥测在Cf

13、y20%寸的最低限。分析特异性Elecsys proBNP检测时，对于下列物质无交叉反应10 .干扰因素该方法不受黄疸（胆红素35mg/dl）、溶血（血红蛋白1.4g/dl ）、脂血（脂质4000mg/dl）和生物素30ng/ml干扰；接 受高剂量生物素（5mg庆）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血；不受类风湿因子干扰（1500U/ml）; proBN琳度在300,000ng/ml以内无钩状效应；在51种常用药上进行体外测试，未发现干扰。测试品和少数血清间潜在免疫相互作用引起的干扰风险已通过合适的添加剂降到最小。极少情况下，由极高浓度 Streptavidin 和ruthe

14、nium引起的干扰可发生。ProBN哈添加剂减小这些影响。11 .临床意义左心室功能不全发生在冠心病，动脉高血压，瓣膜疾病，原发性心脏病等疾病之后。如果左心室功能不全得不到治疗或进展，由于心脏猝死的原因，其潜在的死亡率较高。慢性心功能不全是由心脏泵功能受损引起的临床综合征。可以根据临床症状 进行分级。如：纽约心脏协会（NYHA分级为I, II , III , IV。临床检测及影像检测用于诊断左心室功能不全。利钠肽类物质 在心血管系统功能的控制中的意义已经得到证实。早期的研究显示利钠肽类物质可用于诊断与左心室功能不全相关的疾病。该类物质如下列：心钠肽（ANP ,脑钠肽（BNP , C-型利钠肽（

15、CNP o ANPBNP通过其促尿钠排泄、利尿的作用，以及作为 肾素-血管紧张素-醛固酮的拮抗物质，从而影响人体的电解质 -体液平衡。ProBN他108个氨基酸构成，主要由心室分泌。然后XXXXXX 医院检验科免疫室 分析项目作业指导书Elecsys E 170/E 411文件编号：LAB OP- MY020第4页，共6页版本：A/0生效日期：2008-02-01被裂解为具有生物活性的BNP （77-108氨基酸）和N-端proBNP （1-76氨基酸）。Elecsys proBNP式剂含有多克隆抗体，可以识别N-端proBNP （1-76氨基酸）上的抗原决定簇。左心室功能不全的患者血清/血浆

16、中的BN脓度增高，作为BN降解产物，无生物活性的NT-proBNFW度也同样增高。研究表明，NT-proBN阿以用于以下的诊断目的：提示左心室功能不全的预后；心源/非心源性疾病的鉴别诊断；血清/血浆NT-proBN冰平的变化，还可用于评价左心室功能不全的疗效；以及心肌重塑的评估。13.参考文献H留电士楠1. 廿一三1可丁制三Lflih y6NP 3PC MT-pr5etiF r由LpmHC斗恸 黑了巾巾小京F 口精二。reaft cih cn n Few卡.Pmitra二m"她七出匚七厂幻关 却s d骂yxn s就工racy讨a*uiy-aj3i5d mecttociVtUfnxao

17、e广 心力 士中号 N-ierr-jraJTgtrer- or;飞 卬pepru cf物r馋加田 f甲雄h 晔mwt i3re cryuarry. ecfi.xcr *try笠却eojs 旧c哈natru？rc 即口？ 5r口 sirs 飞tnrt” 随b抚 cm cren g 峨 zcc*4c#>w3 pn= " 曾3 心 cf NT-rzBNP m mu甘箕ctnj ano emsroenie BS- EurJ-lear =3 2CC4 6，；军入家4二日帆 y 曰曰+口 samn tf NT-p_cBP j'li BhP -feSBjnerr： 侬内城立泥 3 t

18、re碑cixefihj nr郭前 七匚m 花阻tttoi arc箝用里口' 仃 rta/T'alLre EurJ Hmr? Fad 20O:6.Gl;2&-e.5g"F拆r JCl： CLCrcR K ='1Pifi ire 招rES d LV ayudien cemjrryJ tadM Fa I Jie 2t0*:l0；4 ：Lpo. 4E Fjn»C 叮 st Sfdjt* !：* 三NP 泅3 NTuromiP 力 二内i用：； 仃 Peart 相口臣 Fev Pert Csnzict 二久二 2J；7,事总时i7 l-jr P. i.

19、 -tTurzrear1 arirc lei" nal rayljren： f4g imT-=10=nPi: 3r*r* -naner c（ sn:鳖 rpinenr. ctr iEcflrK：iT-二就G 'rtjjncr F力.笆 3 TTeatn'Ert cf rr taHuT ；u=e:明 F *F4 ari-ettr-n h fah istflinrc. xm iN-fiMi CCrctrfta>Tt=. Lfirc&t 2Ctt.S55.V25-33g 'rojjrrr tn er si Funs .旬rrt-飞rF v 5-T.肆

20、Fta-uri: 廿矍ty e ？l：'/：累t uwm： r i Msl ：T mirsem打巧包 -neimtri 如 ntsn Faiuf* ciiicxrr 金.也.710.建fuh 7,j, zij：ecg K er i TT EJftpai 匚“冷、前 C三；心心变 pco =i*E：r Gui Jt rt: rtr :ne cisgrtii： arfiTrywit irchRtc reat fs iur*.h髓u jouna :cci：e2 ，伯依it F.erif t 凶，Micro I： gvl vai: =G. fmpih j E：phtr 曰怅北 k al. =l

21、asTia 'JJeTrinal =f j-Era n harljnEftc XcMe *d Aoremir皿 I n h* Ne-jxrcmcriii P'W 内巾 cf 责 uierrcugr =箱丁 6 3恸 Pxcrocia 占箕 r/yotandgj irfc/con c岷u期5 J口at S7：i93V12. r* 日门口 aj. AJlsJ Mrrlurecc csr A rirrona今me defence i«529C5eT-770.俱 N G®r< A, 5a翼3梏L "4 CT悦推立仁01 Tifd门曲J2 N 仃如1叮

22、$什5m七 Fp-M ：T1 srttl 骂y J U£| Gl匕* 1 门招:fQ二4”14.1工 0 BCl J. 5W年<y拒W H9 esnge; AT Sgnn«r0?-j H. A rapd ana r” rem啪：前离馋 屹 E府ms neertor讨 exiracr： i ran Ll俅 S ' 能 1 学:给荆.15. Efsien M LwiSefhlw” 4 E, RM Csrr MJF, 工地4 A Helahox-ip -3, 门二华营口 Nm二tq Altai Mn用tb F9Eyd Ren >jj ."i Hurt

23、ing h。lrrr3：ir-门二x七:：二Edrs ":电）$ ?ni in htci-ta I-L-13UCln n*«r 16£7 79 '385.15. -K>e EuraMsn Ccct -/ MF门勘，EITLT'号号 AC Tm Miesct佬迷:，m犯：3 卯达I： Eu rmarr博打工三强锵17. MjTPJ FIdisx: am. Nncs VG,。九如？用 E2eE?一门J"i二nei?t归 irrnritnri 丁：-yal三*1庭-1环Fw ：r*7-pnOBN-& '- rrir+EMr

24、ara: mparteiLc n Ercccfln；1二优XXXXXX 医院Elecsys E 170/E 411文件编号：LAB OP- MY020第5页，共6页版本：A/0生效日期：2008-02-01二，-.7.- :，"二 二 1二.f.F =i-r-r ?=. N; I Pl.-ri N4*rmina- pro-arain natiiuiecic piptide and the ECG rn the assessment M I针-"中说阳。1寸 的寸Hk爪 a high riskpopdabwi EuHtirt J 19990:1736*1744.19 . As

25、her C. et al. MT pr&BNP Predicts Prognosis in Patients with Chronic Fteart Railufe. Heart 200339:879*8120 James SK. et al. NT pcoBNP and cttier Risk for the Separate Prediction of Mortality and S此eequenl Mccarcial Har廿ion in Patients with IhEtable Coronary Artery Disease GUSTO IV Siibsludy. Circ

26、ulation 2OG3j0a：275-2&l21 DaibarD. Davidson MCh Giltespe N, Oioy A4U. Lang CC, S+vr Y.etal. Diagnostic 咐Iue oi B-7ype Hatriire伍 Peptide Concefltralions in Patients With Acute Myocardal Infarcban. A J Candiol l996;7B-564-2fl7.22 . Mcorrag TA, Robb SO, Murdoch DR, Morton JJF Ford I, Morison CE. et ai. Biccnemical detect on 4 eft-venfriculaF systolic dnf'stjrc：i<jfl Lancet 1990.35l:&-13.23 veoKT et 1, Muticenfer evaluion or te Roche NT'ptoBNF atsay 三nd compui&on Io :hs G oei:& Tnigfi BMP as&sy Clr Chim Acta 2003,338:107-115.倒.C