细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证

1、有限公司GM管理文件题目细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证希y定审核批准制定日期审核日期批准日期颁发部门GMP、颁发数量生效日期分发单位企管部、质保部、生产部、工程部文件编码|共14 页第1 页、目 的：当建立微生物限度检查法时，应进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证,以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。、适用范围：细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证 二、责 任 者：质量标准分析方法验证小组。四、正 文：1、验证申请2、验证立项申请表3、验证方案4、验证方案的批复5、验证报告6验证报告的审批 7、验证证书文件编码第2 页细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证申请细菌、霉菌及酵母菌计数方法

2、验证申请。我公司细菌、霉菌及酵母菌计数方法 严格按照中华人民共和国兽药典2005年版质量标准分析方法验证指导原则进行, 今拟对细菌、霉菌及酵母菌计数方法进行验证。请予以批准！附：细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证小组成员名单 组长:成员:申报单位：质量标准分析方法验证小组申报日期：年 月 日文件编码第3 页验证申请批复立项部门申请日期立项题目要求完成日期验证原因类另S验证要求及目的立项部门负责人签名:主管部门意见签名：年月日验证部门意见签名：年月日总经理意见签名：年月日指定编制验证方案的部门:编制验证方案要求：验证完成要求及日期：总经理签名：年 月 日备注:文件编码第4 页细菌、霉菌及酵母菌计数方

3、法验证方案一、概述：1、名称：微生物限度检查法细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证报告。2、目的：当建立微生物限度检查法时，应进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。3、验证判断标准：中华人民共和国兽药典2005年版附录XIJ4、验证人员：质保部：负责对验证结果进行评价。化验室：负责验证情况的检测和监督。总经理：负责对验证结果进行评价。5、验证日期：二、验证1、 验证依据：中华人民共和国兽药典2005年版附录XIJ微生物限度检查法。 按供试液的制备和细菌霉菌及酵母菌计数所规定的薄膜过滤法及其有关要求进行。2、内容：（1）菌液所用的菌株传代次数为3

4、代，接种大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽抱杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，培养24小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，培养48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为60cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜 培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养 7天，加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将抱 子洗脱。然后吸出抱子悬液（用管口带有薄的无菌沙布能过滤菌丝的无菌毛细吸管） 至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含抱子数60cfu的抱子悬液。（2）验证方法验证试验进行了 3次独立的平行试验。A、试验组 供试液（I）纯化水1ml （U）药品名称（1：

5、 100） 10g,取供试液1ml过滤冲洗，在最后一次冲洗液中加入 60cfu试验菌文件编码第5 页B、 菌液组测定所加试验菌数。C、 供试品对照组取相当于供试品1g (1ml),按菌落数据计数方法测定供试 品本底菌数。D稀释剂对照组用相应稀释液0.9%无菌氯化钠，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml供试液60cfu，按薄膜过滤法制备计菌落数。(I)纯化水大肠菌液组B1 2D组菌回C组菌回供试品对照稀释剂对照收率%收率%组C组DD/B(A-C)/B123123> 70> 70埃希菌平均: 金黄色葡萄球菌平均:黑曲霉平均:枯草芽抱杆菌平均：> 70> 70白色念珠>

6、70> 70菌平均：文件编码第6 页(U)产品名称项目D组菌C组菌回供试品对照稀释剂对照回收收率%试验组A菌液组B菌株组C组D率%(A-C)/BD/B大肠> 70> 70埃希菌平均：金黄色> 70> 70葡萄球菌平均：枯草芽抱> 70> 70杆菌 平均：白色念珠> 70> 70菌平均：黑曲霉> 70> 70平均：以上试验同时取试验用稀释液 0.9%无菌氯化钠1ml,依薄膜过滤法操作，作为阴 性对照试验，均应无菌生长。(3) 验证方案的实施情况，及偏差情况分析。对于细菌霉菌及酵母菌计数方法验证方案应进行严格细致精密认真的实施，根

7、据统计结果，数据基本上应在允许偏差范围。(4) 培训：所有参与的人员在开始验证前应作充分的培训。(5) 结果判断由上表可知，在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率，(稀释剂对文件编码第7 页照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率)应均不低于70%试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数 的百分率）应均大于70%则按该验证供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌霉菌 及酵母菌数。（6）再验证当建立药品的微生物限度检查法时， 进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。若药品的组分或原检

8、验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。验证方案批复验证方案名称验证方案起讫日期验证 工 作负责验证部门人员参加部门人员参加部门人员参加部门人员检验部门人员验证方案概要结论验证小组负责人年月日验证小组成员会签生产使用部门意见负责人年月日验证管理部门意见负责人年月日总经理意见年月日备注细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证报告一、概述：1、名称：微生物限度检查法细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证报告。2、目的：当建立微生物限度检查法时，应进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。3、验证判断标准：中华人民共和国兽药典2005年版附录XIJ4、

9、验证人员：质保部：负责对验证结果进行评价。化验室：负责验证情况的检测和监督。总经理：负责对验证结果进行评价。5、验证日期：二、验证1、 验证依据：中华人民共和国兽药典2005年版附录XIJ微生物限度检查法。 按供试液的制备和细菌霉菌及酵母菌计数所规定的薄膜过滤法及其有关要求进行。2、内容：（1）菌液所用的菌株传代次数为3代，接种大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽抱杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，培养24小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，培养48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为60cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜 培养物至改良马丁琼脂斜面培养

10、基中，培养 7天，加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将抱 子洗脱。然后吸出抱子悬液（用管口带有薄的无菌沙布能过滤菌丝的无菌毛细吸管） 至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含抱子数60cfu的抱子悬液。（2）验证方法验证试验进行了 3次独立的平行试验。A试验组 供试液（I）纯化水1ml （U）药品名称（1： 100） 10g，取供文件编码第10 页试液1ml过滤冲洗，在最后一次冲洗液中加入 60cfu试验菌。B菌液组测定所加试验菌数。C供试品对照组取相当于供试品1g( 1ml),按菌落数据计数方法测定供试品本底菌数。D稀释剂对照组用相应稀释液0.9%无菌氯化钠，加入试验菌，使最终菌

11、浓度为每1ml供试液60cfu，按薄膜过滤法制备计菌落数。(I)纯化水123123大肠969697606060埃布困平均9660金黄色979796606060葡萄球菌平均9760枯草芽抱969696606060杆菌平均9660白色念珠959695606060菌平均9560969696606060黑曲霉平均9660供试品对照稀释剂对照回收收率%组C组D率%(A-C)/BD/B12312352525150515083.3373.33525053545452525280.6771.67545251525250505083.3373.33525052525251525286.6771.67525253

12、535251505185.0071.675351D组菌C组菌回项目试验组A菌液组B菌株12312大肠8989886060埃布困平均8960金黄色9190916060葡萄球菌平均9160枯草芽抱8989896060杆菌平均8960白色念珠8888886060菌平均88609089896060黑曲霉平均9060（U）药品名称供试品对照组C稀释剂对照组D3123123603838385251523852604041415050504150603839395151503951603837385252523852603940395051504050D组菌C组菌回 回收收率% 率 %(A-C)/BD/B8

13、6.6785.0083.3383.3385.0083.0086.6783.3383.3383.33以上试验同时取试验用稀释液 0.9%无菌氯化钠1ml,依薄膜过滤法操作，作为阴 性对照试验，均无菌生长。（3）验证方案的实施情况，及偏差情况分析。对于细菌霉菌及酵母菌计数方法验证方案进行了严格细致精密认真的实施，根 据统计结果，数据基本上在允许偏差范围。文件编码第12 页|（4）结论：由上表可知，在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率，（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）均不低于70%试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）均大于70%则按该验证供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌霉 菌及酵母菌数。日期:日期:结论人:批准人:(5)再验证当建立药品的微生物限度检查法时， 进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证， 以 确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。若药品的组分或原检 验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。文件编码第13 页验证报告批复验证项目名称验证起讫日期验 证 工 作负责验证部门人员参加部门人员参加部门人员参加部门人员检验部门人员验证结果报告概