YH-QMS-SP-305-A培养基配制使用操作规范

1、砂湖南佑华医疗用品有限公司 培养基配制使用操作规范版权所有，注意保名YH-QMS-SP-305Rev A第1页共5页制定：签名审核：签名批准：签名制定：审核：批准：版本号修改日期修改内容描述A2020.3.16首次发布砂湖南佑华医疗用品有限公司 培养基配制使用操作规范版权所有，注意保名YH-QMS-SP-305Rev A第2页共5页1.0 目的规定培养基的配制、使用、操作流程。2.0 范围适用于本公司所有培养基的配制使用操作。3.0 职责质量法规部：? 微生物检验员负责培养基的管理、配制、使用及操作。? 微生物检验员负责整个操作过程的记录。? 质量负责人负责数据的审核。4.0 工作要求4.1

2、培养基的验收? 收到培养基后，应检查包装情况和完整性，保质期是否符合要求。? 每批每种的培养基到货后，有提供灵敏度测试，核对灵敏测试报告。无灵敏度测试报告的进 行测试，合格后方可用于试验。4.2 培养基的储存严格按照培养基说明书储存培养基。4.3 培养基的开封对于开封的脱水培养基，应对其质量进行检查。质量检查包括：粉末的流动性、均匀性、结 块情况和色泽变化等。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变（结块、褪色等）时，则不应 再使用。4.4 培养基的配制? 严格按照厂商提供的使用说明配制。? 分装好的培养基及时密封后必须在配制当天（ 2h内最佳）进行灭菌处理。所有培养基都是 热敏感的，不要超时加

3、热。? 配制批号编号规则：配制日期 +两位流水号? 称量：称取适量的脱水培养基于合适的容器中。? 溶解：先加入少量的纯化水，充分混合，再加水至所需的量，并不停搅拌至完全溶解。? 分装：将配制好的培养基分装到适当的容器中。分装量不得超过容器容积的2/3。砂湖南佑华医疗用品有限公司 培养基配制使用操作规范版权所有，注意保名YH-QMS-SP-305Rev A第3页共5页? 标签：在已配制好的培养基瓶上注明：培养基名称、配制时间，并记录于培养基配制记录 表中。4.5 培养基的灭菌按照培养基说明书上的灭菌条件对培养基进行灭菌。培养基不能重复灭菌。4.6 培养基 的融化? 已凝固的培养基可放于沸水浴中或

4、使用相同效果的方法（如高压锅中的蒸汽）进行融化。? 培养基融化后放入 47 c 2C的恒温水浴锅或使用有相同效果的方法（如高压锅中的蒸汽）中保温，直至使用。? 注：经过高压的培养基应尽量减少重复加热时间，固体培养基的再融化只允许一次，避免过度加热。融化后的培养基应尽快使用，放置时间一般不应超过4h。4.7 平板的制备? 倾注已融化的培养基到灭菌平皿中，直至在平皿中形成一个至少2mm厚的琼脂层（直径90mm的平皿通常要加入 15mL琼脂培养基）。? 将平皿盖好皿盖后放在水平平面上使琼脂冷却凝固。4.8 培养基的培养及质量控制? 分装后的培养基要按配制批号随机抽取2PCS的样品进行阴性对照培养。应

5、无菌生长。? 用于需氧菌培养的培养基置30 C35 c培养不少于48h ;用于霉菌和酵母菌培养的培养基置2025 C培养不少于72h。4.9 制备好的培养基的储存制备好的培养基可储存于 2 C-8 c密闭容器中，其使用期限为一周。4.10 培养基的弃置? 所有已超过使用期限或已污染的培养基应不再使用。? 已使用的培养基（包括失效的培养基），放入高压灭菌器中进行高压灭菌处理（12lC,30min）后废弃。4.11 培养基的灵敏检查4.11.1 准备好制备合格的培养基。4.11.2 依照菌液说明制备菌悬液。?梯度稀释”示例：用移液器吸取1mL菌悬液原液加到装有 9 mL无菌生理盐水的试管中，震荡混

6、匀，即为“10菌悬液”；用移液器吸取1ml “101菌悬液”加到装有9mL无菌生理盐水的 试管中，震荡混匀，即为“1G菌悬液”；依次类推。砂湖南佑华医疗用品有限公司 培养基配制使用操作规范版权所有，注意保名YH-QMS-SP-3051Rev AI 第 4 页共 5 页2mL菌悬液，分别加到2块无菌空平皿内,选取合适的稀释梯度的菌悬液，分别用移液器吸取每皿1mL 。? 将冷却到45 c左右的相应培养基分别注入平皿中，与菌悬液充分混匀，凝固后倒置培养。 根据相应菌种设置培养温度及培养时间。? 菌悬液原液置于2-8 C冰箱内保藏。? 菌悬液在室温下放置应在 2h内使用，若保存在 2-8 C可在24h

7、内使用。黑曲霉抱子悬液可 保存在2-8 C,在验证过的贮存期内使用。4.11.3 培养基灵敏度检测? 根据 菌液制备”的计数结果，确定含菌量为不大于100cfu的稀释梯度。? 用0.9%无菌氯化钠溶液（或含 0.05% （ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液）将 菌悬液原液梯度稀释至含菌量为50100cfu的菌悬稀释液，作为试验用菌悬液待用。? 按照以下方法进行接种、培养。珞加生名称接种、培赤方法硫乙醇酸盐流体培养基（向氨国土甘笠广生） .取每管装量不少于12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌人 生抱梭菌各2支。另1支不接种作为

8、空白对照，30-35C培养不少于3天。逐日观察结果。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基同法操作。胰酪大豆月东液体培养基（TSB）:取每管装量不少于 9ml的胰酪大豆月东液体培养基（TSB）培养基7支，分别接种不大于100cfu的枯草芽抱杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支。另1支不接种作为空白对照，20-25C培养5天。逐日观察结果。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基同法操作。沙氏葡萄糖液体培养基：取每管装量不少于9ml的沙氏葡萄糖液体培养基7支，分别接种50100cfu的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌各2支。另1 支不接种作为空白对照，3035 C培养3天。逐日观察结果。同时，用

9、相应的对照培养基替代被检培养基同法操作。胰蛋白月东大豆琼脂培（ ISA培乔基）:取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌不大于100cfu ,分别注入无菌平皿中，立即倾注 ISA培养基，每株试验菌平行制备 2个平皿， 混匀，凝固，置 3035 c培养3天，计数。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基同法操作。砂湖南佑华医疗用品有限公司 培养基配制使用操作规范版权所有，注意保名YH-QMS-SP-3051Rev AI 第 5 页共 5 页沙氏葡萄糖琼脂培养基：取金黄色葡.萄球菌、铜假绿单胞菌、枯草芽抱杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各小于100cfu ,分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2个平皿，混匀，凝固，置 2025 C培养5天， 计数。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基同法操作。?空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管 （与加菌的对照培养基管）均生长良好，判该培