大鼠取材方案

1、实验大鼠取材方案取材内容 1. 取人皿汀脉L分页亠浆、亠涓-80 C保存。2. 取人.帚门叩献血 分岛血I青-80 C保存。3. 农人鼠巾 : 犬腺却 织制各甲状腺匚瓷观察标木乂余菲 . 沢浅氮讹廉保存峯比 .4. 战人就胸腺细次制卜比版汨次匸饥(虫肃 :木、免寢汎化规察呼 Y JU 汨织液殂沐桥 保存备用。5. 敗人和门厂汉 各F叽织1筈抚农琳？仁免疫汕牛观察标木比余汇汉分装液齟沐拣 保存备用。6. 敗,m即织 制幻匚汉匚後証瞬林仁免疫汨？化观护必 具余汀织分炷液也 冰冻保存备用。7. 敗人細灿脚却制紐川浏汉匚後証瞬标仁免疫汨？化观护必貝氏側分炷液也 冰冻保存备用。8. 取人闕扬系膜淋巴结落

2、织 制备畅聚慎淋巴 纭免疫纠化 斑察标木 贯余组织液氮冰拣保 存。9. 収人和惻却 制紐| 粘琪叽织电遵观嘤标 -仁免疫汕牛亦铀 ？讣 兀余纭织分蕙我 氮冰冻保存备 用。10. 取大鼠 空肠沮织 制金肠迫粘膜幼织 匚说观秦械 仁免疫汨 化观祭标木 英余组织分號 液氮冰冻保存备 用。11. 敗丿爲£可肠汨汉制徉场道牯慎汀汉匚槿死察杠木 .先疫汕比现察标木兀余泪汉分临液氮冰冻保存备用。12. 堰人讹肾纠织 制备芹仔纠親电镜观密标木 、免疫泪化观察标爪 右肾组织液氮冰栋探 存备用。13. 堰兴甌 肾匕腺组织 芹测制备肾匕 II 赴匚貌免疫绅 化观察标木 右切肾上腺掖氮彼冻保 存 备用。14

3、. 脱乂誠里凡汨汉 片啊匸备电筈观奧瑞木、免疫泪化规験对；木 左怛里丸液氮沐洙保辛备有。试剂及药品 戊巴比妥钠或 1 0%水合氯醛、 75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3 戊鲨磷酸器材备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、 手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、 蚊式血管钳、 眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离 2ml 、 1.5ml 、拣存管、那点钾真空采血佇、徽量移液器、高返离心机、注肘器10ml 、5ml、2ml 、丿二菌亍贡冰彩、护 : 令：、浪罠取材动物 Wistar 大鼠取材步骤 1. 脱材人氐孑視杂食门中竹2. 腹腔注射戊巴比妥钠 45mg/

4、kg 或 10% 水合氯醛 300mg/kg 将动物麻醉。用 5ml 的注射?昭 "IL 5.57 号针头。腹腔注射时右手特 注射器 定手的小拒和无 ?名拾孤 住人 窝的尾巴 显外三个手拒抓住人 鼠的颈部 便人蹴 対头部向 孔这样腹腔屮的器言就公 口然便向胸部 防止注射器刺入时抵 ?伤人呵、小肠竽器 官。进貂涮作轻柔防上虾伤腹部器官 : ：尤其是对于体重较小的大鼠 腹腔注射时针头可以生腹部 皮卞 穿行一小股原离 赧好是札腹部一侧逬针 穿过腹中线站 在腹部的另一側进入腹腔注射左药物麻缓缓抜出 针头并轻微旋转针头 防止漏液匚待 动物麻醉成功后仰卧位固定于解剖台。3. 空英丄引部農腹汽毛发

5、 75% 酒精消毒。4. 沿腹恻匚屮鍍丁刃茎上缘由卜一而I嗚开腹部反狀首卒剑突向两侧纯性剥开.皮肚与皮卜涓织晁嵌腹至浅川氐沿IIMt性别离腹對JL肉剪开腹？旗躺腹腔将肝胪向上融起 显嵌门并游离静牒将剪成 斜 11的集乙烯营尖绘廿向肝门方向抽入门苗做 抖取门静脉血2ml兀卸朮订犬.灯H节;灯仏将抖取门讪 mu人一次怦.茨心芳 益；I 了置过熨4 国心3000-3500/min10分种？收匕匕沽液 分:吏-80摄氏度保存备用。5. 巴门F1DI的M吐/ 丿: | :说钊利工卜T L飞讯拽M旳闵？织；卜沟钝锐结合:7在卜肢腺补wq仙.丄.-;?. T.r'胪点芳二盛?；皿卞叽汀卞占养皿中涮洗

6、去血迹。 切取胰腺体部约 1mm x 1mm x 1mm 组织 3 二: 3 ；龙了讦陵也沈冲福尔鸟林液 屮固定 其余组织全部液氮冰冻 保存备用匚牛理总水 帖洗援作器械 ?6. 別眾胛I自汨纭 放置脾脏于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。从脾脏一端切取 5x 5mm W 當厂呼 匸 旷二萃; "i 自二: 二; 汽 月 J 1mm x 1mm x 1mm组织33氏玉陰:吐AM际(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4龙H二:;；上创注液氮冰冻保存备用。7?从剑阳崔加卜卫卅文m 拡卜向扶测饨性剥尸！辺心哎卜卿 崔了汕宦忠：诫工空。沿币屮剪幵胸卿、側膜 防止损伤胸腺的胸腔阮器:

7、暴肃心脏 找戛I?卜-腔静脉后惟认右心烏 5ml 注射器直接穿刺右心房最大量抽取外周回心静脉血。加4ml 静脉血入肝枭禅真亍采击疔京和置 10 兮匸 4*离心 3000-3500/min 5 分钟吸出 上 清液 分装-80 摄氏度 保存备用。 2ml 参加普通真空 XlUT 氏祁忻置汕複 4C 离心3000-3500/min5 分种吸出上沽液少装 -80 摄氏度保存备用。8. 庇卄肠系慎 丁肠系膜根邮计找淡蓝兰紿牡样 淋口结织织 剔取扬系 . 膜湫巴紀数枚 hi置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。取局部淋巴结组织浸入多聚甲醛或福尔马林液屮同定 贞余织织放置丁 -无菌拣耳管 洩氮冰冻保存备

8、用,心管5ml、9上端丁贯门 上端结扎食管 卜皓首畅远端沽扎口肠末端 钝锐结仟兀整収 l<W.i?J3o10. 离时肢J蒂怕希川 熾端姑九沿鬥人看削卄I列盐水沅洋 那么燈1mmx 1mm x 1mm 胃窦和胃体黏膜组织各 3 京 3 戊为;: 磷燮盐缓冲液 (PBS0.01mol/LP pH7.4)或 4 戊 週上 咧取比的 0.5-1.0cm 包含胃窦、胃体组织 1 糸 息人禺遼屮舀匚殳忏尔马林液屮同定 其余胃组织底置丁 -无阑冻徉管 液氮冰袜探存 峯用 .11. 距 treitz 韧带 10cm 处切取空肠 10cm 冋肓不 10cm 处切取回肠 10cm牛. 口盐水洗济切取约 1m

9、m x 1mm x 1mm 空肠和回肠黏膜组织各 33:. 文喀谏耳芟盐缓冲液全部啟置丁无菌拣存管液氮冰冻保存备用312. 沽L哪:切匚管道杀统1:说忙fr: ； L' ； v<4<Hk.? 口脏，般.无由卅匚 栄业水 冲汎 納烏其収叶和十约 1mm x 1mm x 1mm组织3决3戊 龙滴酸盐级冲液 (PBS0.01mol/LPpH7.4)或4戊舌凶H芹比，汩织浸人另渥中鲨攻荷尔马林液屮固定左叶J卜组织称尘记录分装盼全部肢置丁 无菌拣存管液氮冰冻保存备用。13. ：腹洪外熾汩袖 狀测石我亍出脏 衣li比氷卄腹啊子匚在肾脏的前方内侧和腰卜次的腹面相援 处寸找到皆上腺:右侧肾

10、上腺呈豆状 长轴指向后内侧 方测卵 圖形f轴指向腹 外侧。钝锐结合旅取 两ft!肾匕腺。方侧骨上腺浸入參 聚甲酵或雀尔 马林液右叶肾r腺放置于 无菌拣存管 液氮冰探保存帛14. 萌开汗腹膜姑扎剪断双 侧肾门钝锐汁介眼卜一双切？ f肌剔除肾堆吩膜织织股置/盛有无菌匚珅盐水的堆养山中涮就去血匹J；中间肾门部横行切卄片侧陰脏 切取上端肾脏1mm x 1mm x 1mm组织33 !殳 舀暁酉；盐缀冲箱(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4 戊吾同空 %" ' '. 、.菌冻存管心氓;汛浜卫存岛巾:15. 大鼠的阴囊是由肛门腹侧会阴部皮肤下垂所形成的囊袋。性成熟的大鼠睾

11、丸和附睾下降入？ 1駆续表川出并突向Q方小心剪开双侧胡克叮见瑚闘形卑丸钝锐结0 ?舷双侧睪丸、附睾 欣置丁？盛有 无菌上理 盐水曲培养皿屮涮洗去血迹 16?爼门钱述锤貯"别离勺心川样 口气借 向上-匚即屮默氐S+捉作 切収仏兀半状软骨在内的甲状腺。切取约1mm x 1mm x 1mm组织各3典3戊 ;磷般盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊一酵固 述共余组织仝部浸入务聚甲醛或袒尔马林液中固定。切取左侧睾丸下端1mm x 1mm x 1mm组织3 .袞3 .戊一乍磷腹盐绽冲液液屮固定 右侧旱丸组？织欣萱丁 无菌拣存管 掖氮冰冻保存备?也17. 丈反翩丘=1两心匚成 敢养辿一们！兑£邹井位長.腔前纵爲1隙世门财第基底部附着丁心也腹百的前匕方。找顿结合兀整联卜胸腺败置丁盛有无 两牛理盐水知培养口屮涮洗去血迹。切取胸腺 1mm x 1mm x 1mm组织3-映3戊Hi;琲桂盐缓沖彼(PBSOQmol/LP pH7.4)或4 戊一 5i;同定切取胸腺5mm x 5mm x 5mm组织1块浸入多聚甲蘇戍福尔马林液屮固定其余组织置于无菌冻存管液氮冰冻保存峯用。18. 密牟以卜人骰心总洱很剪开别离双侧肺脏置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。切取左肺 1mm x