《法医学中的酶型》ppt课件

1、 酶型 Isoenzyme 酶型的定义又称同工酶：分子构造不同，但催化同一 生化反响的一组酶。酶型的分类n多位点基因控制的同工酶：如 LDH,PGM。n单位点复等位基因控制的同工酶：如 EAP，EsD。n遗传变异体同工酶：点突变所致。如G6PD。n次级同工酶修饰同工酶：脱氨、乙酰化等所致。酶的一些特点n酶的本质是蛋白质n酶促反响的高度专一性：催化特定的底物。n酶反响的最适PHn酶反响的最适温度n酶多为水溶性n酶多不耐热电泳检测酶型的根本原理n传统电泳：等电点、分子大小。n等电聚焦电泳：等电点。n影响电泳的因素：电场强度、缓冲液PH值、离子强度、胶浓度、电泳时间、产热等。红细胞酸性磷酸酶Eryt

2、hrocyte Acid Phosphatase.EAP概况 EAPACP1、PAP、ACP2 EAP是第一个被报道具有多态的酶。 单亚基构造，基因定位于2P25，等电点为5-7，酶反响的最适PH为5.5。分型 1963年Hopkinson, Nature杂志上报导EAP可分为A、BA、B、CA、CB五种型。进展了家系调查，有三个共显性等位基因：PA、PB、PC。 在东方人群中，常见的基因为：PA、PB；常见的表型为：A、BA、B。 另有多个稀有基因的报导。EAP表型的检测 1、1%琼脂糖凝胶电泳 2、聚丙烯酰胺凝胶电泳 显色：4-甲基伞形酮磷酸盐EAP- 4-甲基伞形酮长波紫外灯下-兰色荧光

3、。磷酸葡萄糖变位酶Phosphoglucomutase,PGM概况 PGM1其基因在1号染色体 PGM2其基因在4号染色体 PGM3其基因在6号染色体 PGM4其基因未详 红细胞中只有PGM1与PGM2，活性各半。PGM3主要在胎盘中。PGM4在哺乳期女性乳汁中。 PGM1的等电点为5-7。酶反响最适PH为8。分型 1964年Spencer, 淀粉凝胶电泳，PGM可分出a,b,c,d,e,f,g七条带。 分为三型：PGM1a,c、PGM2b,d PGM2-1a,b,c,d。 e,f,g几乎每人都一样。 1965年Hopkinson,发现e,f,g带亦存在变异。 前者称为 PGM1，由PGM11

4、、PGM22二个共显性等位基因控制，三种常见表型。 后者称为PGM2。 1976年Bark，用等电聚焦电泳，将PGM1分出十种常见的表型。 分别由PGM11+、PGM11-、PGM12+、PGM12-四个共显性等位基因控制。PGM1表型的检测 1、 淀粉凝胶电泳 2、聚丙稀酰胺凝胶等电聚胶电泳 显色：G1PPGM、G16P-G6PG6PD、NADP-6PG+NADP2 NADP2+MTTPMS-兰色。脂酶DEsteraseD,EsD概况 脂酶共有二十余种，可分为特异性脂酶和非特异性脂酶。 红细胞中的脂酶有A、B、C、D四种，只有EsD具有多态性。 等电点为4-6，酶反响的最适PH5.5。分型

5、1973年Hopkinson，分为三种常见表型。 由ESD1、ESD2二个共显性等位基因控制。ESD表型的检测 1、1%琼脂糖凝胶电泳 2、等电聚焦电泳 显色：4-甲基伞形酮醋酸盐ESD-4-甲基伞形酮长波紫外灯下-兰色荧光。乙二醛酶IGlyoxalaseI,GLOI概况 双亚基构造，分布广泛，红细胞中活性最高。 等电点为4.3左右。 酶反响的最适PH为6.5。 基因位点与HLA基因毗邻6P213。分型 1975年Kompf报导，三种常见表型。由GLOI1、GLOI2二个共显性等位基因控制。GLOI表型的检测 琼脂糖/可溶性淀粉混和凝胶电泳1/0.7显色： 甲基乙二醛GLOI、复原型GSH-氧

6、化型GHS。 淀粉+碘-兰色复原型GSH可使兰色褪掉。谷丙转氨酶Glutamic Pyruvic Transaminase GPT概况 催化谷氨酸与丙氨酸互换。 双亚基构造。 酶反响的最适PH为8左右。 三种常见表型，由GPT1、GPT2 二个共显性等位基因控制。GPT表型的检测 混合淀粉凝胶电泳 显色： 1、丙氨酸GPT-谷氨酸GLD、NADP-NADPH2MTT、PMS-兰色。 2、丙氨酸GPT-谷氨酸+丙酮酸LDH、NADH-乳酸+NAD无荧光。 血痕酶型检测血痕酶的改变有三方面： 1、酶活性丧失不可逆。 2、潮湿环境下，脱氨，蛋白负电荷增加， 无法正确分型仍有活性。 3、-SH被氧化，

7、形成二硫化合物，可逆性 失活可用巯基复原剂复活。 0.18M巯基乙醇；0.05M二硫苏糖醇。 血清蛋白型Protein Polymorphism结合珠蛋白Haptoglobin,Hp概况 糖蛋白，三种常见表型： Hp1-1,Hp2-2,Hp2-1 另有一种变异型为 HP0型，在人群中的比率为0.81-2.32%。 等电点为4.1-4.2。Hp表型的检测 5%聚丙烯酰氨凝胶圆盘电泳 标本处理：血清+血红蛋白液+蔗糖 显色： Hp*珠蛋白+联苯胺、过氧化氢- 兰色。血痕Hp表型的检测 1、氯仿抽提血痕标本 分三层：上层Hp-Hb复合物 中层变性Hb 下层氯仿 取上层液体加样。 2、不连续电泳 上层

8、为4.5%的浓缩胶，下层为8%的别离胶。 3、用抗Hp抗体沉淀血痕Hp。型特异性成分Group Specific Component,Gc概况 球蛋白，三种常见表型 ： Gc1-1，Gc2-2， Gc2-1 等电点为4.8-5.1 与维生素D结合，参与钙离子的代谢。 与肌动蛋白结合，纤维状球状，防止其在血液中聚合。Gc表型的检测 5%聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳 标本处理：血清+蔗糖内含溴酚兰。 显色：氨基黑染色 考马斯亮兰染色 银染血痕Gc表型的检测 1、免疫电泳 凝胶电泳后，在胶一侧挖槽，加抗体，形成沉淀弧。 2、免疫固定 抗体浸泡电泳后的凝胶，生理盐水洗去全部可溶性蛋白，蛋白染色法染色。转铁蛋白transferrin,Tf概况 球蛋白，只有TfC具有多态性，三种常见的表型： TfC 1-1， TfC 2-2， TfC 2-1。 等电点为5.5左右。 参与铁离子的代谢。TfC表型的检测 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳 标本处理： 1、血清+神经氨酸酶 2、血清+硫酸亚铁铵 显色：蛋白染色。GmGamma Chain Marker,Gm概况 Gm是IgG H链C区上的抗原类型。至少有25种抗原。 1956年Grubb，发现抗D抗体