菖龙丹对沙土鼠脑缺血再灌注脑组织丙二醛等的影响

1、    菖龙丹对沙土鼠脑缺血再灌注脑组织丙二醛等的影响        摘要：为研究菖龙丹对沙土鼠脑缺血再灌注脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响。首先阻断沙土鼠双侧颈总动脉血流10 min，造成缺血再灌注模型。术前术后予以菖龙丹灌胃。再灌注24 h后，测定脑匀浆SOD及MDA含量。结果：缺血再灌注后，脑匀浆MDA明显升高，SOD显著降低；菖龙丹给药组MDA含量下降，SOD活性提高，差异显著。提示菖龙丹对缺血再灌注脑损伤有保护作用。关键词：菖龙丹；脑缺血；

2、再灌注损伤；超氧化物歧化酶；丙二醛中分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1000-5633(2000)01-0010-02 脑血管病是人类三大死因之一，是致残的重要原因。近年来的研究表明自由基与脑血管病的病因及发展有关，对再灌注后的损伤尤为明显1，2。本实验观察了菖龙丹对沙土鼠脑缺血再灌注后脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响，研究菖龙丹对脑缺血再灌注损伤的保护作用，并对其作用机制进行探讨。1材料和方法1.1实验动物及分组沙土鼠60只，由浙江医科院实验动物中心提供。雌雄各半，体重6070 g，随机分为模型对照组、假手术组、脑复康对照组、菖龙丹治疗组。菖龙丹治疗组按

3、应用剂量又分为菖龙丹、 3个不同剂量组。1.2方法1.2.1动物模型制作及实验方法用2%戊巴比妥钠腹腔注射(45 mg/kg)麻醉后，分离暴露出双侧颈总动脉，用动脉血管夹同时夹闭双侧颈总动脉，阻断血流，夹闭颈总动脉10 min之后去除动脉夹，缝合颈部切口，造成缺血再灌注模型。假手术组仅分离双侧颈总动脉，10 min后即缝合颈部切口。菖龙丹治疗组于术前3 d和术后即予菖龙丹混悬液灌胃，3个剂量组分别为7.53 g/kg、15.47 g/kg、23.20 g/kg。模型组和假手术组术前术后仅给予等量生理盐水灌胃，脑复康组予以脑复康灌胃，剂量为0.5 g/kg体重。灌胃量各组均为1.5 ml/100

4、 g。1.2.2SOD和MDA检测方法再灌注24 h后，快速断头取脑，用冰生理盐水冲洗，除去血液，滤纸试干，称重，电动捣碎机研磨制成10%的组织匀浆，离心取上清。SOD活力测定用酶化学发光法3，MDA含量测定用硫代巴比妥酸比色法(TBA)3。具体操作按测试盒(由南京建成生物工程研究所提供)说明书进行。匀浆液蛋白定量按lowry4法。1.2.3统计方法多组间比较采用多样本方差分析。经方差齐性检验，方差齐用F检验，q检验，不齐用秩和检验。2结果模型对照组脑组织SOD活性明显降低，MDA含量显著提高，与假手术组比较，差异显著(均P0.01)；各用药组与模型对照组比较，MDA含量显著下降(P0.01)

5、，SOD含量除脑复康组和菖龙丹小剂量组有上升趋势(P0.05)外，其他用药组均明显提高(P0.01)；菖龙丹大、中两剂量组降低MDA、提高SOD的效应与假手术组接近(P0.05)；菖龙丹大剂量组能显著提高SOD(每毫克蛋白中)，明显降低MDA，与脑复康组比较，差异有显著性意义(P0.01或P0.05)。结果表明菖龙丹大剂量组提高脑缺血再灌注模型沙土鼠脑组织SOD活性、降低MDA含量的效果明显优于脑复康，见表1。3讨论自由基广泛存在于生物体内，正常情况下对机体起保护作用。同时体内也存在一整套自由基清除系统，以使体内自由基的生成与清除之间保持动态平衡。但在某些病理状态下，特别是组织的缺血再灌流时，

6、产生过多的自由基，超过机体清除的能力时，则可对机体自身组织和细胞起破坏作用。表1菖龙丹对脑缺血再灌注沙土鼠脑匀浆SOD、MDA含量的影响(<"1 (850 bytes)" align=absMiddle src="/med/cano/201003/20100319193721555" 14 17>±s)组别nSOD(nu/mg)MDA(mmol/mg)假手术组101.706±0.1011.023±0.199模型对照组101.394±0.1351.894±0.298菖龙丹101.684±

7、;0.0821.108±0.311菖龙丹101.642±0.1571.276±0.239菖龙丹101.518±0.1021.406±0.215脑复康对照组91.462±0.1441.400±0.264     注：与假手术组比较P0.05，P0.01；与模型组比较P0.01；与脑复康组比较P0.05，P0.01 自由基对机体损伤是由于分子中含有不配对电子，其性质异常活泼，最易与脂质反应使其发生脂质过氧化，使生物膜的流动性降低，影响细胞功能，特别是生物膜上带有不饱和键的脂肪酸，是自由基攻

8、击的最常见部位。脑组织中不饱和脂肪酸含量最高，最易受自由基攻击。故更易发生脂质过氧化反应并形成大量脂质过氧化物(LPO)，LPO本身代表着缺血后自由基对组织损伤的程度，间接地反应缺血后脑组织自由基所生成的量。我们所测的是LPO稳定的代谢产物MDA，结果显示全脑缺血再灌注后MDA含量明显高于假手术组(P0.01)。这与文献报道6是一致的。SOD是体内产生的一种自由基清除剂，当体内自由基产生增多时，它与超氧阴离子反应产生过氧化氢，再由谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶作用产生水，这样使自由基得以清除，同时被消耗而使其活性下降。实验表明全脑缺血再灌注后SOD活性明显低于假手术组，证明了脑缺血再灌注可产生

9、大量的自由基，而使MDA含量升高，并且消耗了SOD而使其活性下降。菖龙丹是中药复方制剂，其主要成分有田七、石菖蒲、菟丝子、淫羊藿等，其中淫羊藿能提高机体免疫功能和抑制脂质过氧化6，7。本组资料显示，3种不同剂量的菖龙丹用药组与模型对照组相比，各组MDA含量显著降低(P0.01)，SOD活性升高，说明菖龙丹可通过减少自由基的生成与加速自由基的清除两方面起作用。总之，菖龙丹可减少沙土鼠脑缺血再灌注自由基的产生，抑制脑组织脂质过氧化反应，从而减轻缺血再灌注引起的脑组织损伤，有利于脑缺血后神经功能损害的恢复，对脑缺血有治疗作用，值得进一步研究。基金项目：湖南省科委资助项目（02-962-07）作者简介

10、：周小青（1957-），男，湖南浏阳人，湖南中医学院教授，博士，1987年赴英国伦敦大学皇家医学院进修，主要从事中医诊断学研究。作者单位：周小青（湖南中医学院 诊断研究所，湖南 长沙410007）张秋雁（湖南中医学院 诊断研究所，湖南 长沙410007）邓冰湘（湖南中医学院 诊断研究所，湖南 长沙410007）刘建新（湖南中医学院 诊断研究所，湖南 长沙410007）邓常青（湖南中医学院 诊断研究所，湖南 长沙410007）苏剑锋（耒阳市8730部队 医院，湖南 耒阳421800）参考文献：1Matsuyama T,Shimizu S,Nakamura H,et al.Effect of re

11、combinant superoxide dismutase on manganese superoxide dismutase gene expression in gerbil hippocampus after ischemiaJ.Stroke,1994,25:1417.2范子体，郑肖创.人参对脑缺血大鼠中枢胆碱能系统的改善作用J.中日友好医院学报，1991，(5)：204.3Ohkawa H,Wadar,Wodar R,Ogata J,et al.Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction.AnalJ Biochem,1979,95:351.4李仪奎.中药药理实验方法学M.上海：上海科学技术出版社，1996.223.5冯加纯，饶明俐，张