黄芩茎叶总黄酮对AD大鼠模型海马神经元超微结构的影响及抗氧化

1、黄芩茎叶总黄酮对AD大鼠模型海马神经元超微结构的影响及抗氧化作用<                            作者：王瑞婷 张建新 董雅洁【摘要】   目的 探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对AD大鼠模型学习记忆功能、海马神经元超微结构变化的影响及抗氧化作用。方法 采用Morris水迷宫实验观察大鼠学习

2、记忆能力，电镜观察海马神经元的超微结构;检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)含量。结果 模型组大鼠2 min内穿越平台区域的次数较对照组明显减少(P<0.01)，在平台象限停留的时间明显减少(P<0.01)，给药组大鼠穿越平台区域的次数较模型组明显增多(P<0.05)，在平台象限停留的时间较模型组明显延长(P<0.05)。对照组海马神经元超微结构正常，模型组损伤严重，给药组较模型组损伤减轻。模型组SOD、CAT、GSHPx含量较对照组明显降低(P<0.05)，给药组较模型组明显升高(P<0.05)。结论

3、SSTF对海马注射A25-35引起大鼠学习记忆能力降低及海马神经元超微结构损伤具有保护作用。其机制可能是增强大鼠体内抗氧化酶活性，从而减少活性氧对神经元的损伤。 【关键词】   淀粉样蛋白;黄芩茎叶总黄酮;超氧化物歧化酶;过氧化氢酶;谷胱甘肽过氧化【Abstract】 Objective To investigate the protection of scutellaria baicalensis stemleaf total flavonoid (SSTF) on memory deficits, neuron ultrastructure damage induced by b

4、ilateral injection A25-35 on rat hippocampus and its antioxidative mechanism. Methods 30 male Wistar rats were randomly divided into three groups, 10 rats for each group. The distilled water or SSTF (50 mg·kg-1·d-1) was administered (ig, once for 20 d) to the control and model groups or SS

5、TF group. On the 8th day, saline or A was injected to bilateral hippocampus of the control or the model and SSTF groups . Morris water maze test was used to evaluate the memory on the 15th day, once for 5 d. On the 20th day, the platform was removed to observe the times of rat passing through the pl

6、atform area and the time staying in the platform quadrant in 2 m. H7500 electron microscope was used to observe the ultrastructure of hippocampus neuron. Blood was collected to detect the levels of SOD, CAT, GSHPx. Results The times passing through the platrorm area of model group was significantly

7、decreased (P<0.01) and the staying time in the platform quadrant was decreased than that of control group(P<0.01) while the time were significantly increased of SSTF group than those of model group (P<0.05, 0.01). In the model group , cellular membrane was irregular , discontinuation, nucle

8、ar membrane was cloudiness. Endolysis, a large area of boundless, was obviously decreased cellular organelle, degenerated mitochondria and apoptosis neuron was also appeared in model group. In the SSTF group, the discontinuation cellular membrane was not obvious , nuclear membrane was regular. Less

9、endolysis, more mitochondria, stimulated lysosome and less apoptosis neuron were appeared in SSTF group. SOD, CAT and GSHPX in model group were significantly decreased compared with those of control group while those in SSTF group were significantly increased compared with those of model group. Conc

10、lusions SSTF is beneficial for improving the abilities of learning and memory, attenuating the neurodamage induced by bilateral injection A2535 .The mechanism of SSTF might be to increase the activity of antioxidase, thereby decrease the damage of ROS to neuron.【Key words】 Amyloidbeta prot Ei n; Scu

11、tellaria baicalensis stemleaf total flavonoid(SSTF);Superoxide dismutase (SOD); Catalase(CAT); Glutathione peroxidase(GSHPx)阿尔茨海默病(Alzh EI mers disease，AD)，是一种以进行性认知功能障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病，与增龄密切相关。A在AD发病过程中起重要作用，A可能通过诱导氧化应激反应、产生氧自由基、诱导细胞凋亡等机制使中枢神经元受损。目前开发抗痴呆药物主要围绕其发病机制寻找分子 治疗 靶点及抗氧化中药1，2。黄芩茎叶总黄酮(SS

12、TF)由我校中药研究所提取，大量研究显示其具有抗氧化、抗免疫、保护心肌缺血再灌注损伤、改善脑缺血等作用3。本实验采用大鼠双侧海马注射A致大鼠痴呆模型，观察SSTF对大鼠学习记忆、海马神经元损伤的影响及可能的作用机制，为抗氧化植物药用于AD等中枢神经退行性疾病提供实验依据。 1 材料与方法 1.1 试剂和仪器 A25-35由Sigma公司提供，超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)试剂盒由南京建成生物工程研究所提供，SSTF由承德 医学 院中药研究所提供(纯度61.88%);其他试剂为分析纯。水迷宫仪器购自 中国 医学 科学 院药物研究所，日立H7500

13、透射电镜。1.2 实验动物 雄性Wistar大鼠30只，1012 w，体质量(280±20)g，动物证号803142，由河北医科大学实验动物中心提供，标准 环境 下饲养; 自然 光线，自由进食水。1.3 方法1.3.1 实验分组及处理 将Wistar大鼠随机分为3组，每组10只，3组均灌胃20 d，1次/d;对照组、模型组灌胃蒸馏水，给药组灌SSTF(50 mg·kg-1·d-1);第8天对照组双侧海马各注射5 l的无菌生理盐水，模型组及给药组注射凝胶态A25-35 5 l(含10 g)。3组大鼠于第15天进行水迷宫实验。1.3.2 动物模型制作 大鼠灌胃第8天，

14、用4%水合氯醛腹腔麻醉(1 ml/100 g)，固定于脑立体定位仪(江湾1号C型脑立体定向仪)，于AP 3.5 mm，ML±2 mm，DV 2.7 mm定位海马，10 min内缓慢注入A。1.3.3 Morris水迷宫行为学实验 圆形不锈钢水池，直径120 cm,高60 cm，目标象限的中央放置一直径为10 cm、高23.5 cm的圆形隐藏平台，水池中水面高于平台1.5 cm，水温(21±1);连续测5 d，第6天撤去平台，观察大鼠2 min内穿越平台区域的次数及在平台象限停留的时间。1.3.4 血清SOD、 CAT、 GSHPx检测 大鼠麻醉后，经心脏取血，于4，4 00

15、0 r/min，离心10 min，取上清，具体操作方法按照试剂盒说明书。1.3.5 电镜标本制作 动物麻醉后，经左心室快速灌注250 ml生理盐水，然后灌注4%多聚甲醛、2%戊二醛250 ml(先快后慢)进行固定，取脑，震荡切片机切片，200 m/片，光镜下选取有阳性结果的切片，硅化玻璃包片，刻下阳性区域，帖在树脂块上，超薄切片，铀、铅双染，日立H7500电镜观察并拍片。1.4 统计 学处理 数据用x±s表示，采用SSPS12.0 软件 进行单因素方差分析。 2 结 果 2.1 SSTF对A致大鼠痴呆模型学习记忆下降的影响 水迷宫第6天撤去平台，2 min内模型组大鼠穿越平台区域的次数较正常对照组明显减少(P<0.01)，在平台象限停留的时间明显少于对照组(P<0.01);SSTF组与模型组相比穿越平台区域次数明显增多(P<0.05)，在平台象限停留时间明显延长(P<0.05)。 见表1。2.2 SSTF对海马神经元超微结构改变的影响 见图1。正常对照组海马神经元核膜清晰、连续，常染色质丰富，核仁大、呈网状，核质均匀，粗面内质网、核糖体丰富，线粒体膜光滑，嵴板状或管泡状，可见一组高尔基体;