代写医学论文 冬凌草中总黄酮提取工艺研究与含量测定

1、代写医学论文 冬凌草中总黄酮提取工艺研究与含量测定    【关键词】  冬凌草；,总黄酮；,正交实验摘要：目的研究冬凌草中总黄酮的提取工艺并测定总黄酮的含量。方法采用正交实验进行提取工艺的优选。紫外分光光度法测定总黄酮的含量。结果采用最佳提取工艺测定了不同部位不同产地的冬凌草中总黄酮含量，花中总黄酮含量最高，不同产地含量差别比较大。结论该方法简单、可靠、稳定、重现性好。关键词：冬凌草；  总黄酮；  正交实验Extracting Technology and Determination of the Total Flavon

2、oid of Rabdosia rubescens (Hemsl.)HaraQU Hongli , KE Yu , YIN Peng ,LIU Hongmin*（New Drug Research & Development Center, Zhengzhou University, Zhengzhou 450052 ,China）Abstract：ObjectiveTo study the extracting technology and content of flavonoids of Rabdosia rubescens (Hemsl.) Hara. MethodsThe co

3、ntent of total flavonoid was determined with ultraviolet spectrophotometry at 504nm. ResultsThe content of total flavonoid differs among different sources and is the highest in flower. ConclusionThe method is simple, reasonable and stable.Key words：Rabdosia rubescens(Hemsl.) Hara;   Total

4、flavonoid;   Orthogonal experiment     冬凌草Rabdosia rubescens (Hemsl.)Hara，又名冰凌草，为唇形科香茶菜属多年生草本植物，以地上部分入药。广泛分布于黄河流域及其以南广大地区，主产于河南太行山区。味甘苦，性微寒，具清热解毒，消炎止痛、健胃活血及抗肿瘤之功效1。孙汉董课题组2从20世纪70年代开始研究冬凌草，从中分出了二萜、三萜及少量黄酮。Han J3等用 LCESIMSMS方法对冬凌草中的五个二萜类及五个黄酮类化合物同时进行了含量测定。我们课题组在研究冬凌草化学成分的同时，发现

5、其中黄酮类化合物含量较高。紫外分光光度法可用于黄酮45等含量测定。本文对济源产冬凌草中的黄酮类化合物进行了提取工艺研究,并对不同部位不同产地的冬凌草中的总黄酮进行了含量测定。1  仪器与材料1.1  仪器Jasco V550紫外/可见分光光度计；KQ5200DB型数控超声波洗涤器。1.2  材料冬凌草，采自济源市王屋山，经河南中医学院药学院陈随请教授鉴定为Rabdosia rubescens(Hemsl.) Hara的地上部分。芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所。所用试剂均为分析纯。2  方法与结果2.1  对照品溶液的制备 精密称取在120

6、 下减压干燥至恒重的芦丁对照品 60.9 mg于100 ml容量对照品溶液的制备瓶中，加适量90%乙醇温热溶解，放冷，用90 %乙醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液12.50 ml置于50 ml容量瓶中，90 %乙醇稀释至刻度，摇匀。2.2  测定波长的确定 取对照品溶液，按 2.3 项下方法操作6，在300700 nm范围内测定吸收度值，结果表明芦丁在 504 nm处有最大吸收。2.3  标准曲线的绘制精密量取上述对照品溶液0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 ml置于10 ml容量瓶中，分别加 90%乙醇至5 ml，加 5%亚硝酸钠溶液0.4 ml，混匀

7、，放置6 min，加10%硝酸铝溶液 0.4 ml，混匀，放置6 min，加4% NaOH溶液4 ml，再加 90%乙醇至刻度，摇匀，放置15 min。以第1管为空白，在504 nm波长处测定吸收度A，以测定吸收度（A）对溶液浓度（C）进行回归，得线性方程y=0.001 3x+0.011 7，相关系数r=0.999 2。可见，在测定浓度范围0.1520.533 mg/ml内线性关系良好。2.4  精密度考察 精密量取同一供试品溶液1 ml，按“2.6.2”项下方法操作重复进行7次。结果见表1。RSD为 0.082%，表明本方法精密度良好。表1  精密度实验结果（略）2.5&

8、#160; 稳定性考察 取同一供试品溶液，依法显色，自加完显色剂开始，每隔10 min测定吸收度1次，RSD为 0.69%，表明供试品溶液在 80 min内测定基本稳定。2.6  供试品溶液的制备表 2  稳定性考察结果（略）2.6.1  提取条件的正交实验 将干燥冬凌草叶粉碎，分别精密称取2 g粗粉9份，选择乙醇浓度、乙醇用量、超声时间、温度等 4 个因素，每个因素选择 3 个水平，编制因素水平表。按 L9(34)正交设计方案7，乙醇浸泡12 h后超声提取,提取前后称重补重，提取液置于5 ml容量瓶中，放置待测。表 3  冬凌草乙醇提取工艺因素水平（略

9、）2.6.2  供试品的含量测定精密吸取各供试品溶液1 ml，置于10 ml容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液 0.4 ml，混匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液 0.4 ml，混匀，放置6 min，加 4% NaOH溶液 4 ml，再加90%乙醇至刻度，摇匀，放置15 min。另取各供试品溶液1 ml，置于10 ml容量瓶中，不加显色剂，加90%乙醇至刻度做空白，于504 nm处测吸收度，通过标准曲线计算总黄酮含量。2.6.3  正交实验及结果 以冬凌草总黄酮含量为指标进行分析。结果见表 4，由表4可以看出最佳提取工艺为 A3B2C3D1，即15倍50%乙醇浸泡12 h，4

10、0超声0.5 h，超声功率为100%。由表 5 表示，乙醇浓度影响显著，超声提取时间几乎没有影响。表 4  冬凌草提取工艺正交实验结果（略）表 5  含量方差分析（略）2.7  重现性实验 取同一批样品，按供试品溶液的制备方法测定其含量，重复进行5次，结果表明该方法重现性良好。见表6。2.8  回收率实验取已知含量的 9 份供试品溶液各1 ml，分3组，分别精密加入181.7 g/ml的芦丁对照品溶液 0.5， 1，2 ml，按“2.6.2”项下方法显色，于 504 nm处测吸收度。结果表明：回收率高，方法可行。结果见表7。表 6  重现性实验

11、结果（略）表 7  回收率实验结果（略）2.9  不同地方不同部位总黄酮含量测定精密称取冬凌草花、叶、茎以及济源市五个乡的冬凌草干叶样各 2 g，用 15倍50%乙醇浸泡12 h，40超声 0.5 h，按“2.6.2”项下操作方法进行总黄酮的含量测定。结果见表8。表 8  样品含量测定结果（略）3  讨论3.1  在对照品显色方法中，参考文献6的方法是，在加显色剂前，水稀释至相同体积，本实验采用的方法是改用90%乙醇稀释至相同体积，显色后检测。这样改进就保持了被检测溶液的乙醇浓度的一致性，降低了系统误差。3.2  由表8看出，济源产冬

12、凌草的叶和花中总黄酮含量明显高于茎中的含量，花中含量最高，为8.088%，茎中最低，仅为2.853%，茎的纤维含量高，质地相对致密，提取效果不佳，可能是茎中的黄酮含量明显低于花和叶的原因之一。3.3  考虑到提取效率，采用室温冷浸 12 h 后再超声提取的方法。3.4  不同产地的冬凌草中，总黄酮含量差别较大，含量最高的达到 11.575%，最低的为 4.837%,相差近 1.5倍。3.5  在实验过程中发现，显色过程即每一次加入试剂后是否摇匀是关键。参考文献：1  张维江，于  红抗病毒药物的临床应用及其副作用J.中国综合临床，2001，17（10）：7332  孙汉董，许云龙，姜北香茶菜属植物二萜化合物M.北京：科学出版社，2001：122.3  Han J,Ye M,Chen HB,etc.Determination of diterpenoids and flavonoids in Isodon rubescens by LCESIMSMSJ.Chromatographia.2005，62(34):203.4  包贝华,张  丽,丁安伟.分光光度法测定荆芥炭中总黄酮的含量J.时珍国医国药2004，15（5）：264.5  黄林芳