生物工艺学简答题

1、一、发酵培养基选择的依据：答：1根据微生物的特点选择培养基：要依据微生物的不同特性，来考虑培养基的组成，对典型的培养基配方需作必要的调整。2根据发酵方式选择培养基：工业上，利用液体培养基进行的深层发酵具有发酵效率高，操作方便，便于机械化、自动化，降低劳动强度，占地面积小，产量高等优点。而固体培养基则常用于微生物菌种的保藏、分离、菌落特征鉴定、活细胞数测定等方面。3从生产实践和科学试验的不同要求选择：种子培养基主要是供微生物菌体的生长和大量增殖。要求营养丰富、完全，氮源、维生素的比例应较高，所用的原料也应是易于被微生物菌体吸收利用。而发酵培养基除需要维持微生物菌体的正常生长外，主要是要求合成预定

2、的发酵产物，碳源物质的含量往往要高于种子培养基。如果产物是含氮物质，应相应地增加氮源的供应量。4从经济效益方面考虑选择生产原料：必须以价廉、来源丰富、运输方便、就地取材以及没有毒性等为原则选择原料。发酵培养基成分选择的原则：菌种的同化能力；代谢物的阻遏和诱导作用；合适的碳氮比。氮源：过多菌体繁殖旺盛，pH偏高，不利于代谢产物的积累。不足菌体繁殖量少，影响产量；碳源：过多一一较低的pH;不足一一菌体衰老和自溶二、菌种衰退的原因？表现在哪些方面？措施有哪些？答：原因：A、菌种的保藏不当；B、菌种的生产的条件要求没有得到满足，或是遇到不利的条件，或是失去某些需要的条件；C菌种连续传代是菌种发生退化的

3、直接原因，由于连续传代使培养物经常处于旺盛的生长状态，且每次传代时营养和环境等培养条件都在;断的变化，与处于休眠状态的培养物相比，细胞的自发突变率要高得多；D菌种自身突变引起的菌种衰退。表现：所需影物的影率下降、营养物质的代谢和生长繁殖能力下降、发酵周期延长、康;良环境条件的性能减弱。防止措施：1）尽量减少传代次数2）菌种的分离：分离出其中未衰退的菌体3）菌种的复壮：这是指一种广义的复壮，在菌种的生影性能尚未衰退前就经常有意识地进行纯种分离测定，使之生影性能逐步提高4）提供良好的环境条件：进行合理传代，只用三代内的菌种，采用培养条件有利于高影菌，;利于低影菌5）用优良的保藏方法：尽可能采用斜面

4、冰箱保藏，真空冷冻干燥，干孢子保藏等6）定期纯化菌种，对菌种进行定期的分离纯化，可减少其中共存的自发突变或突变;完全株，保持原来的优良特性。三、菌种性能的改变：答1）菌种遗传特性的改变的原因：a）异核现象导致微生物群体发生变异：邻近菌丝细胞间发生吻合，或个别核发生变异而产生b）自发突变导致菌种遗传特性改变：DNA发生改变。c）回复突变或影生分离子：使菌种群体中形成具有;同基因型的个体。2）菌种生理状况的改变：a）菌种是一个;纯的群体，其中变异株所占的比例决定该菌种的特性。b）菌种培养基可通过影响菌种的生理状况而影响发酵影量。C）在某些情况下，菌种的基团处于活化状态或阻遏状态，而时菌种生理状态发

5、生改变。四、原生质体融合育种主要步骤如下：答:选择两个有特殊价值并带有选择性遗传标记的细胞作为亲本，在高渗透压溶液中，用适当脱壁酶去除细胞壁，剩下的是由细胞膜包裹的原生质体。这时原生质体对溶液和培养基的渗透压非常敏感，必须在高渗透压或等渗透压的溶液或培养基中才能维持生存，在低渗透压溶液中将会破裂而死亡。两种;同的原生质体在高渗透压条件下混合，在聚乙二醇和Ca2+作用下，发生细胞膜融合，PEG是一种脱水机，由于脱水作用，原生质体开始聚集收缩，相邻的原生质体融合的大部分面积紧密接触。开始原生质体融合仅在接触部位的一小块区域，形成细小的原生质体，继而逐渐变大导致两个原生质体融合。Ca2+可提高融合效

6、率。在融合时两亲本基因组由接触到交换，从而实现遗传重组，再生的细胞菌落中就有可能获得具有理想状态的重组菌株。五、诱变育种、原生质体融合技术、DNA组技术三种育种方法的优缺点：答：诱变育种技术：优点：能够提高突变频率和扩大变异谱速度快、方法简便不仅可以提高菌种的生产能力，还可以改进产品的质量，扩大品种，简化工艺缺点：工作量大，要选出一个达到一定产量的高产菌往往要筛选数千个左右的突变株，经历多次诱变和筛选才可以达到不能达到定向育种的目的，有一定盲目性原生质体融合技术的：优点：克服远缘杂交不融合的界限，实现远缘菌株基因重组大大提高重组频率，扩大重组幅度、遗传物质更加完整可与其他育种方式结合缺点：基因

7、组交换与重组仍然是非定向，属于一种半理性化筛选在制备实验过程，对其操作有要求，比如温度要适当DNA组技术：优点：能使任何生物的DNA插入到某一细胞质复制因子中，进而引入寄主细胞成功表达克服远缘杂交不亲和的界限可以创造自然界从未有过的遗传修饰生物体用于对未知功能基因的研究，实现人类疾病的基因治疗可以进行定向育种六、放线菌发酵生产的工艺过程如下：答：菌种母斜面（孢子）子斜面（孢子）摇瓶种子（菌丝）种子罐发酵罐七、影响种子质量的因素及其控制？答：种子质量主要受孢子质量，培养基，培养条件，种龄和接种量等因素的影响。1、培养基：养其的营养成分要尽可能地和发酵培养基接近，以适合发酵需要，且PH值要求比较稳

8、定；2培养条件：应选择的最适温度，要适当进行通气搅拌，应适当增大供氧量，通气充足常常可增加产量；3种龄：以菌体处于生命力极为旺盛的对数生长期，且培养液中菌体量还未达到最高峰时，较为适宜；4接种量：移入的种子液体积和接种后培养液体积的比例，大接种量可以缩短发酵罐中菌体繁殖至高峰所需时间，是产物合成速度加快；5种子质量标准：通过对菌体形态、培养液外观、生化指标、产物生成量已经酶活力等标准判断种子质量，还应保证种子无杂菌污染6种子异常的分析：种子异常主要表现为：菌种生长缓慢或过快，菌丝结团，菌丝粘壁三个方面，在生产过程中对这三种现象观察分析。八、淀粉水解糖的制备方法：酸解法，以酸为催化剂，在高温高压

9、下将淀粉水解转化为葡萄糖的方法。酶解法，用专一性很强的淀粉酶及糖化酶将淀粉水解为葡萄糖的工艺。酸酶结合法：酸酶法，先将淀粉酸水解成糊精或低聚糖，然后再用糖化酶将其水解成葡萄糖的工艺酶酸法，将淀粉乳先用a淀粉酶液化到一定程度，然后用酸水解成葡萄糖的工艺九、双酶水解法制葡萄糖别的优点：淀粉水解是在酶的作用条件下进行的，酶解反应条件比较温和看；微生物酶作用的专一性很强，水解副反应少，因而水解糖液纯度高，淀粉转化率高；可在较高淀粉乳浓度下水解，而且可采用粗原料；由于微生物酶制剂中菌体的自溶，糖液营养物质较丰富，这就可使发酵培养基的组成简化；用酶解法制的的糖液颜色浅、较纯净、无苦味、质量高，有利于糖液的

10、精制。双酶法制糖的工艺流程：淀粉乳-一次液化二次液化糖化次脱色一次过滤二次脱色二次过滤低糖-阳离子交换柱阴离子交换柱三次浓缩蒸发高糖十、蒸汽喷射液化工艺及条件（1）工艺流程：调浆-配料-一次喷射液化-液化保温-二次喷射-高温维持-二次液化-冷却-（糖化）特点：利用喷色器将蒸汽喷入淀粉乳的薄膜，在短时间内通过喷色器快速升温至145完成糊化、液化，使形成的不溶性淀粉颗粒在高温下分散，从而使所得的液化液既透明又易于过滤，淀粉的出糖率也高，同时采用真空闪急冷却，提高了液化液的第浓度。十一、对数残留定律：有一发酵罐，内装培养基80t，在121的温度下进行实罐灭菌。设每毫升培养基含有耐热菌的芽抱1.8X1

11、07个，在121C时的灭菌速率常数为0.0287S-1试求灭菌失败的机率为0.001所需的时间。解：已知培养基m=80t,水的密度：=103kg/m3,K0.0287S1,Nt0,001N080103/1031061.81071.441015又有t1/KlnN0/NT所以：t1/0.0287ln1.441015/0.0011457.1s十二、间歇灭菌和连续灭菌的优缺点？答：连续灭菌优点：a.高温短时灭菌，培养基成分损失少b发酵罐占用时间短，利用率高。缺点：a.设备复杂，操作麻烦，染菌机会多；b不适合含大量固体物料的灭菌；间歇灭菌：优点：a.操作要求低，适合小批量生产规模；b适合含大量固体物料的

12、灭菌。缺点：a.培养基的营养物质损失大，灭菌后培养基质量下降；b发酵罐利用率低；c.不适合大规模生产的灭菌。十三、空气净化的一般流程?答：空气吸气口-粗过滤器-空气压缩机-一级空气冷却器-二级空气冷却器-分水器-空气贮罐-旋风分离器-丝网除沫器-空气加热器-总空气过滤器-分空气过滤器-无菌空气设计空气净化流程并对其进行分析？流程：吸风塔-粗过滤器-空气压缩机-空气储罐-一级空气冷却器-旋风分离器-二级冷却器-丝网分离器-空气加热器-总空气过滤器-无菌空气分析：A、选择正确的进风口与合适的采风位置，用吸风塔收集空气；B、采用粗过滤是对空气进行预处理，对空气进行除杂质；C、将空气送入无润滑油的空气

13、压缩机，使之降低空气进入过滤器的相对湿度，以保证过滤介质在干燥状态下工作，同时对空气提供足够的能量。D、进入一级冷却器到3035度，使大部分水，油都结成较大的雾粒，且其浓度较大，再用旋风分离器进行分离E、进入二级冷却器冷却到20-25，进一步使空气冷却析出较小雾粒，此时宜采用丝网分离器F、再用加热器加热口空气，使其相对湿度降低至50-60%，以保证过滤器的正常进行十四、酵母的酒精发酵机制？答：在酵母体内，葡萄糖经糖酵解途径，历经三个阶段生成丙酮酸，总反应如下：C6H12062ADP2H3PO42NADC3H4O32ATP2NADH2H2H2O接在无氧条件下，由丙酮酸催化作用，丙酮酸脱竣酶催化作

14、用，丙酮酸脱竣生成乙醛和Mg2珞在下发挥作用）生成的乙醛乙醛 NAUDHuuuHujujujN1ADr 乙醇1 分子葡萄糖可以分解成2 分子乙醇、CO2（丙酮酸脱竣酶需在焦磷酸硫胺素为辅酶，以及不在乙醇脱氢酶作用下，作为受氢体，被还原成乙醇：所以酵母菌在没有氧气的条件下，通过十几步反应，2分子CO2、2分子ATP总反应式：C6H12062ADP2H3PO42CH3CH2OH2CO22ATP十五、酵母的酒精发酵中影响杂醇油形成的条件？答：酵母菌种：在同样条件下，不同菌种的高级醇生成量相差很大。酵母杂醇油生成量与醇脱氢酶活性关系密切，该酶活力大，杂醇油生成量大培养基组成：培养基中支链氨基酸存在，通

15、过埃尔利希反应增加相应的杂醇油的生成量。培养基中氮水平升高也会使杂醇油生成量降低。杂醇油的形成也与原料中蛋白质的氨基酸组成有关发酵条件：一般发酵温度高，杂醇油生成量大。通风有利于杂醇油生成。杂醇油生成与乙醇生成是平行的，随乙醇生成而生成。十六、酵母的酒精发酵中双乙酰的消除措施？答：提高麦汁中缴氨酸的含量，通过反馈作用抑制从丙酮酸合成缴氨酸的支路代谢作用利用酵母的还原作用，将双乙酰转变为2-3丁二醇利用CO2的洗涤作用，排出双乙酰加入a-乙酰乳酸脱竣酶使用基因工程构建含有a-乙酰乳酸脱竣酶的酵母株。十七、甲烷发酵的过程与意义？第一阶段：有机聚合物水解生成单体化合物，进而分解成各种脂肪酸、CO开口

16、H2。第二阶段：各类脂肪酸进行分解，生成乙酸、CO2和H2;第三阶段：由乙酸和CO2及H2反应生成甲烷。意义：利用厌氧菌将工厂废水、下水污泥中等含有的有机物进行分解，有利于环境保护，同时产生了甲烷可以作为燃料能源，解决能源危机。二十、柠檬酸发酵机制？如何积累柠檬酸？答：为了积累柠檬酸，柠檬酸合成酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶和丙酮酸羧化酶要强，顺乌头酸水合酶、异柠檬酸脱氢酶、异柠檬酸裂解酶、草酰乙酸水解酶等与柠檬酸及其底物草酰乙酸分解有关的酶要微弱。顺乌头酸水合酶失活是阻断TCA循环积累柠檬酸必要条件之一。糖酵解及丙酮酸代谢的调节TCA的调节及时补加草酰乙酸A、由镒缺乏抑制了蛋白质的合成，而导致细

17、胞内的镂根离子浓度上升和一条呼吸性强的侧系呼吸链不产生ATP,这两方面的因素分别解除了对磷酸果糖激酶的代谢调节，促进了EMP途径畅通。B、由组成型的丙酮酸竣化酶源源不断的提供草酰乙酸。C在控制二价铁离子含量的情况下，顺乌头酸水合酶活性低，从而使柠檬酸积累。D丙酮酸氧化脱竣生成乙酰辅酶A和CO2固定两个反应平衡，以及柠檬酸合成酶不被调节，增强了合成柠檬酸能力。E、柠檬酸积累增多，pH低。在低pH时，顺乌头酸水合酶和异柠檬酸脱氢酶失活，从而进一步促进柠檬酸自身的积累。二十一、谷氨酸发酵机制？答：谷氨酸的生物合成的主要方式是a-酮戊二酸的还原性氨基化作用；它的途径有EMP、HMP、TCA乙醛酸循环和

18、C02的固定。葡萄糖先合成谷氨酸，依次经鸟氨酸、谷氨酸生物合成精氨酸。它的产生菌大多为生物素缺陷型，谷氨酸发酵通过控制生物素亚适量，使最后一代细菌细胞变形、拉长，改变了细胞膜的通透性，引起代谢失调，使谷氨酸得以积累。谷氨酸高产菌应丧失或仅有微弱的a一酮戊二酸脱氢酶活力，使a一酮戊二酸不能继续氧化。而CO2固定反应的酶系强，使四碳二竣酸全部由CO2固定反应提供，而不走乙醛酸循环，以提高对糖的利用率。谷氨酸脱氢酶的活力很强，并丧失谷氨酸对谷氨酸脱氢酶的反馈抑制和反馈阻遏，同时NADPH前氧化能力弱。这样就使a一酮戊二酸到琥珀酸的过程受阻，再有过量镂离子存在的条件下，a一酮戊二酸经氧化还原共轲的氨基

19、化反应而生成谷氨酸，生成的谷氨酸不形成蛋白质，而分泌泄露于菌体外。谷氨酸产生菌不利用体外的谷氨酸，谷氨酸成为最终的产物。二十二、初级代谢产物与次级代谢产物的关系？答：从生化代谢方面分析：许多抗生素的基本结构是由少数几种初级代谢产物构成的，所以次级代谢产物是以初级代谢产物衍生出来的。次级代谢途径并不独立，而与初级代谢有密切关闭从遗传代谢方面分析：初级代谢与次级代谢同样都受到核内DNA的调节控制。这是两者的共同点。不同在于，次级代谢产物还受到与初级代谢产物合成有关的遗传物质的控制，即受核内遗传物质（染色体遗传物质）和核外遗传物质（质粒）的控制。二十三、次级代谢产物的特征？次级代谢产物是由微生物产生

20、的，不参与微生物的生长与繁殖次级代谢产物的生物合成最少也要有一部分取决于初级代谢产物无关的遗传物质，并有这类遗传信息形成酶所催化的代谢途径有关它的生产大多数是基于特异性来完成的次级代谢产物发酵经历两个阶段，即营养增值和产物合成一般都同时产生结构上相类似的多种副产物生产能力受微量金属离子和磷酸盐等无机离子的影响在多数情况下，增加前体是有效的次级代谢酶的底物特异性在某种程度上说是比较广的培养温度过高过菌体移植次数过多，使抗生素生产能力下降，可能的原因是参与抗生素合成的菌种质粒脱落一种产物可由多种中间体和途径来取得。二十四、发酵过程的主要控制参数？（1）pH值：微生物发酵是在一定条件下进行的，其代谢

21、变化是通过各种生化反应的综合结果，pH值的高低与菌体生长和产物合成有着重要的关系。（2）温度:这是指发酵整个过程或不同阶段中所维持的温度。（3）溶解氧浓度:溶解氧是需氧菌发酵的必备条件。利用溶氧浓度的变化，可了解产生菌对氧利用的规律，反映发酵的异常情况，也可作为发酵中间控制的参数及设备供氧能力的指标。（4）基质含量:只是发酵液中糖、氮、鳞等重要营养物质的浓度。它们的变化对产生菌的生长和产物的合成有着重要的影响，也是提高代谢产物产量的重要控制手段。（5）空气流量：这是指每分钟内每单位体积发酵液通入空气的体积，也可叫通风比，也是需氧发酵的控制参数。一般控制在0.51.0L/（Lmin）。（6）压力

22、：这是发酵过程中发酵罐维持的压力。罐内维持正压可以防止外界空气中的杂菌侵入而避免污染，以保证纯种的培养。罐压一般维持在0.20.5xi05Pa。（7）搅拌转速：对好氧性发酵，在发酵的不同阶段控制不同的转数，以调节培养基中的溶氧。通常以每分钟的转数来表示。（8）搅拌功率：这是指搅拌器搅拌时所消耗的功率，常指每立方米发酵液所消耗的功率。（9）黏度：黏度大小可以作为细胞生长或细胞形态的一项标志，也能反映发酵罐中菌丝分裂过程的情况，通常用表观黏度表示之。（10）浊度:浊度是能即使反映单细胞生长状况的参数，对氨基酸、核苷酸等产品的生产是极其重要的。（11）料液流量:只是控制流体进料的参数。（12）产物的

23、浓度:只是发酵产物产量高低或合成代谢正常与否的重要参数，也是决定发酵周期长短的根据。（13）氧化还原电位:对各种微生物而言，培养基最养基最适宜的与所允许的最大电位值，应与微生物本身的种类和生理状态有关。氧化还原电位常作为控制发酵过程的参数之一。（14）废气中的氧含量：废气中的氧含量与产生菌的摄氧率和KLa有关。（15）废气中的CO2含量：测定它可以算出产生菌的呼吸商，从而了解产生菌的呼吸代谢规律（16）菌丝形态：一般都以菌丝形态作为衡量种子质量、区分发酵阶段、控制发酵过程的代谢变化和决定发酵周期的依据之一。（17）菌丝浓度：它的大小和变化速度对菌体的生化反应都有影响，与培养液的表观粘度有关，间

24、接影响发酵液溶氧浓度。二十五、泡沫产生的原因？对发酵的危害？消除的方式？答：原因：由外界引进的气流被机械地分散形成由发酵过程产生的气体聚结生产发酵泡沫发酵液中的糖、蛋白质和代谢物等存在起到加强和稳定泡沫的作用危害：使发酵罐的装填系数减小造成大量漏液，导致产物损失增加了染菌的机会增加了菌群的非均一性消泡剂的加入给提取工序带来困难、消泡方式：调整培养基中的成分或改变某些物化参数或改变发酵工艺，以减少泡沫的形成机会；采用机械消泡和消泡剂；筛选不产生流态泡沫的菌种，来消除气泡的内在因素二十六、基因工程菌的遗传不稳定性的产生机制？答：受体细胞中的限制彳饰系统对外源重组DNA分子的降解外源基因的高效表达严

25、重干扰受体细胞正常的生长代谢能量、物质的匮乏和外源基因表达产物的毒性诱导受体细胞产生应激反应，关闭合成途径，启动降解程序重组质粒在受体细胞分裂时的不均匀分配，这是重组质粒逃逸的基本原因受体细胞中内源性的转座元件促进重组分子的缺失重排二十七、染菌对发酵的影响？一、染菌对不同发酵过程的影响：由于各种发酵过程所用的微生物菌种、培养基以及发酵条件、产物的性质不同，染菌造成危害程度也不同。有对青霉素的发酵过程、对于核苷或核苷酸的发酵过程、对于柠檬酸等有机酸的发酵过程二、染菌发生的不同时间对发酵的影响：(1)种子培养期染菌种子培养主要是使微生物细胞生长与繁殖，培养基的营养十分丰富，比较容易染菌。因此应严格

26、控制种子染菌的发生。(2) 发酵前期染菌在发酵前期，微生物菌体主要是处于生长、繁殖阶段，此时期代谢的产物很少，相对而言这个时期也容易染菌，染菌后的杂菌将迅速繁殖，与生产菌争夺培养基中的营养物质，严重干扰生产菌的正常生长、繁殖及产物的生成。(3) 发酵中期染菌发酵中期染菌将会导致培养基中的营养物质大量消耗，有的染菌产生酸性物质，使pH值下降，菌体发生自溶，致使发酵液发黏，产生大量的泡沫，代谢产物的积累减少或停止；有的染菌后会使已生成的产物被利用或破坏，发酵中期染病一般较难挽救，危害性较大。(4) 发酵后期染菌由于发酵后期，培养基中的糖等营养物质已接近耗尽，且发酵的产物也已积累较多，如果染菌量不太

27、多，对发酵影响相对来说就要小一些，可继续进行发酵。三、染菌程度对发酵的影响：染菌程度愈严重，即进入发酵罐内的杂菌数量愈多，对发酵的危害也就愈大。当生产菌在发酵过程已有大量的繁殖，并已在发酵液中占优势，污染极少量的杂菌，对发酵不会带来太大的影响。二十七、发酵染菌的规模分析：从染菌的规模来看，主要有三种。大批量发酵罐染菌。如发生在发酵前期，可能是种子带菌或连消设备引起染菌；发生在发酵中期、后期，且这些杂菌类型相同，则一般是空气净化系统存在诸如空气系统结构不合理、空气过滤器介质失效等问题。部分发酵罐染菌。如果染菌发生在发酵前期，就可能是种子染菌、连消系统灭菌不彻底；如果是发酵后期染菌，则可能是中间补

28、料染菌。个别发酵罐连续染菌。个别发酵罐连续染菌，大都是由于设备渗漏造成，应仔细检查阀门、罐体，或罐器是否清洁等。二十八、杂菌污染的挽救和处理：答：发酵过程一旦发生染菌，应根据污染微生物的种类、染菌的时间或杂菌的危害程度等进行挽救或处理，同时对有关设备进行相应的处理。种子培养期染菌处理一旦发生种子受到杂菌的污染，该种子不能再接入发酵罐中进行发酵，应经灭菌后弃之，并对种子罐、管道等进行仔细的检查和彻底的灭菌。同时采用备用的种子，选择生长正常无染菌的种子接入发酵罐，继续进行发酵生产。无备用种子，则可选择一个适合菌龄的发酵罐内的发酵液作为种子，进行“倒种“处理，接入新鲜的培养基中进行发酵，从而保证发酵

29、生产的正常进行。发酵前期的染菌处理当发酵前期发生染菌后，如培养基中的碳、氮源含量还比较高时，终止发酵，将培养基加热至规定温度，重新进行灭菌处理后，再接入种子进行发酵；如果染菌易造成较大的危害，培养基中的碳、氮源消耗较多，可直接放掉料液，补充新鲜的培养基，重新进行灭菌处理后，再接种进行发酵。发酵后期染菌发酵中后期的染菌可以加入适当的杀菌剂或抗生素以及正常的发酵液，以抑制杂菌的生长速率，也可采取降低温度、降低通风量、停止搅拌、少量补糖等其他措施进行处理。如果发酵过程的产物已经达到了一定水平，此时产品的含量若达到一定值，只要明确是染菌就可放罐。对于没有提取价值的发酵液，废弃之前应加热到120度，保持

30、30分钟后才能排放。染菌后对设备的处理染菌后的发酵罐再重新使用前，必须在放罐后进行彻底清洗，空罐加热灭菌后至120度以上，30分钟后才能使用，也可在甲醛熏蒸或甲醛溶液浸泡12小时。二十九、为什么要利用固定化酶？答：因为常规酶反应随着时间的延长，反应速率会逐渐的降低，反应后酶不能回收，另外也给产物的分离纯化带来了麻烦，将酶固定化后，酶仍具有催化活性，还能回收反复使用，并且生产可以连续化、自动化。三十、固定化酶与游离酶相比的特点?答：极易将固定化酶与底物、产物分开。产物溶液中没有酶的残留，提纯工艺简化能够在较长时间内进行反应，便于实现连续化、自动化大多数情况下，能够提高酶的稳定性；酶反应过程能够进

31、行严格控制；酶的利用率提高，生产成本降低能够进行多酶反应；可以增加产物的收率，提高产物的质量。增加了生产成本只能用于可溶性小分子底物，对大分子的底物适应性差，与完整的菌体细胞相比，不适宜多酶反应，特别需要辅助因子的反应等。、三十一、动物细胞培养的环境要求？答：无污染环境：环境无毒和无菌是保证细胞生存的首要条件培养温度：温度是细胞在体外生存的基本条件之一，来源不同的动物细胞，其最适生长温度是不相同的。温度调节的范围最大不超过±0.5。培养温度不仅始终一致，而且在培养器各个部位都应恒定，在培养中温度的恒定比准确更重要。支持物：体外培养的大多数动物细胞需在人工支持物上单层生长。玻璃、塑料制

32、品、微载体气体环境和氢离子浓度：三十二、为什么说“生命奥妙无穷，工程创造无限”？对你的人生规划有何启示？答：生命是伟大的、美妙的，生命蕴含着无穷多精彩的秘密，即使人类科技知识在发达，也永远无法完全、彻底地了解和操纵生命，然而生命虽然无穷，但是人类的智慧和工程的力量却是无限的。在一代代科学家和工程师的辛勤努力下，我们对生命已有越来越多的了解，我们也创造出了在从前看来的许多不可能，比如克隆羊dolly的诞生，这些工程的结晶不但为许多疾病带来了希望，更为人类社会发展引入了巨大的经济效益，所以说“生命奥妙无穷，工程创造无限”。启示：首先，生命是如此奥妙无穷，我们就更应该热爱和珍惜在自己以及他人的生命。

33、然后，既然工程能够创造无限，那么我们就更应该努力学习科学文化知识，“书山有路勤为径，学海无涯苦作舟”，现在我们不仅应该学好自己的专业知识，而且还要更多的学习课外文化，发扬创新精神，做一名对祖国对社会有贡献的人，不一定要像袁隆平那样，起码我们也应该有小小的贡献。填空题：1、回复突变的原因：发生不完全突变、产生异核菌丝、菌落不纯2、 菌种的复壮：纯种分离、通过寄主体进行复壮、淘汰已衰退的个体3、 菌种的保藏：原理：根据菌种生理、生化特性，人工创造条件使菌种的代谢活动处于休眠状态。一般利用菌种的休眠体（孢子、芽孢），创造最有利于休眠状态的环境条件，如低温、干燥、隔绝空气或氧气、缺乏营养物质等，使菌体的代谢活动处于最低状态。方法：斜面低温保藏；液体石蜡封存保藏法；甘油保藏法；固体曲保藏法；砂土管保藏法；冷冻干燥法；4、 自然界分离新菌种包括