实验六细胞表面抗原检测facs_第1页
实验六细胞表面抗原检测facs_第2页
实验六细胞表面抗原检测facs_第3页
实验六细胞表面抗原检测facs_第4页
实验六细胞表面抗原检测facs_第5页
已阅读5页，还剩13页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、淋巴细胞表面标志的检测 FACS法免疫细胞检测免疫细胞检测p淋巴细胞的采集和分离淋巴细胞的采集和分离p总数检测总数检测pT T亚群检测亚群检测淋巴细胞表面抗原检测淋巴细胞表面抗原检测免疫荧光法免疫荧光法原理n荧光素标记的特异性抗体与淋巴细胞表面相应抗原结合，使淋巴细胞带有荧光素，在一定波长的激发光作用下产生荧光，可用流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。n流式细胞仪的基本原理：将细胞形成高速细流而从喷嘴逐个流出，经激发光照射后产生的荧光信号等由感光元件探测，通过计算机自动处理各种数据，可以测得每个细胞的荧光强度、细胞大小等物理特征。流式细胞仪流式细胞仪全自动双激光四色流式细胞分析分选系统个人型双激光

2、四色流式细胞仪流式细胞仪的特点=单个细胞分析单个细胞分析=同时多参数分析同时多参数分析=速度快：速度快：1000010000个细胞个细胞/ /秒秒=统计学意义：提供细胞群体的均值和分布情况统计学意义：提供细胞群体的均值和分布情况=分选感兴趣的细胞分选感兴趣的细胞流式细胞仪系统流程： 标本激光系统流动系统信号处理系统放大系统计算机系统结果打印 激发光 发射光nAnti CD3 PeCy5: 488nm 675nmnAnti CD4 R-PE: 488nm 575nmnAnti CD8 FITC: 488nm 525nmFSC和和SSC是细胞的固有参数值，与其是否标有荧光是细胞的固有参数值，与其是

3、否标有荧光抗体无关抗体无关前向角度散射光强度侧向散射光强度实实验验步步骤骤取100 l小鼠脾细胞悬液（约1106细胞）+1ml红细胞裂解液混匀，5 min 1500 rpm，离心，5 min弃上清，重悬细胞，+ 1 ml FACS buffer ，洗涤1次1500 rpm，离心，5min弃上清，重悬细胞，+ 100 l FACS buffer，+ 5 l 荧光抗体混合液，混匀室温，避光，孵育30min+ 1 ml FACS buffer ，洗涤1次1500 rpm，离心，5min+ 300 l FACS buffer 混匀，重悬细胞 上机检测（4 4人一组）人一组）注意事项：n对照设置： 其好坏、齐全，决定对结果的解释和结论的可信性。 阴性对照、同型对照（Isotype control）、单染色对照n单细胞悬液：（不允许上机样品含有胎牛血清）n优化实验条件：（细胞数+抗体量）n加荧光素标记抗体后的操作过程应注意避光，注意低温和保持细胞活力。同型对照(Isotype Control)n是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。n是真正意思上的

人人文库> 全部分类> 应用文书

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论