柴胡疏肝散对慢性应激抑郁模型大鼠行为及血浆促肾上腺皮质激素释

1、柴胡疏肝散对慢性应激抑郁模型大鼠行为及血浆促肾上腺皮质激素释放激素和促肾上腺皮质激素的影响 11-01-25 10:26:00 编辑：studa20 作者：李云辉, 张春虎, 王素娥, 邱娟, 胡随瑜, 肖桂林【摘要】 目的：探讨柴胡疏肝散对慢性应激抑郁模型大鼠行为学及血浆促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropin releasing hormone，CRH）和促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）浓度的影响。方法：40只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、氟西汀组及柴胡疏肝散组。采用慢性轻度不可预见性应激加孤养复制大鼠抑郁模型（4周

2、）。所有大鼠在造模第15天开始灌胃，分别灌服等体积生理盐水（空白对照组、模型组）或氟西汀（1.8 mg/kg）及柴胡疏肝散（5.9 g/kg）药液，连续2周。选用敞箱实验得分和液体消耗量等指标评价各组大鼠行为学改变，采用放射免疫法检测各组血浆CRH和ACTH浓度。结果：与空白对照组比，模型组大鼠体质量增加缓慢，敞箱实验中的水平运动、垂直运动得分、清洁动作次数显著减少，中央格停留时间显著延长，糖水消耗明显下降，纯水消耗显著增多，血浆CRH和ACTH浓度增高, 差异有统计学意义（P0.05）。柴胡疏肝散组大鼠抑郁样行为显著改善，血浆CRH和ACTH浓度较模型组显著降低，差异有统计学意义（P0.01

3、）。结论：慢性轻度不可预见性应激可使大鼠行为及神经内分泌发生异常改变，引起抑郁；柴胡疏肝散可调节慢性应激引起的HPA轴功能亢进，具有抗抑郁作用。 【关键词】 柴胡疏肝散; 抑郁; 慢性应激; 神经行为学表现; 促肾上腺皮质激素释放激素; 促肾上腺皮质激素; 大鼠Objective: To investigate the effects of Chaihu Shugan San (CHSGS), a compound traditional Chinese herbal medicine, on behavior and plasma levels of corticotropin releas

4、ing hormone (CRH) and adrenocorticotropic hormone (ACTH) of rats with chronic mild unpredicted stress depression.Methods: Forty male SpragueDawley rats were randomly divided into 4 groups: normal control group, untreated group, fluoxetine group and CHSGS group. Except the normal control group, rats

5、were singly housed and exposed to an unpredicted sequence of mild stressor for continuous 4 weeks to induce depression. Since the fifteenth day, rats were intragastrically administered with equal volume agents respectively for 2 weeks normal saline for the normal control group and the untreated grou

6、p, fluoxetine (1.8 mg/kg) for the fluoxetine group and CHSGS (5.9 g/kg) for the CHSGS group. Behavioral scores of rats were detected by openfield test and sucrose preference test, and the plasma levels of CRH and ACTH in different groups were detected by radioimmunoassay.Results: Compared with the n

7、ormal control group, body weights of the rats in the untreated group were significantly decreased. Scores of crossing, rears and grooming in openfield test were reduced significantly. Pure water consumption in sucrose preference test was increased significantly. The levels of plasma CRH and ACTH wer

8、e significantly increased. The depressive behaviors of the rats were improved significantly and the levels of plasma CRH and ACTH were obviously reduced in the CHSGS group.Conclusion: Chronic mild unpredicted mild stress can affect the neuroendocrine and behavior and cause depression in rats. CHSGS

9、can regulate HPA hyperactivity of rats caused by chronic stress and has antidepressive effects.Keywords: Chaihu Shugan San; depression; chronic stress; neurobehavioral manifestations; corticotropin releasing hormone; adrenocorticotropic hormone; rats抑郁症是最常见的心境障碍，普通人群中抑郁症的年发病率约为200/10万，且发病率呈逐年上升趋势。据世

10、界卫生组织估计，2020年抑郁症将成为第二大疾病1。抑郁症属中医学郁病范畴，运用中医辨证论治治疗抑郁症具有明显优势。中医证候临床流行病学调查显示，肝郁气滞证为抑郁症最常见的证候类型，居各证之首2。柴胡疏肝散是治疗肝郁气滞证最具代表性的经典方之一，全方具有疏肝行气、活血止痛的功效。临床研究表明柴胡疏肝散治疗抑郁症具有良好的效果3，4。慢性应激可以引起人类及动物的下丘脑垂体肾上腺皮质（hypothalamicpituitaryadrenocortical，HPA）轴功能亢进，且出现抑郁状态5。本实验通过采用慢性轻度不可预见性应激与孤养相结合的方法，研究柴胡疏肝散对慢性应激抑郁模型大鼠行为及促肾上腺

11、皮质激素释放激素（corticotropin releasing hormone，CRH）和促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）的影响，旨在探讨柴胡疏肝散抗抑郁的作用机制。1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物 筛选行为学指标相近的SD雄性成年大鼠40只，体质量（20020）g，由中南大学实验动物学部提供，合格证号为SCXX(湘)4343232。自由饮食，光/暗周期为12 h/12 h(光照时间6001800)，背景噪音（4010）dB，温度（203）。1.1.2 主要药物及试剂 柴胡疏肝散处方及方中各组成中药剂量按中华人民共和国药典

12、2005年版一部常规用量（柴胡9 g、陈皮9 g、川芎9 g、香附9 g、枳壳9 g、芍药15 g、甘草5 g），药材均由湘雅医院药剂科统一购买，饮片经专家鉴定，符合药典一部要求。煎煮、浓缩、真空干燥，制成干膏，每克含生药量8 g，用时配制成1.0 g/mL的药液。由湘雅医院药剂科制剂室负责完成。盐酸氟西汀胶囊，由礼来苏州制药有限公司提供，20 mg/粒，批准文号为国药准字J20080016。CRH和ACTH放射免疫分析试剂盒，由上海泛柯生物科技有限公司提供。1.1.3 主要仪器 低温高速离心机，美国Sigma公司生产；GC911放射免疫计数器，中国科技大学实业总公司生产；自制敞箱。1.2 实

13、验方法1.2.1 动物分组 实验前用敞箱实验（openfield test, OFT）法对每只大鼠进行行为学评分，选择各项行为学指标得分相近的40只大鼠，适应环境饲养1周后，随机分为空白对照组、模型组、氟西汀组和柴胡疏肝散组，每组10只。组间体质量及OFT评分比较，差异无统计学意义。1.2.2 模型复制及灌胃 空白对照组大鼠正常条件饲养，其余各组用于造模，参照文献方法6，7并加以改进。每笼1只孤养，共接受28 d随机的应激，包括电击足底（电流强度10 mA，每隔1分钟刺激1次，每次持续10 s，共30次）、冰水游泳（4 ，5 min）、热应激（45 ，5 min）、摇晃（1次/s，15 min

14、）、夹尾（1 min）、禁水（24 h）、禁食（48 h）和昼夜颠倒等刺激，每日给予1种刺激，使大鼠不能预料刺激的发生，以避免发生适应性。空白对照组、模型组灌服等体积蒸馏水，每天1次，连续14 d；柴胡疏肝散组大鼠灌服柴胡疏肝散药液，剂量为生药5.9 g/kg（临床用量按体表面积折算），每天1次，连续14 d；氟西汀组灌服氟西汀药液，剂量为1.8 mg/kg，为70 kg成人常规临床用药的等效量，每天1次，连续14 d治疗。各组灌胃时间均为慢性应激第15天至造模结束当天上午900，连续灌胃14 d。1.2.3 行为学观察1.2.3.1 体质量观察 分别于实验第0、15和29天称取大鼠体质量。1

15、.2.3.2 敞箱实验 参照文献方法8并改进，分别于实验第0、15和29天进行3次。实验所用的敞箱装置由木材制成，底面为100 cm100 cm的正方形且被等分为25个等边方格，周围为高40 cm的木墙，内由黑色漆料涂满。上午700900之间在安静的房间内进行敞箱实验。将大鼠放入中心方格内，固定数码摄影机于敞箱上方（以排除人为干扰因素），自动记录3 min内大鼠在中央格的停留时间、穿越格数（四爪均进入的方格才记数，为水平运动得分）、后肢直立次数（两前爪腾空或攀附墙壁，为垂直运动得分）、清洁运动记数。彻底清洁敞箱后再进行下一次观察。1.2.3.3 液体消耗实验 参照文献方法6，实验在安静的房间内，在每次敞箱实验前72 h进行。在第一个24 h，每笼同时放置两个水瓶，两瓶均装有1蔗糖水；第二个24 h，一瓶装1%蔗糖水，一瓶装纯水；禁食禁水24 h后，进行基础消耗和纯水消耗实验，同时给予每只大鼠事先定量好的两瓶水，一瓶1%蔗糖水，一瓶纯水。60 min后，取两瓶水定量，计算大鼠的总液体消耗、糖水消耗和纯水消耗量。1.2.4 标本采集及指标测定 实验第29天，将所有大鼠颈椎迅速脱臼，然后开