水葫芦链格孢生长因子

1、 河南农业科学 , 2011, 40(11 :76-80 J o u r n a l o f H e n a n A g r i c u l t u r a l S c i e n c e s几个主要因子对水葫芦链格孢生长和侵染力的影响胡 丽 , 谭万忠 *, 殷利利 , 刘 佳 , 罗华东(西南大学 植物保护学院 , 重庆 400716摘要 :测试引起水葫芦黑斑病的生防真菌水葫芦链格孢 (A l t e r n a r i a t e n u i s s i m a 的主要生物学特 性 (培养基 、 温度 、 p H 值对菌落生长以及光照对产孢量的影响 和影响该菌株侵染力的 3个主要因 子

2、(接种温度 、 光照 、 保湿时间 , 以期为该菌的大量发酵和真菌除草剂的研制奠定基础 。 试验结果 表明 , 培养基 、 温度和酸碱度是影响该菌生长的主要因素 , 其最佳培养基 、 温度和酸碱度分别是马铃 薯蔗糖培养基 、 25 和 p H 值 9. 0。 最适合该菌产孢的光照条件是近紫外光 (12h 光 /12h 暗 , 培养 20d 后产孢量达到 3. 44×105个 /皿 。 在室内控制条件下测定 , 温度 、 湿度和光照对菌株的致病力 都有很大的影响 。 30 处理的原生叶片的病害严重度明显高于 20 和 25 2个处理 , 21d 时达到 7. 77; 保湿处理时间设定为

3、 048h , 保湿 12h 时 , 4周后水葫芦叶片平均病害严重度达到 5. 21, 感 病率达到 95%, 且发病速度较快 ; 弱光照处理 (1 200l x 的叶片病害严重度较强光照处理 (3 000l x 的严重度级数高 , 因此 , 在一定程度上强光照对菌丝的侵染有抑制作用 。关键词 :水葫芦 ; 黑斑病 ; 链格孢菌 ; 培养条件 ; 真菌生长 ; 产孢量 ; 致病性中图分类号 :S 451 S 476 文献标识码 :A 文章编号 :1004-3268(2011 11-0076-05E f f e c t s o f S o m e M a j o r F a c t o r s

4、o n G r o w t h a n d P a t h o g e n i c i t y o f A l t e r n a i a t e n u i s s i m a C a u s i n g B l a c k S p o t o f W a t e r H y a c i n t hHU L i , T A N W a n -z h o n g *, Y I N L i -l i , L I U J i a , L U O H u a -d o n g(C o l l e g e o f P l a n t P r o t e c t i o n , S o u t h w

5、e s t U n i v e r s i t y , C h o n g q i n g 400716, C h i n a A b s t r a c t :T h e e f f e c t s o f s e v e r a l m a j o r f a c t o r s o n g r o w t h (m e d i u m , t e m p e r a t u r e a n d p H , s p o r u l a -t i o n (i l l u m i n a t i o n a n d p a t h o g e n i c i t y (i n o c u l

6、 a t i o n t e m p e r a t u r e , i l l u m i n a t i o n a n d m o i s t u r e t i m e o f A l t e r n a r i a t e n u i s s i m a , a b i o l o g i c a l c o n t r o l a g e n t f o r w a t e r h y a c i n t h , w e r e i n v e s t i g a t e d i n t h e p r e s -e n t s t u d y . E x p e r i m e

7、n t a l r e s u l t s i n d i c a t e d t h a t t h e b e s t m e d i u m , t e m p e r a t u r e a n d p H w e r e , r e s p e c -t i v e l y , P S A , 25 a n d p H 9. 0f o r t h e f u n g u s g r o w t h . U V l i g h t (12h /d w a s t h e m o s t a p p r o p r i a t e f o r i t s s p o r u l a t

8、i o n , a n d t h e s p o r e p r o d u c t i o n r e a c h e d 3. 44×105 p e r d i s h a f t e r 20d a y s . T e m p e r a -t u r e , l i g h t i n t e n s i t y a n d m o i s t u r e w e r e s h o w n m a r k e d i m p a c t s o n c o n i d i a l g e r m i n a t i o n a n d i n f e c -t i o n

9、 o f t h e f u n g u s . T h e h i g h e s t d i s e a s e i n t e n s i t y o n t h e p r i m a r y l e a v e s a t 21d a y s a f t e r i n o c u l a t i o n a n d i n c u b a t i o n a t 30 r e a c h e d 7. 77, o b v i o u s l y h i g h e r t h a n a t 20 a n d 25. M o i s t u r e d u r a t i o n

10、w a s s h o w n a n i m p o r t a n t f a c t o r a f f e c t i n g i n f e c t i v i t y o f t h e p a t h o g e n . 95%i n o c u l a t e d l e a v e s w e r e i n f e c t e d a n d d i s e a s e d a f t e r 4w e e k s w h e n t h e y w e r e m a i n t a i n e d f o r m o r e t h a n 12h o u r s o

11、f w e t n e s s a t 25 , a n d t h e d i s e a s e s e v e r i t y r e a c h e d 5. 21. H i g h l i g h t i n t e n s i t y (3 000l x s h o w e d m a r k e d i n h -i b i t i v e e f f e c t o n c o n i d i a l g e r m i n a t i o n a n d i n f e c t i o n o f t h e p a t h o g e n a n d t h u s r e

12、 s u l t e d i n l o w e r d i s -e a s e s e v e r i t y t h a n l o w l i g h t i n t e n s i t y (1 200l x o n t h e p l a n t s .K e y w o r d s :W a t e r h y a c i n t h ; B l a c k s p o t ; A l t e r n a r i a t e n u i s s i m a ; C u l t u r a l c o n d i t i o n s ; F u n g a l g r o w t

13、h ; S p o r u l a t i o n ; P a t h o g e n i c v i t y收稿日期 :2011-06-01基金项目 :国家公益性行业专项 (201103027作者简介 :胡 丽 (1985- , 女 , 四川江油人 , 在读硕士研究生 , 研究方向 :病原真菌学 。 E -m a i l :h u l i k y j y 2009126. c o m *通讯作者 :谭万忠 (1955- , 男 , 重庆人 , 教授 , 主要从事外来入侵生物等领域的研究 。 E -m a i l :d r w z t a n 126. c o m 水 葫 芦 (E i c h

14、 h o r n i a c r a s s i p e s 为 雨 久 花 科 (P o n t e d e r i a c e a e 凤 眼 莲 属 (E i c h h o r n i a K u n t h 漂 浮水生植物 , 是世界十 大 害草和 我 国 重 要的外来入 侵植物之一 1。 目前 , 水葫芦主要通过人工机械 、 化 学农药和生物防治方法防除 2。 但人工打捞只能在 短时间 、 小范围内起作用 , 而且费时费力 。 机械搅灭 受地域限制 , 成本高 , 不 适合推 广 , 而且打捞的水葫 芦若不及时处理 , 蚊虫滋生 , 也会严重影响环境和人 畜健康 。 化学除草不仅费

15、用高 , 而且可 能直接造成 环境污染 。 因此 , 近年来 应 用植 物 病 菌 控制水葫芦 的生物防治研究受到人们的高度关注 。 国外报道了 70多种水葫 芦 致 病 真 菌 3-5, 其 中 有 7种 强 致 病 菌 株具有开发成水葫芦真菌除草剂的生 防 应用潜 力 , 罗得曼尼尾孢 (C e r c o s p o r a r o d m a n i i 防除水葫芦已 获专利保护 6。 我国已报道了 6种致病真菌 6-8, 其 中殷利利等报道的水葫芦黑斑病菌 水葫芦链格 孢 (A l t e r n a i a t e n u i s s i m a 9对水葫芦有很强的致病 性 , 其

16、致病机制主要在于产生除草活性的毒素 , 因而 在水葫芦的生物控制中具有潜在的应用价值 。 本试 验研究了温度等几个主要因子对该病菌生长和致病 性的影响 , 以期为病菌的大 量 发 酵 和 真 菌除草剂的 研制奠定基础 。1 材料和方法1. 1 试验材料供 试 菌 株 :水 葫 芦 链 格 孢 (A . t e n u i s s i m a WH 26B 菌株 由 西 南 大 学 真 菌 病 害 研 究 室 分 离 获 得 , 经单孢纯化培养后移入 P S A 培 养 基 试 管 斜 面 , 4 保存 , 使用前移入新平板培养基上培养活化 。 供试培养基 及 其 配 方 : W L A (水

17、葫 芦 叶 片 培 养基 :水葫芦叶片 200g , 加 适 量 水 煮 烂 捣 碎 , 滤 去 残渣 , 加 入琼脂粉 20g , 煮 沸 并 定 容 至 1 000m L ; P D A (马铃薯葡萄糖培养基 :去皮马铃薯 200g , 加 适量水煮烂 , 过滤后加入葡萄糖 20g 和琼脂粉 20g , 煮沸并 定 容 至 1 000m L ; P S A (马 铃 薯 蔗 糖 培 养 基 :去皮马铃薯 200g , 加适 量 水 煮 烂 , 过 滤 后 加 入 蔗 糖 20g 和 琼 脂 粉 20g , 煮 沸 后 加 水 定 容 至 1 000m L ; C A A (胡萝卜培养基 :

18、胡萝卜 200g , 加 适量水煮烂 , 过滤后加入琼脂粉 20g , 煮沸并定容至 1 000m L ; WA (清水洋菜培养基 :琼脂粉 20g , 加 水煮沸并定容至 1 000m L ; O S A (燕麦片培养基 :燕麦片 30g , 加水煮烂 , 过滤后加蔗糖 10g 和琼脂粉 20g , 煮沸后加水定容至 1 000m L ; W L P S A (水葫 芦马铃薯蔗糖培养基 :水葫芦植株 100g , 去皮马铃 薯 100g , 加适 量 水 煮 烂 捣 碎 , 滤 去 残 渣 , 加 入 蔗 糖 10g 和琼脂粉 20g , 煮沸后加水定容至 1 000m L ; W L P

19、D A (水葫芦 马 铃 薯 葡 萄 糖 培 养 基 :水 葫 芦 植 株 100g , 去皮马 铃 薯 100g , 加 水 煮 烂 , 捣 汁 过 滤 后 加葡 萄 糖 10g 和 琼 脂 粉 20g , 煮 沸 后 加 水 定 容 至 1 000m L ; P C A (马铃薯胡萝卜培养基 :马铃薯 20 g 和胡萝卜 20g , 加 适 量 水 煮 烂 , 捣 汁 过 滤 , 加 琼 脂 粉 20g , 煮沸 后 加 水 定 容 至 1 000m L 。 所 有 培 养 基 均用 N a O H 或 H C l 溶液调节至中性 (p H 值 7. 0 , 并倒入 9c m 培 养 皿

20、(约 5m L /皿 制 成 平 板 培 养 基 备用 。1. 2 试验方法1. 2. 1 水葫芦链格孢主要培养特性测试1. 2. 1. 1 培养基试验 在 25 恒温培养 5d 的水 葫芦链格孢菌落上 , 用打孔器沿菌落边缘打取直径 为 4. 0m m 的 菌 饼 , 接 于 WA 、 C A A 、 P S A 、 P D A 、 W L A 、 O S A 、 W L P D A 和 W L P S A 培养基平板中央 。 每种培 养 基 处 理 重 复 5次 , 于 25 培 养 箱 中 培 养 5d 后 , 用垂直十字法逐日测量记载菌落直径 。 1. 2. 1. 2 温度试验 在 2

21、5 恒温培养 5d 的菌落 上 , 用打孔器沿 菌 落 边 缘 打 取 直 径 为 4. 0m m 的 菌 饼 , 置于 P D A 培 养 基 平 板 中 央 , 分 别 于 5 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 、 35 、 40 (±0. 5 8个温 度条件下培 养 , 每 个 温 度 处 理 重 复 5次 , 连 续 观 察 5d , 用垂直十字法逐日测量菌落直径并记录数据 。 1. 2. 1. 3 酸碱度试验 试验采用 P D A 培 养基 , 共 设置 11个酸碱度处理 。 用 1. 0m o l /L 的 N a O H 和 H C l 溶液 将 培 养

22、 基 的 p H 值 分 别 调 节 到 4. 0、 5. 0、 6. 0、 6. 5、 7. 0、 7. 5、 8. 0、 9. 0、 10. 0、 11. 0和 12. 0, 每 个处理重复 5次 。 将菌饼置于 25 培养箱中培养 , 连续观察 5d , 用垂直十字法逐日测量菌落直径并记 录数据 。1. 2. 1. 4 光照对产孢量的影响试验 在 25 恒温 箱中培养 5d 的 菌 落 上 , 用 打 孔 器 沿 菌 落 边 缘 打 取 直径为 4. 0m m 的 菌 饼 , 置 于 P C A 平 板 中 央 , 分 别 在近 40W 紫外灯 (N U V 、 3 000l x 日 光

23、 灯 (D L 和 黑暗条件下连续培养 20d , 每 个 处 理 重 复 5次 。 第 20天在每皿培 养 基 上 加 入 1m L 的 灭 菌 水 , 用 盖 玻 片轻刮培养基表面 。 将孢子悬液用 0. 165m m 的网 筛过滤后 , 滴于血球 计 数板上 , 在 10×20倍显微镜 下计数 , 计算孢子浓度 。1. 2. 2 3个 主 要 因 子 对 水 葫 芦 链 格 孢 侵 染 力 的 影 响试验1. 2. 2. 1 温度试验 在人工气候箱中 , 分设 20 、25 和 30 (±0. 5 3个 温度梯度处理 , 光 照 强 度设定为 3 000l x 。 按

24、菌丝湿质量与无菌水 1 100·7 7· 第 11期 胡 丽等 :几个主要因子对水葫芦链格孢生长和侵染力的影响的比例混合 , 充分搅拌配制 成 菌 丝 片 断 悬浮液 。 接 种前 , 用无菌水将水葫芦叶 片 冲 洗 干 净 。 采用涂抹 法接种 , 用无菌毛刷将菌 丝悬液 均 匀 地 涂抹于水葫 芦叶片上 , 至叶片上菌丝 液 开始 下 滴 为 止 。 以 无菌 水涂抹的水葫芦叶片作为对照 。 每个温度下处理 5株植株 (即 5次重复 , 每株接种 原生叶片和新生叶 片 56片 。 接种后 , 用塑料袋套在水葫芦上保持高 湿度 , 48h 后 移 去 塑 料 袋 。 接

25、种 后 每 隔 7d 观 察 记 录叶片感病率 , 测定病害严重度 。1. 2. 2. 2 光照试验 在 R H 75%的 (25±0. 5 恒 温保湿室中 , 光照强度设 1 200l x 和 3 000l x 2个处 理 。 每个光照下处理 5株植株 , 每株接 种原生叶片 和新生叶片 56片 。 接种 、 观察记录方法同上 。 1. 2. 2. 3 保湿时间试验 将接 种后的水葫芦用塑 料袋分 别 保 湿 0、 12、 24、 32、 48h , 之 后 移 至 (25±0. 5 、 R H 70%、 光照强 度 3 000l x 的生 长 箱 中 培 养 , 每个保

26、湿时间处理 5株水葫芦 , 每株接种原生叶 片和新生叶片 56片 。 接种 、 观察记录方法同上 。 1. 2. 3 病害严重度记载和数据 处理 用求积仪测 定叶片面积的大小 , 再测定叶斑面积的总和 , 则发病 面积百分率等于叶斑面积与叶片面积的比值 。 根据 所得值 , 参 照 F r e e m a n 和 C h a r u d a t t a n (1984 的 病 害分级标准 10(表 1 观 察记载 病 情 , 并计算对应病 害严重度和平均严重度 。 病 害 严 重 度 = (接 种叶 片病害 严 重 度 /接 种 叶 片 数 , 叶 片 平 均 病 害 严 重 度 = (叶片病

27、害严重度 /叶片总数 。将各项试 验 记 录 数 据 分 别 录 入 相 应 的 数 据 文 件 , 用 M i c r o s o f t E x c e l 和 S P S S 12. 0软件计算各处 理的平均数和标准差 , 并进行统计分析比较和作图 。表 1 F r e e m a n 和 C h a r u d a t t a n 的病害严重度分级标准 病害严重度级数病症0茎部及叶片均无病斑1叶片上 14个病斑 , 茎部无病斑2叶斑面积小于 25%, 茎部无病斑3叶斑面积小于 50%, 茎部无病斑4叶斑面积小于 50%, 叶尖死亡 , 茎部有病斑 5叶斑面积小于 50%, 10%的叶尖

28、死亡 , 茎部有病斑 6叶斑面积小于 75%, 30%的叶尖死亡 , 茎部有病斑 7叶斑面积 75%以上 , 60%的叶片死亡8叶片死亡 , 茎部仍是绿色 , 但有严重病斑9叶片和茎死亡2 结果与分析2. 1 水葫芦链格孢的主要培养特性2. 1. 1 培养基对水葫芦链格孢菌落生长的影响 不同种类培养 基 对 菌 落 生 长 影 响 非 常 显 著 (图 1 , 主要表现在菌落生长的快慢和菌丝的疏密不同 。 在供 试的 8种培养基上 , 该菌都能正常生长 , 除 W L P S A 和 W L P D A 之间无差异外 , 其他 培 养 基 之 间 均 存 在 极 显 著 差 异 (P <

29、0. 01 。 P S A 最 适 宜 该 菌 生 长 , 在 25 下培 养 5d 后 菌 落 直 径 达 到 70. 1m m , 每 天 平 均增长达 14m m , 菌 丝 致 密 , 明显优于其 他 培 养 基 ; 在 WA 培养基 上 , 菌 落 生 长 最 缓 慢 , 且 菌 丝 较 为 稀 疏 , 培养 5d 后菌落直径仅为 42. 7m m 。数据为 5次试验测定的平均值 , 不同字母表示邓肯氏新复极差检验结果极显著 (P <0. 01 。 图 2同图 1 在不同培养基上培养 5d 后水葫芦链格孢的菌落直径2. 1. 2 温度对水葫芦链格孢菌落生长的影响 图 2表明 ,

30、 各种温度下菌落的平均生长率有明显的差 异 , 温度是影响菌株生长的重要因子 。 菌株在 10 35 都能生长 , 但生长的适温范围是 2530 。 在 25 条 件 下 培 养 , 菌 落 平 均 生 长 直 径 最 大 , 为 70. 0m m , 此时 其 生 长 速 率 为 14m m /d 。 30 时 菌 落生长直 径 为 69. 5m m 。 25 和 30 处 理 与 其 他 处理差异均极显著 , 而 25 和 30 之间无极显著差 异 。 25 处 理 下 的 菌 落 生 长 直 径 分 别 是 10 、 15 、 20 处理的 5. 12、 1. 83和 1. 47倍 ,

31、这些结 果 说明 , 水 葫 芦 链 格 孢 生 长 的 最 适 温 度 为 25 。 在 5 和 40 下 , 菌落不能生长 , 其生长速率几乎为 0; 35 时生长极缓慢 。图 2 不同温度下培养 5d 后水葫芦链格孢的菌落直径·87·河南农业科学 第 40卷 2. 1. 3 p H 值 对 水 葫 芦 链 格 孢 菌 落 生 长 的 影 响 在 p H 值 4. 012. 0的 范 围 内 , 水 葫 芦 链 格 孢 均 能 生长 (图 3 。 p H 值 6. 510. 0适 宜 该 菌 的 生 长 , 且处理之间差异不显著 , 其中 该 菌 最 佳 生 长 p H

32、 值 是 9. 0, 培 养 5d 后菌落直径达 74. 5m m ; 极 酸 与 极 碱的条 件 对 该 菌 生 长 具 有 很 大 的 影 响 , 当 p H 值 4. 0和 12. 0时 , 菌 落 生 长 明 显 较 缓 慢 , 直 径 分 别 为 33. 1m m 和 62. 3m m , 与其他处理之 间 均存在显 著 差异 (P <0. 05 。数据为 5次试验测定的平均值 , 不同字母表示邓肯氏新复极差检验结果显著 (P <0. 05 。 图 5同图 3 不同 p H 值下培养 5d 后水葫芦链格孢的菌落直径2. 1. 4 光照对水葫芦链格孢产 孢量的 影响 不同

33、光照条件下 , 水葫芦链格孢 产 孢 量 明 显 不同 。 在黑 暗条件下培养 , 该菌不产生分生孢子 ; 日光灯条件下 培养 , 其产 孢量为 1. 36×105个 /皿 ; 而近紫外灯照 射处理的产孢量达到 3. 44×105个 /皿 , 是日光灯照 射处理的 2. 53倍 , 两 处 理 间 差 异 显 著 (P <0. 05 , 表明光照是影响该菌株产孢量的重要因素 , 且 近紫 外光诱导产孢效果明显 。2. 2 3个主要因子对水葫芦链格孢侵染力的影响 2. 2. 1 接种温度 用菌株的菌丝悬浮液 (菌丝湿质 量与无菌水 1 100 对 水葫芦 植 株 涂 抹

34、 接种 , 放置 在 20 、 25 、 30 下培养 。 第 21天的观察数据表 明 (表 2 , 接 种 后 温 度 对 水 葫 芦 链 格 孢 菌 丝 致 病 性 有显著的影响 。 在 2030 , 原生叶片病害严重度 随温度升高而增加 。 30 处理的原生叶片的病害严 重度显著高于 其 他 2个 处 理 , 达 到 7. 77, 25 处 理 的原生叶片病害严重度为 5. 32, 而 20 处理的原生 叶片病害严重度最低 , 为 3. 14。 不同温度下新生叶 片病害严重度差异不显著 , 但总 体上也随温度升高 而增加 。 不 同 温 度 下 叶 片 平 均 病 害 严 重 度 差 异

35、 显 著 , 30 处理的叶片平均 病害严 重 度 明 显高于其他 2个处理 , 达 到 6. 04, 是 20 的 2. 29倍 , 是 25 的 1. 4倍 。由此可以看出 , 在一定温度范围内 , 温度越高水 葫芦链格孢的侵染率就越高 , 侵染速度也越快 , 植株 的发病程度也越严重 , 这说明温度是该菌侵染水葫 芦的一个重要因素 。表 2 温度对水葫芦链格孢致病力的影响温度 /原生叶片病害严重度新生叶片病害严重度叶片平均 病害严重度 20 3. 14±0. 19c 0. 84±0. 08a 2. 64±0. 20c 25 5. 32±0. 18b

36、 0. 94±0. 06a 4. 30±0. 19b 30 7. 77±0. 18a 1. 00±0. 06a 6. 04±0. 17a 注 :数据为 5次测定的平均值 , 同列不同字母表示邓肯氏新复极差 检验结果显著 (P <0. 052. 2. 2 光照 从图 4可以看出 , 用菌株菌丝接种水 葫芦后 , 在 弱 光 (1 200l x 条 件 下 , 水 葫 芦 链 格 孢 引 起的原生叶片病害严重度 、 叶片平均病害严重度和 新生叶片病害 严 重 度 在 第 28天 时 分 别 达 到 9. 29、 8. 17和 1. 65, 而

37、 强 光 照 (3 000l x 处 理 的 为 6. 57、 5. 51和 0. 59。 从以上数据可看出 , 弱光照处理的新 老叶片病害严重度及叶均病害严重度均较对照处理 (3 000l x 的严 重 度 级 数 高 , 而 且 差 异 明 显 , 说 明 接 种后光照对该病菌的致病性有明显的影响 , 在一定 范围内光照对该菌的侵染有抑制作用 。图 4 不同光照条件下水葫芦黑斑病病情发展趋势 2. 2. 3 保湿时间 从图 5可以看出 , 不同的保湿时 间对菌株的致病力影响存在显著差异 。 将接种的水 葫芦植株直接放入光照 培 养 箱 , 4周 后 水 葫 芦 链 格 孢能引 起 植 株

38、轻 微 发 病 , 叶 片 平 均 病 害 严 重 度 为 0. 63, 感病率为 40%左右 。 保湿 12h 后再放入培养 箱 , 4周后 , 植株叶片平均病害严重度达到 5. 21, 感 病率达 到 95%; 保 湿 24h , 叶 片 平 均 病 害 严 重 度 达 到 5. 63, 感病率达到 100%; 保湿 24h 以上 , 植株感 病率均为 100%, 叶片平均病害严重度进一步提高 , 但增长速度较缓慢 , 保湿 48h 的叶片平均病害严重 度最高 , 达到 6. 54。 由 此 说 明 , 保 湿 条 件 可 以 促 进 水葫芦链格孢的菌丝体迅速生长 , 加快对水葫芦的 侵染

39、 , 保湿时间越长越有利于 该菌的侵染 。 而从发 ·9 7· 第 11期 胡 丽等 :几个主要因子对水葫芦链格孢生长和侵染力的影响病速度看 , 0h 到 12h 阶段明显快于其他几个阶 段 , 超过 24h 后叶片病害严重度虽略有升高 , 但发病速 度缓慢 。 因 此 , 在 实 际 应 用 中 将 保 湿 时 间 维 持 在 12h 就可使该菌很好的侵染 。 水葫 芦 生 长 在 水 域 , 维持 12h 的保湿条件是完全可能的 。图 5 保湿时间对水葫芦链格孢致病力的影响3 结论与讨论本研究测定了培养基 、 温度 、 酸碱度对水葫芦链 格孢菌生长以及光照对产孢量的影响

40、 , 结果表明 , 不 同培养基对菌落生长影响非常显著 , 马铃薯蔗糖培 养基 (P S A 上该菌生长最快 , 菌丝紧密 , 因此是该真 菌的最佳培养基 ; 温度对该菌的影响非常明显 , 其在 1530 均可生 长 , 25 时 生 长 最 快 , 5d 后 菌 落 直 径为 70m m , 低温和高温能明显抑制该菌菌丝生长 , 5 和 40 培 养 时 菌 丝 停 止 生 长 ; 在 p H 值 4. 0 12. 0的范围内 , 菌 落 均 能 生 长 , 其 适 宜 的 酸 碱 度 范 围是 p H 值 6. 510. 0, 最适 p H 值约为 9. 0, 培养 5 d 后菌落直径 达

41、 到 74. 5m m , 在 p H 值 4. 0和 12. 0时菌落生 长 明 显 较 缓 慢 ; 在 近 紫 外 光 (12h 光 /12h 暗 下培养 20d 后 , 菌 株 产 孢 量 是 日 光 灯 照 射 处 理 的 2. 53倍 , 所以最适合该菌产孢的光照条件是近紫 外光 (12h 光 /12h 暗 。 这些结果与冯飞等 11对细极 链格孢 (A . t e n u i s s i m a 和王婷等 12对 交链格孢 (A . a l t e r n a t a 生物学特性研究的结果 基本相近 , 仅在对 p H 值变化的反应方面存在一定的差异 。 这可能是菌 株在不同的寄主

42、植物上产生不同的寄生适应性 , 而这 些适应性导致在一些生物学特性上可能显示出一定 的差别 。 温度 、 湿度和光照对该菌的致病力也有非常 显著的影响 , 适当的高温 、 高湿和弱光照处理均有利 于病菌的侵染 , 这与许多植物病原真菌的侵染特性一 致 。 因此 , 如果用水葫芦链格孢在田间接种时 , 最好 选在较湿热天气的傍晚 (弱光 喷施菌体溶液 , 这样有 利于侵染发病和提高对杂草的控制效果 。 本研究明确了水葫芦链格孢的主要生物学特性 和侵染特性 , 为进一步研究该菌的扩繁发酵技术奠定 了基础 , 对于有效利用该菌也有重要参考价值 。 然而 要在水葫芦防治实践中运用该菌进行生物控制 ,

43、还需 对其致病机制 、 寄主专化性 、 环境安全性 、 发酵和制剂 技术等进行系统深入的研究 。参考文献 :1 马丽娜 , 朱育菁 , 林抗美 , 等 . 水葫芦的形态特征及药剂 防除初步试验 J . 中国农学通报 , 2010, 26(8 :268-271. 2 刘念江 , 吴莉宇 . 水 葫 芦 防 治 方 法 研 究 进 展 J . 热 带 农 业科学 , 2006, 26(5 :66-70.3 B a r r e t o R W , E v a n s H C . F u n g a l p a t h o g e n s o f s o m e B r a -z i l i a n

44、a q u a t i c w e e d s a n d t h e i r p o t e n t i a l u s e i n b i o c o n t r o l C M o r a n V C , H o f f m a n n H. P r o c e e d i n g s o f t h e 9t h i n -t e r n a t i o n a l s y m p o s i u m o n b i o l o g i c a l c o n t r o l o f w e e d s . R o n d e b o s c h :U n i v e r s i t

45、y o f C a p e T o w n , 1996:121-126. 4 D a g n o K , L a h l a l i R , D i o u r t e M. E f f e c t o f t e m p e r a t u r e a n d w a t e r a c t i v i t y o n s p o r e g e r m i n a t i o n a n d m y c e l i a l g r o w t h o f t h r e e f u n g a l b i o c o n t r o l a g e n t s a g a i n s t w a t e r h y a c i n t h (E i c h h o r n i a c r a s s i p e s J . J o u r n a l o f A p