MS8UPLC仪器操作ppt课件

1、2008 Waters Corporation 12008 Waters Corporation2008 Waters Corporation 2二元高压梯度系统(BSM) 4种溶剂可选(实际运行中只用两种) 每台泵均为Alliance专利设计 每台泵最大流速2ml/min(通常工作流速:0.2-0.6ml/min)自动进样器(针内针设计)(SM) 常规248位样品盘 使用2ml进样瓶高采样速率的TUV或PDA及ELSD检测器 采样速率最高可达80点秒仪器须在软件控制下运行(Empower 或 Masslynx)2008 Waters Corporation 3 制备新鲜流动相 打开计算机及网

2、络集线器电源,进入Windows操作系统 打开泵和进样器电源,待通过自检后 打开MassLynx软件 打开控制台界面(在Inlet Method界面Acquity Additional Status右侧) 进行仪器的Start up功能(若是与以前相同的流动相且仪器停用时间并不长,只需做refresh功能) 设定0.1ml/min流速平衡色谱柱及系统(有液体流出) 打开TUV(PDA)检测器电源2008 Waters Corporation 4 UPLC对流动相的要求对流动相的要求 有机溶剂要求用色谱纯有机溶剂要求用色谱纯(进口名牌最好进口名牌最好) 水或缓冲盐流动相要用超纯水水或缓冲盐流动相

3、要用超纯水(18.2M),当天制备当天制备 UPLC对洗针液的要求对洗针液的要求 强洗针液用甲醇强洗针液用甲醇/水或乙腈水或乙腈/水水(有机相的比例高有机相的比例高 于梯度洗脱的强溶剂的比例于梯度洗脱的强溶剂的比例) 弱洗针液用纯水或含少量甲醇或乙腈的水溶弱洗针液用纯水或含少量甲醇或乙腈的水溶 液液(有机相的比例低于梯度洗脱的起始比例有机相的比例低于梯度洗脱的起始比例) 清洗柱塞密封垫清洗柱塞密封垫(Seal Wash)的溶液的溶液 超纯水含超纯水含5%-10%甲醇甲醇 特别提示特别提示: 以上溶剂或溶液均需以上溶剂或溶液均需: 用用0.22m的膜过滤并脱气的膜过滤并脱气 用洁净的玻璃容器盛放

4、用洁净的玻璃容器盛放,避免污染避免污染2008 Waters Corporation 5 打开计算机电源打开计算机电源,进入进入Windows操作系统操作系统 打开打开Hub(网络集线器网络集线器)电源电源 打开打开ACQUITY UPLC BSM和和SM电源电源 先不要开先不要开TUV或或PDA 电源电源 光学检测器的电源需待流动池内充满液体后再打开光学检测器的电源需待流动池内充满液体后再打开 待各仪器设备通过自检后待各仪器设备通过自检后(绿灯长亮绿灯长亮),打开打开MassLynx软件软件2008 Waters Corporation 62008 Waters Corporation 7点

5、击此按钮点击此按钮2008 Waters Corporation 8系统压力系统压力流动相流速流动相流速所用所用A溶剂溶剂(A1或或A2)A溶剂比例溶剂比例B溶剂比例溶剂比例所用所用B溶剂溶剂(B1或或B2)停流速停流速2008 Waters Corporation 9 实际柱温实际柱温柱温设定柱温设定样品管理器实际温度样品管理器实际温度样品管理器温度设定样品管理器温度设定控制台图标控制台图标2008 Waters Corporation 10紫外吸光度紫外吸光度紫外吸收波长紫外吸收波长检测器灯的状态检测器灯的状态打开或关闭紫外灯打开或关闭紫外灯2008 Waters Corporation

6、11检测器灯的状态检测器灯的状态打开或关闭紫外灯打开或关闭紫外灯2008 Waters Corporation 12在在Sample Manager 控制面板上，单击控制台图标控制面板上，单击控制台图标. 打开打开ACQUITY 控制台窗口控制台窗口 2008 Waters Corporation 132008 Waters Corporation 142008 Waters Corporation 152008 Waters Corporation 162008 Waters Corporation 172008 Waters Corporation 182008 Waters Corpor

7、ation 192008 Waters Corporation 202008 Waters Corporation 212008 Waters Corporation 222008 Waters Corporation 232008 Waters Corporation 24 灌注柱塞杆清洗液(Prime Seal wash) 以下情况需要做此操作Prime,例如: 新安装仪器或泵流路中溶液走干了 当泵几小时或更长时间未用 用过缓冲液流动相之后 注意: 为避免螺线阀座和密封垫的损坏,不要使用非挥发性的缓冲液作为Seal wash的溶剂 为避免污染,请勿循环使用Seal wash溶剂 推荐: S

8、eal wash溶剂中有机相比例不要超过10% Seal wash前请检查溶剂是否足够2008 Waters Corporation 25将Seal wash出口端从废液盘上摘下,连接到注射器上选择 ControlPrime Sealwash,点击之2008 Waters Corporation 26 点击后,可以听到Seal wash 阀的开关声.此时: 慢慢抽注射器,直到有液体流出,然后将出口管再接回到废液盘上 或者取下吸滤头,用吸满清洗液的注射器,从入口端注入清洗液,直至出口管有液体流出 点击 可停止Prime过程2008 Waters Corporation 27湿灌注湿灌注(Wet

9、Priming)二元溶剂管理器二元溶剂管理器 用于排除泵头及管路中的气泡用于排除泵头及管路中的气泡 用于更换从储液瓶到溶剂管理器之间的溶剂用于更换从储液瓶到溶剂管理器之间的溶剂 Prime时的流速已设定为时的流速已设定为:A泵和泵和B泵各泵各4ml /min,总流总流 速为速为8mL/min,无法改动无法改动在下列情况下需要在下列情况下需要Prime二元溶剂管理器二元溶剂管理器启用新的二元溶剂管理器或新的系统启用新的二元溶剂管理器或新的系统停机停机4小时后再次开机小时后再次开机更换流动相更换流动相2008 Waters Corporation 28在此界面下在此界面下,选择选择 Control

10、Prime A/B Solvents.2008 Waters Corporation 292008 Waters Corporation 30 做过做过BSM的的wet prime之后，要准备样品管理器，之后，要准备样品管理器， 准备样品管理器包括如下步骤准备样品管理器包括如下步骤(新安装仪器时新安装仪器时)： 灌注灌注(Priming Syringe)注射器注射器 检查确认密封检查确认密封 (Characterizing the seal ) 检查确认进样针和定量环体积检查确认进样针和定量环体积 (Characterizing the needle and sample loop volum

11、es ) 加载加载 (Loading)样品盘样品盘2008 Waters Corporation 312008 Waters Corporation 32 灌注进样针和样品注射器的目的是灌注进样针和样品注射器的目的是: 准备样品管理器准备样品管理器 冲洗里面的进样针、外部的刺穿针，和进样口部分冲洗里面的进样针、外部的刺穿针，和进样口部分 排除管路中的气泡排除管路中的气泡 注：在灌注过程中，用溶剂充满进样针，在改变溶剂，或者排除管路注：在灌注过程中，用溶剂充满进样针，在改变溶剂，或者排除管路中的气泡时，需进行灌注进样针和样品注射器中的气泡时，需进行灌注进样针和样品注射器 提示提示: 确保用于灌注

12、的溶剂有合适的组成确保用于灌注的溶剂有合适的组成,它应该是高纯的它应该是高纯的,并并 且几种溶剂是互溶的且几种溶剂是互溶的 所有的试剂瓶都要使用滤头所有的试剂瓶都要使用滤头, 并确保溶剂体积足够用于做并确保溶剂体积足够用于做 灌注灌注,例如例如,作作5次灌注次灌注,每种溶剂要用去大约每种溶剂要用去大约20 mL 要求要求: 在检定密封之前必须先完成对样品管理器的灌注在检定密封之前必须先完成对样品管理器的灌注 2008 Waters Corporation 33从左边的目录中，选择从左边的目录中，选择Sample Manager,单击单击 Control Prime syringes 2008

13、Waters Corporation 34 选择选择 “ Sample syringe and wash syringes” 在在Number of cycles中输入要作灌注的次数中输入要作灌注的次数 (默认值为默认值为 1)(建议建议: 如果更换溶剂，建议做如果更换溶剂，建议做57次灌注次灌注)单击单击 OK. 当系统状态是当系统状态是 “Idle(待机待机),” 就表示灌注做完了就表示灌注做完了提示提示: 每做一次灌注大约需要每做一次灌注大约需要24分钟分钟2008 Waters Corporation 35在控制台的在控制台的Sample Manager窗口窗口,单击单击Control

14、 Wash Needle 出现出现Wash Needle对话框对话框 输入需要的强洗针液的体积输入需要的强洗针液的体积. 默认为默认为: 0.0 L 提示提示: 同时使用强洗针液和弱洗针液同时使用强洗针液和弱洗针液 会增加时间和溶剂的消耗会增加时间和溶剂的消耗,因为因为 系统在下一次进样之前必须将系统在下一次进样之前必须将 强洗针液完全除去强洗针液完全除去 在弱洗针框中输入弱洗针液的体积在弱洗针框中输入弱洗针液的体积, 默认值默认值: 200.0 L 建议值建议值:200 到到 500 L 单击单击OK. 开始洗针过程开始洗针过程 当洗针过程完成时当洗针过程完成时, 回到回到“Idle状态状态

15、 洗针未完成时中断洗针未完成时中断, 可以点击可以点击Control中的中的Reset SM2008 Waters Corporation 36 冲洗进样针是一项可选程序，它是让强洗针液和冲洗进样针是一项可选程序，它是让强洗针液和/或弱洗针液或弱洗针液 通过进样针和进样口部分通过进样针和进样口部分 清洗进样针可以去掉进样针、刺穿针和进样口的外部和内部清洗进样针可以去掉进样针、刺穿针和进样口的外部和内部 的残留的残留 可以通过进行冲洗针的操作来探知通过废液管的流路是否通可以通过进行冲洗针的操作来探知通过废液管的流路是否通 畅畅,以及确证洗针系统是否被灌注并运行正常以及确证洗针系统是否被灌注并运行

16、正常 要求要求: 不要使用缓冲盐作为洗针液不要使用缓冲盐作为洗针液. 提示提示: 灌注系统已包含冲洗进样针灌注系统已包含冲洗进样针, 所以只要做了灌注系统所以只要做了灌注系统,就就 可以省略此步操作可以省略此步操作 2008 Waters Corporation 37 特别提示特别提示: 不能让强洗针液接触样品不能让强洗针液接触样品 弱洗针液要与流动相一致弱洗针液要与流动相一致,或与初始梯度相同或与初始梯度相同 如果稀释样品，弱洗针液应与稀释样品的溶剂相同如果稀释样品，弱洗针液应与稀释样品的溶剂相同 用于洗针的有机溶剂种类应与色谱使用的有机溶剂一致用于洗针的有机溶剂种类应与色谱使用的有机溶剂一

17、致 经验规则经验规则: 在洗针过程中应确保强洗针液完全被弱洗针液所取代在洗针过程中应确保强洗针液完全被弱洗针液所取代 洗针程序会先用强洗针液洗针洗针程序会先用强洗针液洗针,再用一定体积弱洗针液再用一定体积弱洗针液 去洗针去洗针(其默认体积是其默认体积是200 L ), 可以增加弱洗针液的体可以增加弱洗针液的体 积积,但不能减少但不能减少.一般需要一般需要3倍于强洗针液体积倍于强洗针液体积2008 Waters Corporation 38 弱洗针液和强洗针液的选择取决于样品和所使用的流动相弱洗针液和强洗针液的选择取决于样品和所使用的流动相, , 确保流动相和缓冲液是互溶的确保流动相和缓冲液是互

18、溶的 要想得到好的柱效，弱洗针液必须等同于要想得到好的柱效，弱洗针液必须等同于初始梯度的流动相初始梯度的流动相等度时和流动相比例相同等度时和流动相比例相同 不推荐缓冲盐作为弱洗针液不推荐缓冲盐作为弱洗针液 推荐的弱洗针液和强洗针液如下表推荐的弱洗针液和强洗针液如下表: :色谱条件弱洗针溶剂强洗针溶剂反相/缓冲盐溶液 100% H2O 或 0 到 25%甲醇或乙腈50 %到100% 甲醇或乙腈2008 Waters Corporation 39柱加热器(Column Heater ,C/H) 置于S/M 的顶部 同时也是 Sample Manager 的顶盖当使用 Mass Spec 时,柱加热

19、器可以从原来的位置外转180 度这种设计是为了使 S/M 和 C/H 以及 C/H 和检测器 (或质谱)之间的连接管路更短 , 以尽量地减小扩散体积 2008 Waters Corporation 40预热稳定器会减小对环境温度波动的敏感度,并减小/最小化谱带展宽 新的衬垫(和浅盘)使之较易于安装/移动预热稳定器P/N 205000291柱预热稳定器组件包2008 Waters Corporation 41用于ACQUITY UPLC 色谱柱的 In-Line Filter (在线过滤器)部件号P/N 205000343 Column inlet In-line filter unit Stabilizer tube assembly Flow Place wrenches here to connect In-line filter unit to Column inlet. Place wrenches here to connect In-line filter unit to Stabilizer tube assembly. 2008 Waters Corporation 42- 整体式配件整体式配件,手指拧紧手指拧紧 即可即可- 截取截取 0.0025长的一