土垄大白蚁巢的药效研究

1、    土垄大白蚁巢的药效研究        摘要【目的】观察土垄大白蚁巢(缩写MA，下同)制剂的镇咳、祛痰、平喘、抗炎的药理作用。【方法】用SO2与氨水(NH4OH)引咳法观察MA的镇咳作用；用酚红与毛细管排痰法观察MA的祛痰作用；用气管容积法与喷雾致喘法观察MA的平喘作用；用角叉菜胶与棉球植入法观察MA的抗炎作用。【结果】MA的水提物和水提醇溶物对SO2、氨水引咳的小鼠可明显延长引咳潜伏期，减少咳嗽次数；显著增加小鼠呼吸道粘膜酚红的排出量，增加大鼠呼吸道内痰液的分泌量；对

2、豚鼠离体气管平滑肌有明显的松弛作用，可延长乙酰胆碱和组织胺混合液所致豚鼠哮喘的潜伏期；对大鼠急、慢性炎症模型均呈现抗炎作用。【结论】MA水提物和水提醇溶物具有镇咳、祛痰、平喘和抗炎作用，MA水提醇不溶物亦有一定的镇咳、祛痰和抗炎作用，但作用效果较MA水提物和水提醇溶物为弱。关键词土垄大白蚁巢水提物药效中分类号R285.5 Pharmacodynamic Study on Nest Macrotermes AnnandadeiLi AiyuanXie PeishanZhao Yi（Guangxi College of TCM Nanning 530001）Huang Rui songZhengJ

3、ie（Guangxi Nationality Research Institute of Medicine Nanning 530001）Abstract【Objective】To observe the effect of Nest Macrot ermes Annandadei Preparation(NMAP) on expelling phlegm, relieving cough and asth ma and resisting inflammation. 【Methods】The observaton on the cough-relieving effect of NMAP w

4、as made by inducing cough with SO2 and NH4OH；obser vation on the phlegmexpelling effect of NMAP by using phenol red；observation on the asthma-relieving effect of NMAP by inducing asthma with ach-histamine and trachea volume method;and observation on the anti-inflammation effect of NMAP by implantati

5、on of carrageenin and cotton ball.【Results】The water extract and water extract soluble in alcohol of NMAP can prolong apparently the coughing incubation period and reduce coughing frequency;increase excretion of phenol red and phlegm from the respiratory tract; relax smooth muscle of trachea; prolon

6、g the incubation period of asthma due to ach-histamine solution and resist inflammation on acute and chronic inflammator models. 【Conclutions】The NMAP water extract and water extract soluble in alcohol of NMAP has the function of expelling phlegm,relieving cough and asthma and resisting inflammation

7、. The water extract not soluble in alcohol of NMAP also has the same functions but not that strong when compared with that dissolved in alcohol of NMAP.Key wordsNest Macrotermes Annandadei water extractdrug effect土垄大白蚁巢系昆虫纲等翅目白蚁科土垄大白蚁Macrotermes annandadei(MA)所筑的巢，简称白蚁巢，生物学上称“菌圃”，与鸡?菌(Termitomyces)共

8、生，主要分布于广西、云南1，2。在广西MA分布广，资源丰富，广西壮族地区民间常有使用MA治疗虚咳、虚喘的用药习惯。为了充分开发利用MA这一壮药资源，因此我们对MA进行部分药效的研究，为临床应用提供依据。1材料1.1药物与试剂土垄大白蚁巢(以下简称“白蚁巢”或缩写MA)，1994年10月采自南宁市郊广西亚热带作物研究所公路旁。药物制备方法：取干燥的白蚁巢打碎，加水一定量，浸泡2h,直火煎煮3次，第一次煮沸2h，第二、三次各煮沸1h，合并药液，滤过，滤液浓缩至1?2(药材?药液)浓度，分成二等分：一份继续浓缩至稠膏，作为MA水提物(A)；另一份加入乙醇至含醇量为50%，搅匀，静置15h，抽滤，分取

9、滤液和沉淀物，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏，作为MA水提醇溶物(B)，沉淀物则作为MA水提醇不溶物(C)；固本咳喘片，浙江台州制药厂生产，批号9507170；醋酸强的松片，广东省制药工业公司华南制药厂生产，批号9606100；氯化乙酰胆碱，上海化学试剂总厂生产，批号910221；磷酸组织胺，中科院上海生化所东风生化技术公司生产，批号930244；氨苄青霉素，华北制药股份有限公司生产，批号9710203；角叉菜胶，辽宁省药物研究所生产。1.2动物昆明种系小白鼠(桂医动字第1104号)、Wistar种大白鼠(桂医动字第1105号)、豚鼠，为普通级，均由广西中医学院实验动物中心提供。2方法与结果2.1镇

10、咳作用2.1.1小鼠SO2引咳法3取体重（20±2g）小鼠，兼用。进行预选，取合格小鼠饲养3天后，随机分成11组，连续灌胃给药3天，末次给药后1h将小鼠放入放置有SO2气体的干燥器内，刺激15s后，立即取出，观察小鼠引咳潜伏期及2min内的咳嗽次数,结果见表1。表1白蚁巢对小鼠SO2引咳的影响(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=20组别剂量(g/kg)咳嗽潜伏期(s)咳嗽次数2min生理盐水20ml22.05±4

11、.1953.80±16.49白蚁巢A1.50030.30±6.57*23.30±8.91*0.75030.38±16.82*23.38±14.10*0.37522.16±4.5631.05±13.32*白蚁巢B1.50027.00±8.74*25.75±10.52*0.75028.44±11.78*25.88±11.25*0.37524.85±7.3128.69±8.99*白蚁巢C1.50023.17±7.9329.00±6.80*0.75024

12、.90±9.3329.83±9.24*0.37521.25±7.5535.67±9.97*固本咳喘片1.5片27.46±0.91*17.08±7.62*     注：*与生理盐水组比较，P0.05,*与生理盐水组比较，P0.01。以下同 结果显示，白蚁巢水提物和水提醇溶物的高、中剂量组可明显延长小鼠引咳潜伏期(P0.01或P0.05)，白蚁巢水提物、水提醇溶物和水提醇不溶物的高中、低剂量组均可明显减少小鼠2min内咳嗽次数(P0.01)。揭示该药水提物、水提醇溶物和水提醇不溶物均具有明显止咳作用

13、，但止咳作用是水提物水提醇溶物水提醇不溶物。2.1.2小白鼠氨水引咳法3取体重(20±2g)小鼠，兼用，进行预选，取合格小鼠，随机分成12组，给药方法同2.1.1，于末次给药后1h,将小鼠置玻璃钟罩内，进行氨水喷雾刺激20s后即取出，观察小鼠引咳潜伏期及2min内的咳嗽次数，结果见表2。表2白蚁巢对小鼠氨水引咳的影响(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=10组别剂量(g/kg)咳嗽潜伏期(s)咳嗽次数2min生理盐水20ml

14、35.23±18.0618.39±11.69白蚁巢A1.50053.10±35.036.10±7.40*0.75048.30±23.916.00±2.06*0.37550.00±22.419.33±5.65*白蚁巢B1.50062.50±25.41*7.10±9.21*0.75061.00±21.07*7.78±5.50*0.37547.18±31.8213.91±13.24白蚁巢C1.50056.31±30.3012.23±12.32

15、0.75044.58±29.2217.58±12.800.37535.38±15.5716.63±14.51固本咳喘片3.0片77.88±28.80*4.00±3.39*1.5片42.43±33.3934.29±32.93     结果显示，白蚁巢水提醇溶物高、中剂量组可明显延长小鼠引咳潜伏期(P0.01)，白蚁巢水提物高、中、低剂量组和水提醇溶物的高、中剂量组均可减少2min内的咳嗽次数(P0.01或P0.05)，而水提醇不溶物则不能延长引咳潜伏期，亦不能减少2min内咳嗽

16、次数(P0.05)。提示该药水提物及水提醇溶物均有明显止咳作用，在本实验条件下，水提醇不溶物无止咳作用。2.2祛痰作用2.2.1小鼠酚红排泄法4取体重(25±2)g鼠220只随机分成11组，给药方法同2.1.1，末次药前禁食不禁水12h，给药后30min由背部颈皮下注射0.5%酚红0.5ml,30min后脱颈椎处死，仰位固定，解剖分离气管，气管插管从甲状软骨处插入8号针头0.2cm，用备好的线结扎固定。用1ml注射器吸取5%NaHCO3溶液0.5ml,注入气管内，反复连续推抽3次，灌洗呼吸道重复3次，合并洗出液约1.21.5ml,离心，取上清液，用721型分光光度计比色，所测的OD值

17、通过标准曲线计算酚红含量，结果见表3。 表3白蚁巢对小鼠气管段酚红排泌量的影响(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=20组别剂量(g/kg)气管酚红排泌量(gmin)生理盐水20ml0.77±0.11白蚁巢A1.5001.57±0.37*0.7501.49±0.41*0.3751.34±0.28*白蚁巢B1.5001.43±0.41*0.7500.90±0.280.3750.

18、78±0.09白蚁巢C1.5000.97±0.07*0.7500.81±0.090.3750.74±0.09固本咳喘片0.75片1.10±0.38*     结果显示，白蚁巢水提物高、中、低剂量组、水提醇溶物和水提醇不溶物的高剂量组均可明显增加酚红的排泌量(P0.01)。提示该药各提取部分均有明显祛痰作用。2.2.2大鼠毛细管排痰量法4取体重(200±20)g大鼠110只，兼用，随机分为11组。实验前禁食不禁水12h,用乌拉坦1g/kg腹腔注射麻醉，仰位固定于木板上，手术分离气管，在位于甲状软骨

19、下剪开一小口，插入毛细玻管并固定，记录给药前2h的正常分泌量，接着灌胃给药，药后观察2h痰液的排泌量，比较给药前后平均每小时痰的分泌量,结果见表4。 表4白蚁巢对大鼠毛细玻管排痰量的影响(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=10组别剂量(g/kg)排痰量(cm)给药后/给药前(%)给药前给药后生理盐水10ml1.53±0.671.60±0.83105白蚁巢A1.5001.56±0.723.16±

20、0.74203*0.7501.53±0.362.70±0.50176*0.3751.52±0.372.17±1.19143白蚁巢B1.5001.54±0.443.04±0.98197*0.7501.50±0.422.18±0.49145*0.3751.52±0.420.80±0.80126白蚁巢C1.5001.54±0.640.68±0.68144*0.7501.55±0.300.73±0.731300.3751.55±0.650.58±

21、;0.58109固本咳喘片1.5片1.53±0.303.13±0.53205*     结果显示，白蚁巢水提物和水提醇溶物的高、中剂量组、水提醇不溶物的高剂量组均可明显增加或增加气管排痰量(P0.01或P0.05)。提示该药各提取部分均有明显祛痰作用，但祛痰作用是水提物或水提醇溶物水提醇不溶物。2.3平喘作用2.3.1对豚鼠离体气管平滑肌的影响32.3.1.1对豚鼠离体气管平滑肌的直接作用取体重350450g健康豚鼠一批，兼用。将豚鼠处死，取下从喉头至气管分叉处整条气管，放入盛有氧饱和的营养液中，用营养液冲净管腔内容物。用棉线将一端固

22、定在U型管底端，一端固定于直行厚壁毛细管一端，注射器吸取营养液，将整个系统充满营养液，排出气泡，并调节毛细管液面的高度，将整个装置放入20ml恒温的麦氏浴管中(浴温(37±1)，通氧气，1520个气泡/min，在此条件下稳定20min，记录此时的液柱高度作为厚点，然后往浴管加入试药或空白组给等体积去离子水，观察记录5min内液柱变化的毫米数，然后用营养液冲洗5次，再重复操作34次。结果见表5。 表5白蚁巢对豚鼠离体气管容积的影响(直接作用)(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/2010032417104319

23、5" 10 12>±S)n=10组别剂量(g/ml)毛细管液面高度(mm)给药前给药后给药前、后差值去离子水0.566.0±066.00±00白蚁巢A1×10-280.00±5.6272.67±8.74-7.33±2.31*3×10-381.68±3.3178.01±4.56-3.67±0.58*1×10-380.67±3.6578.67±7.37-2.00±1.73*白蚁巢B1×10-263.00±3.135

24、8.33±8.86-4.67±1.53*3×10-363.33±5.9760.00±6.93-3.33±1.53*1×10-264.33±7.4761.33±7.97-3.00±1.73*固定咳喘片4.5×10-369.60±1.0665.93±1.00-3.67±0.58*     注：n表示实验次数。 结果显示，白蚁巢水提物和水提醇溶物高、中、低剂量组均可对离体气管平滑肌有明显松驰作用(P0.01)。提示该药水提

25、物及水提醇溶物均有明显平喘作用。2.3.1.2对抗组胺收缩豚鼠离体气管平滑肌的作用动物及气管的制备方法同2.3.1.1，然后先往浴管加入0.06%磷酸组织胺溶液0.4ml，观察记录5min内液柱变化的毫米数，随后加入试药，药后观察5min内液柱改变的毫米数，然后用营养液冲洗5次，每只标本(气管)重复操作34次,结果见表6。表6白蚁巢对豚鼠离体气管容积的影响(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=10组别剂量(g/ml)毛细管液面高度(m

26、m)给药前给药后给药前、后差值磷酸组织胺7.5×10-465.00±076.00±011.00±0*去离子水0.5ml76.00±076.33±0.580.33±0.58磷酸组织胺7.5×10-480.92±3.6091.88±4.67+10.96±1.05*白蚁巢A1×10-291.88±4.6783.21±4.62-8.67±1.16*磷酸组织胺7.5×10-478.20±4.8889.20±5.12+11.00

27、±1.10*白蚁巢A1×10-389.20±5.1286.20±5.77-3.00±100*磷酸组织胺7.5×10-473.33±5.7784.00±6.93+10.67±1.16*白蚁巢A1×10-384.00±6.9382.33±5.86-1.67±0.58*磷酸组织胺7.5×10-478.43±4.0089.41±6.04+10.98±1.00*白蚁巢B1×10-289.41±6.0485.08

28、77;6.67-4.33±0.58*磷酸组织胺7.5×10-470.60±6.1181.97±7.10-11.37±1.20*白蚁巢B3×10-381.99±7.1078.66±6.84-3.33±0.58*磷酸组织胺7.5×10-465.33±8.5476.00±7.40+10.67±1.16*白蚁巢B1×10-376.00±7.4073.67±7.02-2.33±0.58*磷酸组织胺7.5×10-473.81&#

29、177;2.0184.87±3.09+11.06±2.00*固本咳喘片1×10-284.87±3.0981.20±3.61-3.67±2.08*     结果显示，白蚁巢水提物和水提醇溶物高、中、低剂量组均可明显对抗磷酸组胺收缩气管平滑肌的作用(P0.01)。提示该药水提物和水提醇溶物有明显平喘作用。2.3.2豚鼠喷雾致喘法3，4取体重(160±20)g健康幼年豚鼠一批，兼用，于实验第一天进行预选，每次1只，将豚鼠置于容量为4升的玻璃钟罩内，在160毫米汞柱的恒压下，经玻璃喷头喷入2%

30、氯化乙酰胆碱和0.1%磷酸组织胺等容积混合液，观察豚鼠的引喘潜伏期，以120s内为预选合格。次日取预选合格的豚鼠80只，随机分成8组，连续灌胃给药3天。于第3天药后1h,同上引喘，观察360s,记录喷雾开始至症状出现作为潜伏期，不跌倒者观察至360s,结果见表7。 表7白蚁巢对豚鼠喷雾致喘的影响(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=10组别剂量(g/kg)引喘潜伏期(S)生理盐水10ml29.83±33.18白蚁巢A3.00

31、108.14±37.49*1.5054.60±26.630.7540.40±33.30白蚁巢B3.0076.17±26.27*1.5084.67±43.61*0.7578.50±23.70*固本咳喘片1.8片95.00±33.58*     结果显示，白蚁巢水提物高剂量组和水提醇溶物高、中、低剂量组可明显延长豚鼠的引喘潜伏期(P0.01)。提示该药水提物及水提醇溶物均有明显平喘作用。2.4抗炎作用2.4.1对角叉菜胶致大白鼠足肿胀的影响3取体重(130±10)g健康大白鼠12

32、0只，随机分成12组，方法同2.1.1。于末次给药后1h注射1%角叉菜胶溶液0.1ml足跖致炎。分别于致炎前用容积测量法测量二次整个足跖的容积，取平均值作为致炎前的容积，再分别于致炎后0.5、1、2、4、6、8h各测量一次容积，计算致炎后的肿胀程度。结果见表8。 表8白蚁巢对角叉菜胶所致大鼠足肿的影响(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=10组别剂量(g/kg)致炎后不同时间足肿胀程度(%)0.5(h)1.0(h)2.0(h)4.0(

33、h)6.0(h)8.0(h)生理盐水10ml20.36±10.7231.33±13.2235.47±11.9948.75±9.2561.84±14.5059.45±11.98白蚁巢A3.0017.19±6.7525.12±7.4933.24±13.9347.82±12.8762.89±9.7464.99±10.521.5011.00±2.40*16.30±6.00*23.50±7.60*37.80±11.30*50.50±10

34、.7056.30±9.100.7514.53±5.5224.31±8.4230.95±10.5045.12±15.5256.99±10.6156.36±8.43白蚁巢B3.0012.70±3.32*23.26±7.6232.02±11.9147.30±19.4755.95±19.3957.25±17.861.5014.80±5.601.92±3.00*22.50±6.70*40.10±11.8048.50±10.60

35、*55.60±5.900.7513.81±7.1622.62±8.2734.44±11.0253.18±6.0457.27±9.9858.55±7.18白蚁巢C3.0010.45±4.53*20.02±9.01*27.10±9.3041.97±6.0452.77±6.9956.19±6.271.5011.90±5.00*19.40±4.20*21.80±5.50*29.50±7.40*47.70±6.00*54.40

36、±5.900.7518.87±3.5428.12±6.6537.57±5.8643.80±6.8951.90±8.8453.25±6.40固本咳喘片3.0片15.03±5.7625.04±9.7228.98±10.9036.83±8.83*47.55±5.07*53.16±7.551.5片20.40±6.2824.23±6.4725.97±4.80*46.87±8.4753.37±7.0259.93±13.

37、73     结果显示，白蚁巢水提物中剂量组能明显减少或减少角叉菜致炎后0.5、1、2、4h时的足跖肿胀程度(P0.01或P0.05)，水提醇溶物高剂量组对角叉菜致炎后0.5h、中剂量组1、2、6h的足跖肿胀程度有减少或明显减少作用(P0.05或P0.01)，水提醇不溶物高剂量对角叉菜致炎后0.5、1h、中剂量0.5、1、2、4、6h的足跖肿胀程度均减少或明显减少(P0.05或P0.01)。提示该药各提取部位均对急性炎症有抗炎作用。2.4.2大鼠棉球植入法3取(130±10)g健康大白鼠110只，分为11组。将大鼠用乙醚浅麻醉下腹部去毛消毒，腹部切口，将两个已称重的无菌棉球分别植入大白鼠两侧腋窝部皮下。于手术当天开始灌胃给药，连续给药7天，于第8天将大鼠颈椎脱臼处死，取出棉球，在60烘箱干燥12h，称重，减去原棉球重，即为肉芽肿净重。结果见表9。 表9白蚁巢对大鼠棉球植入法致炎的影响(<"x (73 bytes)" src="/med/