紫外可见分光光度法

1、2022-2-81紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法2022-2-82概概 述述 基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称称吸光光度法吸光光度法，它包括比色法和分光光度法。，它包括比色法和分光光度法。 紫外紫外-可见分光光度法是研究物质在紫外、可见光区可见分光光度法是研究物质在紫外、可见光区的的分子吸收光谱分子吸收光谱的分析方法。它属于分子光谱法的一种，的分析方法。它属于分子光谱法的一种，是利用某些物质的分子吸收是利用某些物质的分子吸收200800nm光谱区的辐射光谱区的辐射来进行分析测定的方法。来进行分析测定的方法。 这种分子吸收光谱产生于

2、这种分子吸收光谱产生于价电子价电子和分子轨道上的电和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，广泛用于无机和有机物质的定子在电子能级间的跃迁，广泛用于无机和有机物质的定性、定量测定。性、定量测定。2022-2-83 当一束太阳光照射某一溶液时，太阳光中某一颜色的光当一束太阳光照射某一溶液时，太阳光中某一颜色的光被吸收，其被吸收，其互补色光互补色光透过溶液，刺激人的眼睛，使人感觉到透过溶液，刺激人的眼睛，使人感觉到它的颜色。它的颜色。溶液颜色与光吸收的关系溶液颜色与光吸收的关系可见光波长及其互补光可见光波长及其互补光实例：实例：1)高锰酸钾吸收高锰酸钾吸收绿光绿光显紫显紫 红色；红色；2)重铬酸钾吸收

3、重铬酸钾吸收蓝光蓝光显黄显黄色；色；3)邻菲罗啉铁溶液吸收邻菲罗啉铁溶液吸收蓝蓝绿光绿光显红色。显红色。2022-2-84完全吸收完全吸收完全透过完全透过吸收黄色光吸收黄色光光谱示意光谱示意表观现象示意表观现象示意复合光复合光2022-2-85 根据溶液的根据溶液的颜色，可以颜色，可以估计该溶液估计该溶液吸收的光的吸收的光的波长。波长。 /nm颜色颜色互补色互补色400-450紫黄绿450-480蓝蓝黄黄480-490绿蓝绿蓝橙橙490-500蓝绿蓝绿红红500-560绿绿红紫红紫560-580黄绿黄绿紫紫580-610黄黄蓝蓝610-650橙橙绿蓝绿蓝650-760红红蓝绿蓝绿2022-2-

4、86分光光度法的发展过程分光光度法的发展过程 分光光度法在发展过程中先后经过了分光光度法在发展过程中先后经过了目视比色法，光电比色法目视比色法，光电比色法和分光光度法和分光光度法三个阶段。三个阶段。（1）目视比色法目视比色法是一种用眼睛辨别颜色深浅，以确定待测组分含是一种用眼睛辨别颜色深浅，以确定待测组分含量的方法。量的方法。 （2）光电比色法光电比色法是使用光电比色计测量溶液吸光度并计算待测组是使用光电比色计测量溶液吸光度并计算待测组分含量。分含量。 （3）分光光度法分光光度法是应用分光光度计，通过测定被测物质在特定波是应用分光光度计，通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度，

5、对该物质进行定性、定量长处或一定波长范围内光的吸光度，对该物质进行定性、定量分析的方法。它包括紫外分光光度法、可见光分光光度法、红分析的方法。它包括紫外分光光度法、可见光分光光度法、红外分光光度法等。外分光光度法等。 2022-2-87 测量每一波长下有色溶液对光的吸收程度测量每一波长下有色溶液对光的吸收程度(即吸光即吸光度度A)，然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到一条曲线，称为到一条曲线，称为吸收光谱曲线吸收光谱曲线(简称吸收曲线简称吸收曲线)。吸收光谱示意图吸收光谱示意图吸收曲线及常用术语吸收曲线及常用术语 2022-2-88 透过光的强

6、度透过光的强度 It与入射光的强度与入射光的强度I0之比称为透光度，之比称为透光度，用用 T表示。常用表示。常用百分数百分数表示：表示：T = It / I0 为了表示物质对光的吸收程度，常采用吸光度为了表示物质对光的吸收程度，常采用吸光度A这这一概念，即透光度倒数的对数值。一概念，即透光度倒数的对数值。A = lg（I0 / It）= lg（1 / T）= lg T 1.透光度透光度T 和吸光度和吸光度A 朗伯朗伯比耳定律比耳定律2022-2-892.2.朗伯朗伯比耳定律比耳定律 布格布格( (Bouguer)Bouguer)和朗伯和朗伯( (Lambert)Lambert)先后于先后于17

7、291729年和年和17601760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系。年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系。 Ab 1852年比耳年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物浓度又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有类似的关系。之间也具有类似的关系。 Ac 二者的结合称为朗伯二者的结合称为朗伯比耳定律，其数学表达式为：比耳定律，其数学表达式为： A = b c 朗伯朗伯比耳定律比耳定律是吸光光度法的理论基础和定是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。量测定的依据。2022-2-810 A= b c 式中式中A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度；吸光度；描述溶液对光的吸收程度； b：

8、液层厚度液层厚度(光程长度光程长度)，通常以，通常以cm为单位；为单位； c：溶液的摩尔浓度，单位溶液的摩尔浓度，单位molL-1； ：摩尔吸收系数，单位摩尔吸收系数，单位Lmol -1cm-1。（讲解（讲解78页例题）页例题） 摩尔吸收系数越大表明该物质的摩尔吸收系数越大表明该物质的吸光能力越强吸光能力越强，用光度法测，用光度法测定该物质的定该物质的灵敏度越高灵敏度越高。 105：超高灵敏；：超高灵敏； = (610）104 ：高灵敏；：高灵敏； 10104 4。* *选择性好选择性好：显色剂仅与被测离子发生显色反应。：显色剂仅与被测离子发生显色反应。* *对照性好对照性好：显色剂在测定波长

9、处无明显吸收显色剂在测定波长处无明显吸收, , max60 nmmax60 nm。* *反应生成的有色化合物反应生成的有色化合物组成恒定，稳定组成恒定，稳定。* *显色条件易于控制，显色条件易于控制，重现性好重现性好。反应条件的选择反应条件的选择2022-2-832显色反应条件的选择显色反应条件的选择1.1.显色剂用量显色剂用量 吸光度吸光度A A与显色剂用量与显色剂用量C CR R的关的关系会出现如图所示的几种情况。选系会出现如图所示的几种情况。选择曲线变化平坦处。择曲线变化平坦处。2.2.反应体系的酸度反应体系的酸度 在相同实验条件下，分别测定不同在相同实验条件下，分别测定不同pHpH值条

10、件下显色溶液的吸值条件下显色溶液的吸光度。选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的光度。选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的pHpH范围。范围。3.3.显色时间与温度显色时间与温度 实验确定。实验确定。4.4.溶剂溶剂 一般尽量采用水相测定一般尽量采用水相测定。吸光度与吸光度与pHpH的关系曲线的关系曲线2022-2-833参比溶液的选择一般有一下几种情况：参比溶液的选择一般有一下几种情况： 1.溶剂参比溶剂参比 若仅待测组分与显色剂的反应产物在测定波长处有若仅待测组分与显色剂的反应产物在测定波长处有吸收，而被测试液、显色剂及其他试剂均无吸收，则可用纯溶吸收，而被测试液、显色剂及其他试

11、剂均无吸收，则可用纯溶剂作参比溶液。剂作参比溶液。 2.试剂参比试剂参比 若显色剂或其他试剂在测定波长处略有吸收，而试若显色剂或其他试剂在测定波长处略有吸收，而试液本身无吸收，则可用液本身无吸收，则可用“试剂空白试剂空白”（不加被测试样的试剂溶（不加被测试样的试剂溶液）作参比溶液。液）作参比溶液。3.试液参比试液参比 若待测试液本身在测定波长处有吸收，而显色剂等无若待测试液本身在测定波长处有吸收，而显色剂等无吸收，可用吸收，可用“试样空白试样空白”（不加显色剂的被测试液）作参比溶（不加显色剂的被测试液）作参比溶液。液。 4.其它参比其它参比 若显色剂、试液中其他组分在测定波长处有吸收，若显色剂

12、、试液中其他组分在测定波长处有吸收，则可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂作则可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂作为参比溶液。为参比溶液。5.5.选择适当的参比溶液选择适当的参比溶液2022-2-8341. 干扰干扰(1)与试剂生成有色配合物。如用钼蓝法测定硅时，与试剂生成有色配合物。如用钼蓝法测定硅时，磷也能生成磷钼蓝，使测定结果偏高。磷也能生成磷钼蓝，使测定结果偏高。(2)干扰离子本身有颜色。干扰离子本身有颜色。(3)与试剂反应，生成的配合物虽然无色，但要消耗与试剂反应，生成的配合物虽然无色，但要消耗大量显色剂，使被测离子的显色反应不完全。大量显色剂，使被测离

13、子的显色反应不完全。(4)与被测离子结合成离解度小的另一种化合物。使与被测离子结合成离解度小的另一种化合物。使被测离子与显色剂不反应。被测离子与显色剂不反应。共存离子的干扰及消除方法共存离子的干扰及消除方法2022-2-835（1 1）控制酸度提高反应的选择性，保证主反应进行完全，以避免）控制酸度提高反应的选择性，保证主反应进行完全，以避免干扰。干扰。（2 2）加入掩蔽剂）加入掩蔽剂 选择掩蔽剂的原则是：掩蔽剂不与待测组分反应；掩蔽剂选择掩蔽剂的原则是：掩蔽剂不与待测组分反应；掩蔽剂本身及掩蔽剂与干扰组分的反应产物不干扰待测组分的测定。本身及掩蔽剂与干扰组分的反应产物不干扰待测组分的测定。（3

14、 3）选择适当的参比溶液）选择适当的参比溶液（4 4）选择适当的波长）选择适当的波长（5 5）利用氧化还原反应改变干扰离子的价态，使干扰离子不与显利用氧化还原反应改变干扰离子的价态，使干扰离子不与显色剂反应。色剂反应。例如用铬天菁例如用铬天菁S S光度法测定光度法测定AlAl3+3+时，加入抗坏血酸作时，加入抗坏血酸作掩蔽剂将掩蔽剂将FeFe3+3+还原为还原为FeFe2+2+，消除消除FeFe3+3+的干扰。的干扰。（6 6）分离干扰离子）分离干扰离子（7 7）利用导数光谱、双波长等新技术）利用导数光谱、双波长等新技术干扰的消除方法干扰的消除方法2022-2-836定量分析定量分析（1）标准

15、曲线法（单组分分析）标准曲线法（单组分分析） 配制一系列的标准溶液，其浓度包括待测样品的浓度范围，配制一系列的标准溶液，其浓度包括待测样品的浓度范围，在干扰少的吸收峰波长处，测定其吸光度在干扰少的吸收峰波长处，测定其吸光度 A与浓度与浓度c的标准曲线，的标准曲线，待测样品溶液在相同条件下进行测量，根据测得的吸光度待测样品溶液在相同条件下进行测量，根据测得的吸光度 Ai值，值，从标准曲线上即可查出相应的浓度从标准曲线上即可查出相应的浓度 Ci。 CACiAi0 紫外可见光谱法的应用紫外可见光谱法的应用2022-2-837（2）标准对照法（单组分分析）标准对照法（单组分分析） 当样品溶液遵守比耳定

16、律时，可在同样测量条件下测量标准当样品溶液遵守比耳定律时，可在同样测量条件下测量标准溶液及待测样品溶液，测量到的吸光度分别为溶液及待测样品溶液，测量到的吸光度分别为 A标标和和 A样样，根据，根据比耳定律可得到：比耳定律可得到： 式中：式中： C标标是已知的，因此待测样品溶液的浓度是已知的，因此待测样品溶液的浓度C样样可计算出可计算出来。来。 这种方法的误差比标准曲线法要大些，但不需做标准曲线因这种方法的误差比标准曲线法要大些，但不需做标准曲线因而要简便些。而要简便些。 标样标样CCAA2022-2-838（3）解联立方程法（多组分分析）解联立方程法（多组分分析） 以溶液中存在两个组分为例来说

17、明，可在两个波长以溶液中存在两个组分为例来说明，可在两个波长 1及及 2处测量待测溶液的吸光度，设它们分别为处测量待测溶液的吸光度，设它们分别为 A1及及 A2，则：则： A1=e ex 1bcx+ e ey 1bcy(在1处测得A1) A2 =e ex 2bcx+ e ey 2bcy(在2处测得A2) e ex 1, e ey 1, e ex 2, e ey 2由由x,y标液在标液在 1, 2处分别测得处分别测得2022-2-839（4）双波长分光光度法（多组分分析）双波长分光光度法（多组分分析） 不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单

18、色光光( (1 1和和2 2) )；以参比波长以参比波长1 1处的吸光度处的吸光度A A11作为参比，来消作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。长法有所提高。 AA A A22 A A11 ( (22 11) )b cb c 两波长处测得的吸光度差值两波长处测得的吸光度差值AA与待测组分浓度成正比与待测组分浓度成正比。11和和22分别表示待测组分在分别表示待测组分在1 1和和2 2处的摩尔吸光系处的

19、摩尔吸光系数。数。 2022-2-840选择波长组合选择波长组合1 1、2 2的基本要求是：的基本要求是： 选定的波长选定的波长1 1和和2 2处干扰组分应具有相同吸光度，处干扰组分应具有相同吸光度， 即：即： Ay = y = A y y22 A y y11 = 0 = 0 故：故： Ax+y = x+y = A x=(x=(x x22x x11) )bcbcx x 此时：测得的吸光度差此时：测得的吸光度差A只与待测组分只与待测组分x x的浓度呈线性关系，而的浓度呈线性关系，而 与干扰组分与干扰组分y y无关。若无关。若x x为干扰组分，则也可用同样的方法测定为干扰组分，则也可用同样的方法测

20、定y y组分。组分。 可采用作图法选择符合上述两可采用作图法选择符合上述两个条件的波长组合个条件的波长组合。 在选定的两个波长在选定的两个波长1 1和和2 2处待处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。测组分的吸光度应具有足够大的差值。2022-2-841 原理原理 普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差分光光度法，简称为示差法。时，将产生较大的误差。需采用示差分光光度法，简称为示差法。 采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。 设：待

21、测溶液浓度为设：待测溶液浓度为c cx x，标准溶液浓度，标准溶液浓度c cs s( (c cs s c cx x) )。则：。则： A Ax x= = bcbcx x A As s = = bcbcs s x x s s = =bb( (c cx xc cs s）= =bbc c 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差差。 示差法测得的吸光度与示差法测得的吸光度与cc呈直线关系。由标准曲线上查得相应呈直线关系。由标准曲线上查得相应的的c c值，则待测溶液浓度值，则待测溶液浓度c cx x： c cx x = =c cs

22、s + + c c （5）示差法）示差法2022-2-842示差法标尺扩展原理示差法标尺扩展原理： 普通法：普通法：cs的的T=10%；cx的的T=5% 示差法：示差法：cs做参比做参比,调调T=100%,则则 cxT=50% ； 标尺扩展标尺扩展10倍倍 如待测试样的透光度原是如待测试样的透光度原是7，用示差分光光度法测量，用示差分光光度法测量时将是时将是70。T/%Tr/%2022-2-843（6 6）导数分光光度法）导数分光光度法 导数分光光度法在导数分光光度法在多组分同时测定多组分同时测定、浑浊样品分析浑浊样品分析、消除背景消除背景干扰干扰、加强光谱的精细结构加强光谱的精细结构以及以及复杂光谱的辨析复杂光谱的辨析等方面，显示了很等方面，显示了很大的优越性。