医疗器械产品无菌检验操作规程完整

1、医疗器械产品无菌检验操作规程1目的通过无菌检验，确保灭菌后产品能够到达无菌的要求。2适用围适用于灭菌后医疗器械产品列举的无菌检验。3检验依据本厂产品注册标准编号EN1174-1996医疗器械灭菌产品中微生物数量的评估?中国药典?2005年版GB14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第二局部：生物试验 方法GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准4仪器、设备百级层流超净工作台、电热枯燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸 汽灭菌器、集菌仪器、电子天平、PH计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角 烧瓶，接种环、无菌棉签、镊子，试管架，大试管假设干等。5无菌检验室的环境要

2、求5.1 无菌检验应在环境洁净度10000级下的局部百级的单向流空气区域进 展。5.2 缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性 对照室与缓冲区之间空气应保持负压。无菌检验室与室外大气之间静压差应大于 10Pa无菌检验室的室温应保持 1826C,相对湿度：4565%5.3 无菌检验室的单向流空气区、工作台面与环境应定期按?医药工业洁 净室区悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法?的现行国家标准进展悬浮粒 子、浮游菌和沉降菌的监测。每年至少检测一次。5.4 无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次 操作时在层流空气所与台面的左中右置 3个营养琼脂平板，暴露30

3、min，于30 35C培养48小时，菌落数平均应不超过1CFU平板。6无菌检验前的准备6.1 器具灭菌、消毒6.1.1 灭菌：试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。可经电热枯燥箱160°C以上干烤2小时，或置压力蒸汽灭菌器121C蒸汽灭菌30 分钟后使用根据灭菌效果验证决定灭菌参数。所有的灭菌物品不应超过2周 即用毕，否那么应重新灭菌。6.1.2 消毒：凡检验中使用的器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理。如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。 可采用消毒剂浸泡或擦拭。消毒剂应每月更换，以防止产生耐药菌株。6.1.3 标识：器具的灭菌、

4、消毒后必须做好标识，标明灭菌、消毒时间和使用有效期。6.2 人员、物料进入无菌检验室6.2.1 开启紫外线灯或臭氧发生器进展空间灭菌处理，消毒时间不得少于 30mi n。6.2.2 物料进入无菌检验室流程6.2.2.1 脱包：进入无菌检验室的物品假设有双重包装的，需将外包装在 传递窗/缓冲间撤除后，传入试验室。6.2.2.2 消毒：进入无菌操作室的所有培养基、供试品等的外表都应采用 适用的方法进展消毒处理，以防止将外包装污染的微生物带入无菌检验室。6.2.2.3 传递：查看所有进入无菌检验室的器具上的灭菌、消毒标识，是 否在有效期。符合要求的经传递窗传入无菌检验室。6.2.3 人员进入无菌检验

5、室流程6.2.3.1 更鞋脱衣：在一更区脱去一般区工作鞋，穿上无菌检验室工作鞋； 脱去一般区工作服。 6.2.3.2 洗手：首先用肥皂或洗手液在手上揉擦出泡沫， 再用流水连续冲洗20秒，洗净泡沫。6.2.3.3 更衣：在二更区按照从上到下的顺序穿戴无菌工作服包括衣、 帽、口罩等，要求裤子掖在上衣里，口罩掩住口鼻，帽子包裹所有头发。6.2.3.4 手消毒：用消毒液浸泡双手 5秒以上或用浸过消毒液的棉球擦拭双手。消毒液可用洗必泰、新洁尔灭、碘伏、75%酉精等。6.2.3.5 人员进入：经缓冲间进入无菌检验室。6.2.4人员进入无菌检验室后，进一步用消毒液擦拭工作台面，戴无菌手7无菌检验操作要求7.

6、1全过程必须严格执行无菌操作，防止微生物污染。7.2 使用玻璃器皿应轻取轻放，防止破损，以防培养物扩散。7.3 所有操作均应在近火焰区进展，且不得有大幅度或快速动作，以免搅 动空气中的尘埃微粒。7.4 使用金属接种器具时，用前、用后均需灼烧灭菌。7.5 在接种培养物时，动作应轻、准，防止培养物溅出，产生汽溶胶，造 成污染。7.6 操作过程中所有的带菌物品，用后均应作消毒、灭菌处理。可在检验 过程中随用随时放入消毒液缸浸泡或消毒桶， 或在检验完成后经传递窗传至一般 区，立即用压力蒸汽灭菌锅121C灭菌30分钟。8培养基制备8.1需气菌、厌气菌培养基硫乙醇酸盐流体培养基的制备8.1.1 所用试剂酪

7、胨胰酶水解15.0g葡萄糖5.0gL-胱氨酸0.5g硫乙醇酸钠0.5g或硫乙醇酸0.3ml酵母浸出粉5.0g氯化钠2.5g新配制的0.1%刃天青溶液1.0ml琼脂0.75g水1000ml8.1.2 制备除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性， 煮沸，滤清，参加葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH为7.1 ± 0.2。8.1.3 硫乙醇酸盐流体培养剂氧化层的颜色要求在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5,否刚需经100C水浴加热到粉红色消失不超过20分钟迅速冷却，只限加热一次，并应防止被污染。8.2 霉菌培 养基 改进马丁培 养基 的制备

8、 8.2.1所用试剂胨5.0g酵母浸出粉 2.0g 葡萄糖20.0g 磷酸二氢钾1.0g 硫酸镁0.5g 水 1000 ml8.2.2 制备除葡萄糖外，取上述成分混和，微温溶解，调节pH值约为6.8，煮沸，加 葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节 pH为6.4 ± 0.2。8.3 还可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基，按照使用说明书配 制。8.4 培养基配制后应尽快灭菌，防止微生物繁殖。一般采用高压蒸汽121C 灭菌30分钟。8.5 制备好的培养基应在225C保存，在3周使用。8.6 培 养基 的无菌性检查每批配制的培养基均应进展无菌性检查可与产品无菌检验同步进展。检查时，每批培养基随

9、机取不少于 5支瓶培养14天，应无菌生长。9稀释液、冲洗液的制备9.1 0.1%蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装后置入压力蒸汽灭菌 器，121C灭菌30分钟后，于4C保存备用。,分装后置入压力蒸汽灭菌器， 121 C灭菌30分钟后，于4C保存备用9.2 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钾7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加 水1000ml。微温溶解，滤清，分装后置入压力蒸汽灭菌器， 121C灭菌30分钟 后，于4 C保存备用。9.3 浸提介质：9g/L无菌氯化钠溶液，可直接从有证单位采购大输液。10对照菌液制备10.

10、1 无菌检验所用的菌株传代次数不得超过 5代。10.2取金黄色葡萄球的普通琼脂斜面培养物，接种一白金耳至营养琼脂培 养基，在3035 C培养1824h后备用，同时制备0.9%氯化钠溶液参加在6支 小试管，每支试管加 9.0ml的0.9%氯化钠溶液，在压力锅经 121C灭菌30min 备用。将已配好的金黄色葡萄球菌培养菌液取1.0ml参加第一支小试管，稀释成浓度1:10的菌液；取第一支试管1.0m l菌液参加第二支小试管，稀释成浓度 1:100的菌液，同法稀释成浓度1:106每ml含菌量W 100CFU即可。10.3 采用平皿计数法测定活菌数。11无菌检验培养温度硫乙醇酸盐流体培养基，置3035

11、°C培养。 改进马丁培养基，置2328°C 培养。12无菌检验12.1如产品注册标准中明确“产品应经过一个确认过的灭菌过程，那么执行12.1项下各项。12.1.1 放样每个灭菌批次按已验证的灭菌工艺， 在灭菌柜相应的位置放置适量菌片，灭菌后对菌片进展无菌检验。12.1.2 菌片贮存灭菌前、后菌片应按菌片说明书规定条件保存。REVEN公司菌贮存温度为15 27C12.1.3 接种开启超净工作台单向层流，在此环境下，分别将灭菌后的菌片成对放入已灭 菌的硫乙醇酸盐流体培养基中。同时以金黄色葡萄球菌作阳性对照，以未接种的硫乙醇酸盐流体培养基和未接种的改进马丁培养基作为阴性对照。12

12、.1.4 培养阳性对照管于3035C细菌培养箱培养4872小时。 其余硫乙醇酸盐流 体培养基于3035C培养7天。改进马丁培养基于2328C培养7天。12.1.5 结果判定培养后，阳性对照应有菌生长，阴性对照和被检样品未见需气菌、厌气菌和 霉菌生长的为合格。12.2 如产品注册标准中明确产品应进展无菌检验，那么执行。12.2.1 抽样根据各自的产品注册标准和相应产品出厂检验规程的规定，对成品库的产品进展抽样。一般同一个灭菌批产品检验 311个单位供试品。12.2.2 供试液准备优先采用将供试品或其有代表性的各局部直接投放入培养基培养的方法，如供试品不适宜直接投放，可按以下方法制备供试液，应使浸

13、提介质充分洗提供试 品的浸提外表，供试液制备应按无菌操作法进展，在制备后2小时使用。根据供试品具体特性选择以下方法：a管类器具：按管外表积每 10cm2流过管腔1ml浸提介质，流量约为 10ml/min，收集到无菌的容器。b容器类器具：按容器外表积每10cm2参加浸提介质1ml的比例，振摇数 次。c实体类器具：实体类器具按外表与每10cm2参加浸提介质1ml，振摇 数次。收集上述冲洗液或浸提介质于无菌容器中。12.2.3 接种1223.1 薄膜过滤法：优先采用封闭式薄膜过滤器集菌器，也可使用开放式薄膜过滤器。滤膜孔经不大于0.45 ym。滤器和滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌，或直接采用无菌集菌

14、器。a、如采用封闭式薄膜过滤器，取一副三联式集菌器，将供试液通过集菌仪 过滤，使通过每只培养管的量根本均匀。 然后通过集菌仪一只加120ml改进马丁 培养基，另两只分别参加120ml硫乙醇酸盐培养基其中一只做阳性对照，加金 黄色葡萄球菌液1ml。另取一副二联集菌器，用同批的冲洗液或浸提介质120ml 通过集菌仪过滤每只约50ml，同法一只加硫乙醇酸盐培养基 120ml，另一只 加改进马丁培 养基 120ml分别作阴性对照。b、 如用一般薄膜过滤器，将供试液过滤后取出滤膜，将其剪成3等份，分 别置于含50ml硫乙醇酸盐流体培养基与改进马丁培养基的容器中，其中两份作 检验，一份作阳性对照。12.2

15、.3.2直接接种法：适用于一次性使用注射针、一次性使用静脉输液针包括输液器、输血器、注射器配套使用注射针。a、敷料供试品：取规定数量，每个包装以无菌操作拆开，于不同部位剪取 约120mg或1cmx 3cm的供试品，接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中。b、无菌针头：直接投入含15ml以上硫乙醇酸盐流体培养基与改进马丁培养 基的容器中。c、一次性使用的材料：拆散或切成小碎断，接种于各管足以浸没供试品的 适量培养基中。供试品按规定量分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基与改进马丁培养基 的容器中，其中一份作阳性对照。每个容器中培养基的用量应符合：接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%或培养基的装量足以浸没供试品每管培养基的最低用量一一硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml,改进马丁培养基每管装量不少于10 ml.1224 培养、观察上述含培养基的容器分别置规定温度的恒温培养箱中，除阳性对照管培养 4872小时外，其余管培养14天。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。如在参加供试品后、或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生产，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或 划线接种于斜面培养基上，细菌培养2天，真菌培养3天，观察是否再出现浑浊 或斜面有无菌生长；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。12.2.5 结果判断培养完毕后，阳性对