唐可肽对糖尿病大鼠血脂及脂质过氧化作用的影响

1、    唐可肽对糖尿病大鼠血脂及脂质过氧化作用的影响 屠霞,王振林,焦小红作者单位：西安交通大学医学院公共卫生学系，陕西西安【摘要】目的探讨唐可肽对糖尿病大鼠脂代谢及脂质过氧化作用的影响。方法用高糖高脂饲料及小剂量链脲佐菌素(streptozotocin， STZ)建立糖尿病大鼠模型，并将成模大鼠分为唐可肽高、中、低剂量组和模型组，同时采用正常的SD大鼠为对照组。唐可肽干预8周后检测各组大鼠的血脂、抗氧化酶和过氧化产物水平，观察肝脏组织的形态学变化。结果与模型组相比唐可肽各剂量组能明显减低糖尿病大鼠血清甘油三酯(triglyceride， TG)、游离脂

2、肪酸(free fatty acids， FFA)和丙二醛(malondialdehyde， MDA)的含量(P<0.05);中、高剂量组能明显降低糖尿病大鼠血清总胆固醇(total cholesterol， TC)的含量，提高超氧化物歧化酶(superoxide diamutase， SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase， GSH-Px)的活力(P<0.05);高剂量组能升高高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol， HDL-C)而降低低密度脂蛋白胆固醇(low density lipopr

3、otein cholesterol， LDL-C)的水平(P<0.05)。唐可肽高、中、低剂量组对糖尿病大鼠肝脏组织的脂肪变性有不同程度的缓解作用。结论唐可肽可调节糖尿病大鼠脂代谢紊乱，提高其抗氧化能力，改善其肝脏组织的脂肪变性。【关键词】 糖尿病;血脂;脂质过氧化;唐可肽;脂代谢ABSTRACT： ObjectiveTo observe the effects of Tangketai on lipid level and lipid peroxidation in diabetic rats. MethodsDiabetic rat model was duplicated with

4、 fat- and sugar-rich diet and streptozotocin. Totally 37 rats with diabetes were divided into 4 groups， the diabetic model group and the low-， medium- and high-dose treatment groups. In addition， other normal SD rats served as controls. The diabetic rats in the treatment groups had been fed with Tan

5、gketai for eight weeks， and then had their levels of serum lipids， antioxidant enzymes and peroxidative products determined. The morphological changes in their livers were observed. ResultsThe serum levels of triglyceride (TG)， free fatty acids (FFA) and malondialdehyde (MDA) were significantly lowe

6、r in the treatment groups than in the diabetic model group (P<0.05). Compared with the diabetic model group， there was a significant increase in serum superoxide diamutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) and a significant decrease in serum total cholesterol (TC) in the medium- and high-

7、dose treatment groups (P<0.05). Low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C) significantly decreased and high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) significantly increased in the high-dose treatment group compared with those in the diabetic model group (P<0.05). Tangketai of different dosage

8、had relieving effects of different degree on liver fatty degeneration of the diabetic rats. ConclusionTangketai can regulate lipid metabolism， enhance the capability of anti-lipid peroxidation and improve liver steatosis of diabetic rats.KEY WORDS： diabetes mellitus; serum lipid; lipid peroxide; Tan

9、gketai; lipid metabolism糖尿病(diabetes mellitus， DM)是一种常见的代谢性疾病。随着生活水平的提高和老年人口的增加，其发病率在我国逐年升高，且多数患者常合并各种慢性并发症，因而防治糖尿病及其并发症已刻不容缓。糖、脂代谢紊乱是糖尿病的主要病理生理特点，亦是其各种并发症的基础。自由基代谢异常、氧化应激亦与糖尿病及其并发症密切相关1。目前，除宏观的预防保护措施外，某些植物活性物质在增强体质、提高抵抗力、抗氧化损伤等方面可发挥较好的作用。文献报道：大豆中含有多种对人体健康有益的活性成分，而经过发酵后的大豆制品不仅营养丰富，而且可使其中的活性成分得到强化2。唐

10、可肽是采用纯大豆经发酵后制成的大豆发酵食品，经长期市场供应后，发现其对糖尿病患者的血糖、血脂具有较好的控制作用3。本实验观察唐可肽对糖尿病大鼠血脂及脂质过氧化的影响，为大豆发酵制品的开发和利用提供依据。1材料与方法1.1受试物和实验动物唐可肽是以食源性非转基因大豆为原料，经过多种微生物定向分解、转化而成的一种大豆发酵液，由陕西国萃生物制品有限公司提供。唐可肽干预剂量设计：低(17 mL/kg?bw)、中(51 mL/kg?bw)、高(153 mL/kg?bw )剂量组(剂量设计依据中国卫生部保健食品评审委员会有关保健食品动物实验的剂量设计规定进行)，另设对照组和模型组。雄性SD大鼠，体重180

11、220 g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，动物合格证编号：医动字第09-012号。1.2主要试剂和仪器链脲霉素(STZ)，Sigma公司生产，临用时将STZ溶于0.1 mol/L(pH 4.4) 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中配成10 g/L STZ溶液。TG、TC、HDL-C、LDL-C、FFA、SOD、GSH-Px、MDA测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。7170A全自动生化分析仪由日本日立公司生产;722可见分光光度计由上海市第三分析仪器厂生产;BX40显微镜由日本OLYMPUS公司生产。1.3T2DM大鼠模型的建立4-5实验动物适应性喂养一周后，将60只雄性SD大鼠随机分为糖

12、尿病造模组(51只)和对照组(9只)。糖尿病造模组大鼠喂饲高糖高脂饲料(59%普通饲料，10%猪油，20%白糖，10%蛋黄粉，0.2%猪胆盐，1%胆固醇)，对照组喂饲基础饲料。8周后，造模组大鼠禁食12 h，按公斤体重腹腔注射STZ 30 mg,72 h后断尾取血测空腹血糖(fasting blood glucose， FBG)，如FBG16.7 mmol/L为造模成功。1.4唐可肽干预实验将37只成模大鼠按FBG和体重进行匹配后随机分为唐可肽低、中、高剂量组和模型组(各剂量组9只，模型组10只)。造模组与对照组大鼠禁食不禁水12 h后，内眦静脉采血，测定血脂水平。各剂量组动物单笼喂养，每日早

13、8时，将按相应剂量要求的唐可肽置于自制的饲料盒中，监视大鼠喝完。干预期8周，干预期间各组均喂饲基础饲料(唐可肽干预期间，模型组大鼠由于血糖过高导致2只死亡，各剂量组及对照组无大鼠死亡)。1.5指标测定TG、TC、HDL-C、LDL-C由全自动生化分析仪测定，FFA、SOD、GSH-Px、MDA采用酶化学法测定。1.6统计学处理应用SPSS13.0统计软件对实验数据进行统计学分析。数据以x-±s表示，两组均数间比较采用t检验;多组均数间的显著性检验采用单因素方差分析，多组均数间的两两比较采用LSD-t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1血脂谱的变化糖尿病模型造模成

14、功后(9周)，模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C均高于对照组，HDL-C低于对照组(表1);实验结束时模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C均高于对照组，HDL-C低于对照组(表2)，表明实验期间模型组大鼠一直存在糖、脂代谢紊乱。实验结束时，唐可肽中、高剂量组血清TC与模型组比较，显示唐可肽可不同程度的降低糖尿病大鼠血清TC的水平，唐可肽各剂量组血清TG与模型组比较均降低，显示唐可肽可不同程度的降低各剂量组糖尿病大鼠血清TG的水平(表2)。唐可肽对高剂量组大鼠血清HDL-C有升高作用，而对LDL-C有降低作用(表2)。与MC组相比，各剂量组大鼠血清FFA均降低，显示唐可肽可不同程度的降低糖尿病

15、大鼠血清FFA的水平(表2)。2.2氧化抗氧化指标的变化实验结束时，与模型组比较，唐可肽各剂量组大鼠血清MDA均有不同程度的降低(表3)，而唐可肽中、高剂量组血清SOD、GSH-Px活力有不同程度的升高(表3)。2.3肝脏组织形态学的变化各组大鼠肝脏肉眼观察：对照组大鼠肝脏呈暗红色，质地均匀，形态规则，未见异常;模型组大鼠肝脏色泽泛黄，黄白相间，触之有油腻感。肝脏组织切片HE染色光镜(×40)观察：对照组大鼠肝脏切片可见肝小叶结构清晰完整，肝索排列整齐，肝细胞边界清楚，细胞呈多边形，胞浆丰富，核圆位于中央，细胞质均匀，肝细胞内无脂肪空泡(图1A)。模型组大鼠肝脏肝板结构破坏，肝细胞排

16、列紊乱，肝细胞增大，核大小不等，细胞内有明显脂肪变性，肝细胞胞浆内可见大小不等、数量不一的脂肪空泡，有的较小为脂滴样散布于核周，有的较大位于整个胞浆，严重者胞核被脂滴挤向一侧，成印戒样改变(图1B)。唐可肽各剂量组与模型组相比，肝细胞排列较整齐，肝细胞边界较清楚，肝细胞内脂肪空泡有所减少，其中高剂量组肝细胞内脂肪空泡最少(图1C)、中剂量组次之(图1D)、低剂量组最多(图1E)。3讨论大豆发酵液是大豆蛋白经过微生物发酵后形成大豆多肽和小分子物质的混合物，具有溶解度好、黏度低、易消化等特性。大豆发酵液中的功能性成分主要包括大豆多肽、大豆异黄酮、大豆皂甙及大豆低聚糖等，现代研究表明大豆发酵食品具有

17、抗癌、降压、抗氧化、抗菌、调节胰岛素、降血脂等作用6。本研究证实了大豆发酵液唐可肽具有调节实验性糖尿病大鼠血脂代谢紊乱及缓解肝脏脂肪变性的作用。血脂紊乱在DM的发生发展中起重要的作用。脂毒性导致细胞凋亡及胰岛素抵抗，而血糖升高又加重了血脂紊乱。有关研究表明，DM患者心血管疾病等的发生率和死亡率较非DM患者显著增高，其重要原因之一是合并有血脂代谢异常7。因此，提示唐可肽对DM患者心血管疾病的发生有较好的防治作用。机体在新陈代谢中产生的自由基包括超氧化物自由基、过氧化物自由基、羟基自由基等。自由基在体内产生过多或清除过少，均可损伤机体。在正常情况下，机体内的自由基生成系统和消除系统相互协调，维持着

18、自由基的产生和消除的动态平衡。糖尿病时，由于糖代谢紊乱导致机体葡萄糖自身氧化、蛋白非酶糖化、肾素-血管紧张素系统激活及代谢应激等，从而使机体产生大量活性氧8;同时抗氧化酶发生糖化或氧化，导致机体抗氧化酶活性下降，清除自由基的能力下降，而反映氧化应激水平的物质，如脂质过氧化的终末产物MDA含量明显升高9。已发现糖尿病及其慢性并发症的发生、发展与氧化应激增高、氧自由基积聚过多密切相关10，氧化应激带来的脏器损伤可能是糖尿病多种并发症发病机制的共同通道11。本研究结果显示：唐可肽可升高大鼠血清的SOD、GSH-PX，降低MDA，表明唐可肽具有抗氧化作用，可以缓解糖尿病大鼠机体的氧化应激，具有抗脂质过

19、氧化作用，从而有利于减少糖尿病并发症的发生。综上所述，唐可肽可以调节糖尿病大鼠机体的脂代谢紊乱，改善其氧化应激，缓解糖尿病大鼠肝脏组织的脂肪变性，对预防糖尿病并发症有一定的作用。同时，也为大豆发酵产品的开发提供了理论依据。【参考文献】1于冬青，邓华聪. 姜黄素对糖尿病大鼠糖、脂代谢及其氧化应激的影响 J. 重庆医学， 2005， 34(1)：37-39.2邵伟，熊泽，何晓文. 发酵大豆多肽及其功能研究 J. 中国酿造， 2005， 13(6)：23-25.3张娟妮，赵立群，王振林.某种大豆发酵液降血糖作用的实验研究 J. 上海预防医学， 2008， 20(9)：427-428.4朱奎奎，陈伟平

20、，何自立. 蚕蛹提取物对糖尿病大鼠血糖和血脂水平的影响 J. 浙江预防医学， 2008， 20 (8)：9-11.5赵宝珍，白秀平，荣青峰. 实验2型糖尿病大鼠模型的研究 J. 中国药物与临床， 2002， 2(6)：383-385.6庞庆芳，张炳文，孙爱东. 中国传统大豆发酵食品-豆豉功能成分的研究进展 J. 食品研发， 2006， 27(2)：185-187.7甲吉芳. 脂代谢紊乱与2型糖尿病慢性并发症关系分析 J. 实用心电学， 2008， 17(3)：187-188.8ONOZATO ML， TOJO A， GOTO A， et al. Oxidative stress and nit

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