68培养基适用性检查标准操作规程

1、文件名称 培养基适用性检查标准操作规程 文件编号： SOP-QC-000-03 起草人： 起草日期： 部门： 审核人： 审核日期： 页码 1/6 审核人： 审核日期： 版本号 03 批准人： 批准日期： 生效日期 颁发部门 质量部 分发部门 质量部、质量保证室、质量控制室 1目的 建立培养基适用性检查的标准操作规程，保证微生物限度检查结果的准确性和可靠性。 2范围 适用于微生物限度检查中成品培养基、脱水培养基或按处方配制的培养基。 3职责 质量部组织制订，微生物限度检查操作人员负责实施。 4内容 4.1 依据：中国药典2015年版四部。 4.2 概述： 4.2.1 培养基质量是影响微生物限度检

2、查结果的重要环节。 计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。 4.2.2 培养基适应性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价判断检验用培养基是否符合检验要求。 4.2.3 微生物限度检查用培养基主要分为细菌、霉菌及酵母菌计数测定用培养基和控制菌检查用培养基两部分。 4.2.4 微生物限度检查用培养基质量控制的一股原则 文件名称： 培养基适用性检查标准操作规程 文件编号： SOP-QC-000-03 版本号

3、：03 页他2/6 4.2.4.1 不同处方培养基的替代使用不能通过培养基适应性试验简单确定。 4.2.4.2 如果没有特殊规定， 培养基配制采用蒸储水或纯化水均可， 但应采取一定措施加以检测控制；如蒸储水应测PH值是否为57;采用离子交换法制备的纯化水，电阻值应不小于2MQ等。 4.2.4.3 尽量现用现配。培养基灭菌后在能取出的前提下，尽快取出，切忌在高压锅内过夜存留；固体培养基灭菌或熔化后，融化状态放置不得超过8h;固体培养基熔化 再使用应不超过一次；一般预制培养基可置洁净环境225c保存，但不应超过21天4.2.4.4干粉培养基变质、过期均不应再用；预制培养基储存过程中发现浑浊、变色、

4、长菌、严重脱水等变化均不应再用。 4.3 计数培养基的适应性检查 4.3.1 菌种 培养基大肠埃希菌CMCC(B)44102 金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003 枯草芽抱杆菌CMCC(B)63501 白色念珠菌CMCC(F)98001 黑曲霉CMCC(F)98003 4.3.2 培养基 (1)需氧菌总数计数用培养基 胰酪大豆陈琼脂被检培养基 胰酪大豆陈琼脂对照培养基或 胰酪大豆陈液体被检培养基 胰酪大豆陈液体对照培养基 (2)霉菌和酵母菌计数用 沙氏葡萄糖琼脂被检培养基 沙氏葡萄糖琼脂对照培养基 文件名称： 培养基适用性检查标准操作规程 文件编号： SOP-QC-000-03 版本号：03

5、 页他3/6 4.3.3 菌液制备 (1)接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆陈琼脂培养基或胰酪大豆豚液体培养基中，于3035c培养1824小时后，将大肠埃 希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌的新鲜培养物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白冻缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。 (2)接种白色念珠菌、黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基，于2025c培养57天(或直到获得丰富的抱子)后，将白色念珠菌、黑曲霉的新鲜培养物用PH7.0无菌氯化钠-蛋白冻缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。 4.3.4 培养基适用性检

6、查 (1)分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌的菌液至胰酪大豆豚液体被检培养基中，或分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆陈琼脂被检培养基，每株试验菌平行制备2管或2个平皿，混匀，凝固，置3035c培养时间不超过3天。 (2)分别接种不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉的菌液至胰酪大豆陈琼脂被检培 养基和沙氏葡萄糖琼脂被检培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，胰酪大豆陈琼脂被检培养基置3035c培养时间不超过3天。 沙氏葡萄糖琼脂被检培养基置2025c培养时间不超过5天。 (3)同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 4.3.5 结果判定

7、 若被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在0.5 2范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该固体培养基的适用性检查符合规定。若被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌生长良好，判该液体培养基的适用性检查符合规定。 4.4 控制菌检查用培养基适用性检查 4.4.1 菌种 文件名称： 培养基适用性检查标准操作规程 文件编号： SOP-QC-000-03 版本号：03 页他4/6 大肠埃希菌CMCC(B)金黄色葡萄球菌CMCC(B)铜绿假单胞菌CMCC(B)乙型副伤寒沙门菌CMCC(B) 4.4.2 培养基 肠道菌增菌液体样品培养基 紫红胆盐葡萄糖琼脂样品培养基

8、 麦康凯液体样品培养基 麦康凯琼脂样品培养基 RV沙门菌增菌液体样品培养基 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂样品培养基 三糖铁琼脂样品培养基 澳化十六烷基三甲胺琼脂样品培养基 甘露醇氯化钠琼脂样品培养基 4.4.3 菌液制备 将大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆陈液体培养基中或在胰酪大豆陈琼脂培养基上，3035c培养1824小时，将上述培养物, 用PH7.0无菌氯化钠-蛋白冻缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。 4.4.4 培养基适用性检查 4.4.4.1 液体培养基促生长能力检查：分别接种不大于100cfu的试验菌(表1)于被检 培养基和对照培养基中，

9、在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养，与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。 4.4.4.2 固体培养基促生长能力检查：用涂布法分别接种不大于100cfu的试验菌(表1)于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养，被检培养基和对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。44102 26003 10104 50094 肠道菌增菌液体对照培养基 紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基 麦康凯液体对照培养基 麦康凯琼脂对照培养基 RV沙门菌增菌液体对照培养基 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂对照培养基 三糖铁琼脂对照培养基 澳化

10、十六烷基三甲胺琼脂对照培养基 甘露醇氯化钠琼脂对照培养基 文件名称： 培养基适用性检查标准操作规程 文件编号： SOP-QC-000-03 版本号：03 页他5/6 4.4.4.3 培养基抑制能力检查：接种不少于100cfu的试验菌于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最长培养时间下培养，试验菌应不得生长。 .培养基指示特性检查：用涂布法分别接种不大于100cfu的试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养基温度及最短培养基时间下培养。被检培养基上试验菌的菌落形态特征、菌落颜色及指示剂反应情况应与对照培养基一致。 表1控制菌检查用培养基的促生长、抑制和指

11、示能力检查 控制菌检查 /口加小 特性 试验菌株 耐胆盐革兰 氏阴性菌 肠道菌增菌液体培养基 紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌、铜绿 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌、铜绿 大肠埃布国 麦康凯液体培乔基 攵康凯琼月日拈加生 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示能力 大肠埃布国 金黄色葡萄球菌 大肠埃布国 沙门菌 RV沙门菌增菌液体培养基 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基 三糖铁琼脂样品培养基 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示能力 指示能力 乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌 乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 铜绿假单胞 菌 澳化十六烷基二甲胺琼脂

12、培养基 促生长能力 抑制能力 铜绿假单胞菌 大肠埃布国 金更色葡萄 球菌 甘露醇氯化钠琼脂培养基 促生长能力+指示能力 抑制能力 金黄色葡萄球菌 大肠埃布国 文件名称： 培养基适用性检查标准操作规程 文件编号： SOP-QC-000-3 版本号：03 贞他：6/6 结果判定 液体培养基促生长能力检查时，与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好表明此培养基促生长能力符合要求。固体培养基促生长能力检查时，被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致表明被检培养基促生长能力符合要求。培养基抑制能力检查时，相应试验菌应不得检出。培养基指示特性检查时，被检培养基中试验菌生长的菌落大小、

13、形态特征、指示剂反应情况等与对照培养基一致表明此培养基的指示能力符合要求。 5相关文件无 6变更历史 版本号 变更原因及内容描述 执行日期 00 制定第一版文件 2007年09月15日 01 版本修订 2012年01月02日 02 版本修订 2014年02月17日 03 2010年版GM曲行 2015年01月01日 7 7附录 附件1细菌检查用培养基适用性检查记录 附件2霉菌及酵母菌检查用培养基适用性检查记录 附件3控制菌检查用培养基适用性检查记录计数菌检查用培养基适用性检查记录 文件编号：SOP-QC-000-03记录编号： 一、1、需氧菌总数计数培养基：胰酪大豆陈琼脂培养基 样品培养基：批

14、号：有效期： 生产厂家： 对照培养基：批号： 制造单位： 2、霉菌和酵母菌总数计数培养基：沙氏葡萄糖琼脂被检培养基 样品培养基：批号：有效期： 生产厂家： 对照培养基：批号： 制造单位： 、菌种: 菌种名称 代码 代数 大肠埃希菌 CMCC(B)44102 金黄色葡稳球菌 CMCC(B)26003 枯草芽抱杆菌 CMCC(B)63501 白色念珠菌 CMCC(F)98001 黑曲霉 CMCC(F)98003 三、培养基适用性检查 （1）分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌的菌液至胰酪大豆豚液体被检培养基中，或分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆陈琼脂被检培养基，

15、每株试验菌平行制备2管或2个平皿，混匀，凝固，置3035c培养时间不超过3天。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 菌种类型 样品培养基（Y） 对照培养基（D） Y/D (%) 培养基Y与D上的 菌落形态对比 皿1 皿2 平均 皿1 皿2 平均 大肠埃希菌 金黄色葡稳球菌 枯草芽抱杆菌 （2）分别接种不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉的菌液至胰酪大豆陈琼脂被检培养基和沙氏葡萄糖琼脂被检培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，胰 酪大豆陈琼脂被检培养基置3035c培养时间不超过3天。沙氏葡萄糖琼脂被检培养基置2025c培养时间不超过5天。同时，用相应的对照培养基替代被

16、检培养基进行上述试验。 菌种类型 菌种类型 样品培养基（Y） 对照培养基（D） Y/D (%) 培养基Y与D上的菌落形态对比 皿1 皿2 平均 皿1 皿2 平均 白色念珠菌 需氧菌总数 计数 黑曲霉 白色念珠菌 霆菌和酉子母 菌总数计数 黑曲霉 四、检验标准： 若被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在0.52范 围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该固体培养基的适用性检查符合规定。若被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌生长良好，判该液体培养基的适用性检查符合规定。 五、结果判定： 检验人: 日期: 复核人 日期: 控制菌检查培养基适用性检查记录 文件编

17、号：SOP-QC-000-03记录编号： 一、培养基： 配制日期：年月日实验日期：年月日 .样品培养基：批号：有效期： 生产厂家： .对照培养基：批号： 制造单位： 二、菌种： 菌种名称 代码 代数 菌液的制备 口大肠埃希菌 CMCC(B)44102 各菌种的新鲜培养物1ml,用9mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白陈缓冲液或0.9%无国NaCl溶 液10倍递增稀释 金黄色葡稳球菌 CMCC(B)26003 铜绿假单胞菌 CMCC(B)10104 乙副伤寒沙口菌 CMCC(B)50094 需要的菌种在口内划。 三、检查结果：需做的检查在口内划 1.增菌培养基促生长能力检查 分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌 检验标准：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。 结论： 2.固体培养基促生长能力检查 分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌 检查规定的培养温度和时间下培养，与对照培养基比较