葡萄酒中铁含量的测定---邻菲啰啉比色法

1、葡萄酒中铁含量的测定-邻菲啰啉比色法操作指南（90min内完成所有考核内容）1、原理 样品经处理后，试样中的三价铁在酸性条件下被盐酸羟胺还原成二价铁，与邻菲啰啉作用生成红色螯合物，其颜色的深度与铁含量成正比，用分光光度法进行铁的测定。（于480 nm波长处）2、仪器与试剂仪器 分光光度计。高温电炉。凯氏烧瓶。25mL成套比色管。试剂 浓硫酸。过氧化氢溶液30。铁标准贮备液（1 mL溶液含有 0.1 mg铁）：称取0.216g克硫酸铁铵NH4Fe(SO4)2·12H2O，溶于水，加2.5毫升硫酸溶液 (25%),移入250毫升容量瓶中，稀释至刻度。铁标准使用液（1 mL溶液含有10 g

2、铁）：吸取 10.00 mL铁标准贮备液于 100 mL容量瓶中，用0.5硝酸溶液稀释至刻度，此溶液每毫升含10 g铁。铁标准系列：吸取铁标准使用液 0.00，0.20，0.40，0.80，1.00，1.40 mL（含 0.0，2.0，4.0，8.0，10.0，14.0 g铁）分别于六支 25 mL比色管中，补加水至 10 mL，加 5 mL乙酸-乙酸钠溶液（调pH至 35）、1 mL盐酸羟胺溶液，摇匀，放置5 min后，再加入1 mL 邻菲啰啉溶液，然后补加水至刻度，摇匀，放置 30 min，备用。该系列用于标准工作曲线的绘制。氨水 2528。盐酸羟胺溶液（100 gL）：称取5g盐酸羟胺，

3、用水溶解并稀释至50mL，于棕色瓶中低温贮存。乙酸-乙酸钠溶液（pH=4.8）：称取 27.2g乙酸钠（CH3COONa·3H2O），溶解于50mL水中，加20mL冰乙酸，加水稀释至100mL。 2.5 gL邻菲啰啉溶液：称取0.25g邻菲啰啉，加10mL95%（体积分数）乙醇溶解，用水稀释至100mL。25%硫酸溶液：用1体积的浓硫酸和5.23体积的水配制。（先将水加入烧杯中，再把浓硫酸沿着烧杯壁缓慢加入，并用玻璃棒不停地搅拌）0.5硝酸：取0.5mL 硝酸置于适量水中,再稀释至于 100 mL。3、操作步骤样品处理：吸取酒样 1.00 mL于 10 mL凯氏烧瓶中，置电

4、炉上缓缓蒸发至近干，取下稍冷后，加1 mL浓硫酸（根据含糖量增减）、1 mL过氧化氢，于通风厨内加热消化。如果消化液颜色较深，继续滴加过氧化氢溶液，直至消化液无色透明。稍冷，加10 mL水微火煮沸 （35） min，取下冷却。同时做空白试验。标准工作曲线的绘制在 480 nm波长下，测定标准系列的吸光度。根据吸光度及相对应的铁浓度绘制标准工作曲线（或建立回归方程）。试样的测定将试样及空白消化液分别洗入25 mL比色管中，在每支管中加入一小片刚果红试纸，用氨水中和至试纸显蓝紫色（pH45），然后各加5 mL乙酸-乙酸钠溶液（调 pH至35），加1 mL盐酸羟胺溶液，摇匀，放置5 min后，再加入1 mL 邻菲啰啉溶液，然后补加水至刻度，摇匀，放置 30 min，在分光光度计上于480 nm波长处测出的吸光度，从标准工作曲线上查出铁的含量（或用回归方程计算）。4、结果计算 式中：X样品中铁的含量，mgL； A测定用样品中铁的含量，g；A0试剂空白液中铁的含量，g；V取样体积，mL。所得结果