茴三硫对大鼠酒精及四氯化碳致肝纤维化的防治作用

1、 作者单位:100029北京, 中日友好医院消化内科(房龙、马安林、李靖涛、王远新、赵洪川 ; 中日友好医院病理科(王泰玲茴三硫对大鼠酒精及四氯化碳致肝纤维化的防治作用房龙马安林李靖涛王远新王泰龄赵洪川【摘要】目的复制大鼠酒精及四氯化碳致肝纤维化动物模型, 观察茴三硫对其起防治作用的剂量大小。方法健康雄性Wistar 大鼠60只, 随机分为6组, 实验持续4周。A 组(空白对照组 :生理盐水灌胃, 每天1ml/100g 体重。B 组(模型组 :白酒灌胃, 每天1mg/100g 体重, 同时CCl 4腹腔内每次注射0. 025mg/100g 体重, 每周2次。C 、D 、E 组(茴三硫小、中、大

2、剂量组 :在B 组基础上预先灌胃茴三硫每天015、110、2. 0mg/100g 体重。F 组(阳性对照组 :在B 组基础上凯西莱预先灌胃, 每天10mg/100g 体重。第2周末、第4周末分别取血检测A LT 、AST 、A LP ,G SH 2Px 、M DA 等项目。实验结束处死动物, 取肝组织行病理检验。结果酒精及四氯化碳可引起大鼠肝功能损害、脂质过氧化加重, 组织学出现肝纤维化表现。给予茴三硫可明显减轻这些改变。结论茴三硫对大鼠酒精及四氯化碳致肝纤维化有明显防治作用。【关键词】茴三硫; 酒精; 四氯化碳; 肝纤维化E ffect of anetholtrithione on the

3、fibrosisinduced by alcohol o f , Hospital , Beijing 100029, China【odel of liver fibrosis induced by alcohol and tetrachloride carbon ,and observe the effects of anetholtrithione. Methods Sixty male Wistar rats were divided randomly into six groups ,and experiment was continued for 4weeks. G roup A (

4、control group was perfused gastrically by saline at the dose of 1ml 100g -1d -1. The other groups were perfused gastrically by 56%alcohol at the dose of 1ml 100g -1d -1,and at the same time CCl 4was injected intraperitoneally at the dose of 0. 025mg/100g ,b. i. w. G roup C , D , E (small , middle an

5、d large dose of anetholtrithione was beforehand perfused gastrically by anetholtrithione at the dose of 0. 5, 1. 0, 2. 0mg 100g -1d -1. G roup F (control group of positive drug was beforehand perfused gastrically by tiopronin at the dose of 10mg 100g -1d -1. At the end of the 2nd week and the 4th we

6、ek A LT , AST , A LP , G SH 2Px , MDA were examined. When the ex 2periment was over ,rats were euthanized and the histopathologic alterations of liver were observed. R esults At the 2nd week and the 4th week , group B were obviously different from group A , C , D , E , F. G roup B showed significant

7、 heptic injury , in 2cluding increased A LT , AST , A LP , MDA and decreased G SH 2Px ,cellular necrosis , inflammatory in filtration and liver fibro 2sis. When com pared with group B , the heptic injury in grouup C , D , E , F were mild , especially group D. Conclusion Anetholtrithione has remarkab

8、le prevention and cure action of rat liver fibrosis.【K ey w ords 】Anetholtrithione ; Alcohol ; Carbon tetrachloride ; Iiver fibrosis 长期饮酒可引起轻型酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化、酒精性肝硬化等轻到重的病变, 统称为酒精性肝病。国内外文献报道, 茴三硫具有保护肝细胞、抗氧化、降低血中胆固醇、促进唾液分泌、防癌、抑制血小板聚集、调节免疫等作用, 临床上主要用于治疗慢性肝炎、高脂血症、脂肪肝等, 而茴三硫对酒精性肝损伤的作用鲜有报道。由于单纯

9、酒精灌胃难以形成肝维维化模型, 本实验为了观察茴三硫对肝纤维化的作用将复制酒精及四氯化碳致肝纤维化模型, 采用茴三硫对大鼠进行防治, 观察其对动物血液生化和病理改变的影响。材料与方法一、实验动物健康雄性W1star 大鼠60只, 体重160200g , 为二级清洁动物。严格按实验动物管理条例管理,24小时昼夜交替环境, 观察1周后用于实验。采用高脂低蛋白饮食(玉米面占50%; 花生油占20%; 矿物质及维生素占5%; 鱼粉、豆粉、高梁粉占25% , 饮用自来水。二、实验药物“二锅头”白酒(56度 ,CCl 4, 茴三硫(商品名:胆维他 , 凯西莱。924 三、动物分组随机分为6组, 每组10只

10、。A (空白对照组 :灌胃生理盐水1m1100g 体重-1天-1, 共4周。B (模型组 :灌胃白酒1m1100g 体重-1天-1, 同时CCl 4腹腔内注射0. 025m1100g 体重-1次-1(与花生油配成13混悬液 , 每周2次, 共4周。C 、D 、E (茴三硫小、中、大剂量组 :在B 组基础上预先灌胃茴三硫0. 5、1. 0、2. 0mg 100g 体重-1天-1, 共4周。F (阳性药对照组 :在B 组基础上预先灌胃凯西莱10mg 100g 体重-1天-1, 共4周。四、观察指标11第2周末、第4周末分别取血检测谷丙转氨酶(LT 、谷草转氨酶(AST 、碱性磷酸酶(Alkalin

11、e Phos 2phatase ,AIP , 谷胱甘肽过氧化物酶(G lutathione Peroxi 2dase ,G SH 2Px 、丙二醛(Malondialdehyde ,MDA 等项目。21第4周末处死动物, 取肝组织标本, 福尔马林固定,HE 、MASS ON 染色, 作光镜检查病理分级标准:(-(±(+; 弥漫性病变, <33区(+ ; 弥漫性病变,33%66%区(+ ; 弥漫性病变, >66%或达到肝腺泡区(+ 。肝小叶内炎症、坏死:无(- ; 偶见(± ; 散在小坏死灶(+ ; 时见坏死灶(+ ; 大坏死灶, 弥漫存在于肝小叶(+ ; 桥接坏

12、死(+ 。纤维化:无(- ; 中央静脉或汇管区周围轻度纤维化(; 中央静脉间有纤维隔形成, 但尚未连接成环(; 中央静脉间纤维隔相连成环形, 汇管区位于其中央(; 中央静脉间纤维隔相连成环形, 汇管区位于其中央, 并且在中央静脉和汇管区之间出现纤维隔(; 中央静脉间纤维隔相连成环形, 汇管区位于其中央, 并且在中央静脉和汇管区之间出现明显纤维隔(。病理计分标准:(- 记0分; (± 记1分; (+、 记3分; (+、 记6分; (+、记9分; (+、记12分; ( 记15分。各组计量资料以 x ±s 表示,SPSS10. 0软件进行t 检验, P <0. 05为差异显

13、著。病理结果以SPSS10. 0软件进行秩和检验, P <0. 05为差异显著。结果一、肝功能第2周末、第4周末B 组与A 组比较,A LT 、AST 、A LP 出现显著改变, 提示酒精及四氯化碳引起大鼠肝功能损害。C 、D 、E 、F 组A LT 、AST 、A LP 则明显改善, 其中D 组程度最显著(如表1、2、3、4 。表1各组大鼠血清A LT 、AST分组A LT (IU/L AST (IU/L 第2周末第4周末第2周末第4周末A 77. 60±8. 9075. 00±9. 31194. 80±31. 42176. 80±28. 58B

14、 913. 67±83. 42436. 00±52. 841639. 56±111. 79690. 78±40. 97C 598. 00±39. 75371. 11±27. 80954. 33±79. 62615. 11±28. 15D 89. 78±9. 1667. 56±8. 95209. 78±34. 45183. 67±32. 17E 343. 22±56. 21173. 89±16. 10549. 67±77. 84408. 44

15、77;25. 33F205. 90±59. 2261. 67±11. 49402. 90±62. 32229. 56±23. 32表2各组大鼠血清A LT 、AST 统计分析结果(P 值分组A LTAST第2周末第4周末第2周末第4周末B vs C <0. 001<0. 001<0. 001<0. 001B vs D <0. 001<0. 001<0. 001<0. 001B vs E <0. 001<0. 001<0. 001<0. 001B vs F <0. 001<

16、0. 001<<0. 001F vs E<<0. <0. 001表3A LPA LP (I U/L 第2周末第4周末A 183. 90±26. 23158. 40±24. 21B 504. 33±39. 67423. 56±32. 75C 371. 56±36. 07318. 33±44. 86D 172. 44±23. 34163. 67±27. 44E 314. 67±28. 66236. 67±18. 87表4各组大鼠血清A LP 统计分析结果(P 值 分组A

17、 LP第2周末第4周末B vs C <0. 001<0. 001B vs D <0. 001<0. 001B vs E <0. 001<0. 001B vs F <0. 001<0. 001F vs E<0. 05<0. 001二、脂质过氧化第2周末、第4周末B 组大鼠脂质过氧化程度加重, 表现为G SH 2Px 水平降低,MDA 水平升高。预先给予茴三硫、凯西莱可明显减轻增加的脂质过氧化, 以D 组最显著(如表5、6 。表5各组大鼠血G SH 2Px 、MDA分组G SH 2Px (U/m l M DA (U/m l 第2周末第4周

18、末第2周末第4周末A 66. 830±5. 94467. 690±5. 0557. 280±1. 7997. 200±2. 269B 54. 800±4. 01644. 689±5. 48610. 222±2. 42215. 356±2. 302C 55. 822±4. 05050. 511±4. 3069. 278±2. 16011. 256±2. 065D 68. 300±2. 15260. 333±3. 9677. 556±1. 1689.

19、 289±1. 921E 63. 522±4. 94752. 589±4. 1308. 333±1. 38011. 500±2. 927F 60. 210±5. 68951. 167±4. 0438. 070±1. 56112. 478±2. 337034 表6各组大鼠血G SH 2Px 、MDA 统计分析结果(P 值分组G SH 2PxM DA第2周末第4周末第2周末第4周末B vs C >0. 05<0. 05>0. 05<0. 01B vs D <0. 001<0

20、. 001<0. 01<0. 001B vs E <0. 01<0. 01>0. 05<0. 01B vs F <0. 05<0. 05<0. 05<0. 05F vs E>0. 05>0. 05>0. 05>0. 05三、肝脏病理学改变A 组:肝细胞放射状围绕中央静脉排列, 小叶间纤维组织较少, 汇管区末见异常(如图1 。B 组:肝细胞脂肪变性:表现为肝细胞胞浆内出现明显脂滴, 包括大泡性脂变和小泡性脂变, 两种脂变常混合存在或以一种为主。炎症坏死:包括点灶状坏死、中央静脉周围融合性坏死等形式。局部肝细胞消失

21、, 其间有少量单个核细胞及中性粒细胞浸润。肝纤维化:大部分表现为中央静脉之间纤维隔形成, 未完全包绕(或存在细纤维隔包绕( ; 仅有1只大鼠中央静脉间较粗纤维隔包绕, 汇管区位于其中心, 并且中央静脉和汇管区之间出现纤维分隔(如图2 。C 、D 、E 、F 组:较B 组明显减轻, 以D 组最显著(如图3、4、5、6 。各组大鼠肝脏病理改变比较:酒精及四氯化碳可引起大鼠肝细胞脂肪变性、炎症坏死、纤维化等病变, 预先给予茴三硫、凯西莱, 大鼠肝脏病变减轻, 以中剂量茴三硫组最显著(如表7、8、9、10 。表7各组大鼠肝脏脂肪变性比较分组数量大泡性脂变例数小泡性脂变例数-±+-±

22、+A 101540001000000B 10212410505000C 9206100701100D 9306000702000E 10216100900100F1061219134 表8各组大鼠肝小叶内炎症、坏死比较分组数量肝小叶内炎症、坏死例数-±+A10244000B 10001630C 9107100D 9243000E 10136000表9各组大鼠肝脏纤维化比较分组数量肝脏纤维化例数-A101000000B 10002701C 9054000D 9072000E 10153100表10各组大鼠病理计分统计分析结果(秩和检验, P 值肝细胞脂肪变性肝小叶炎症坏死纤维化B vs

23、 C <0. 05<0. 01<0. 01B vs D <0. 01<0. 001<0. 001B vs E <0. 05<0. 01<0. 01B vs F <0. 01<0. 05<0. 05F vs E<0. 05<0. 05<0. 01讨论型。B ,CCl 4的加入使得动。氧化损伤、内毒素、免疫反应、缺氧等因素造成肝细胞坏死、炎性细胞浸润。肝脏K upffer 细胞、肝窦内皮细胞激活后分泌多种活性因子、趋化因子、黏附分子以及活性氧中间产物, 刺激肝脏星状细胞活化增生, 细胞外基质合成增多, 形成肝

24、纤维化。与其他研究结果相似1,2。同时给予不同剂量茴三硫的C 、D 、E 组与B 组相比, 实验中及实验结束时大鼠肝功能、血脂、脂质过氧化指标出现不同程度改善, 病理学改变也与此相符。说明茴三硫对酒精及四氯化碳引起的肝脏损害有显著的防治作用, 以中剂量组最明显。关于茴三硫对四氯化碳引发肝脏损伤的保护作用在Ansher SS 等3研究中也得到证实。茴三硫(anetholtrithione 化学名为52(对甲氧苯基 21,22二硫环戊242烯232硫酮。由于化学结构中含S 2S 键和C =S 键, 处于不饱和五元环结构中, 因而硫的活性异常高。Davies MH 等研究4认为, 茴三硫可以明显增加

25、肝脏谷胱甘肽(G SH 水平, 显著增加谷氨酰半肽氨酸合成酶(G CS 、谷胱甘肽还原酶(G SSG 2R 、谷胱甘肽巯基转移酶(G ST 活性, 从而显著增强肝脏细胞活力, 改变与谷胱甘肽结合的化合物的毒性。MansuyD 等研究5发现, 茴三硫对因化学方法或酶法诱发的小鼠肝脏脂质过氧化均有明显抑制作用, 可能与其结构中含有二硫硫酮有关。总之茴三硫被证明是强有力的具有细胞保护性肽基的抗氧化剂。, 例如乙醛与、P450酶系代; P450酶系代谢、并进一步形成肝纤维化。(G ST 可以催化谷胱甘肽(G SH 与乙醛结合, 形成无毒化合物排出体外。因此一方面茴三硫通过增加胱甘肽水平和谷胱甘肽巯基转移酶活性的双重作用加速乙醛的代谢, 降低乙醛对肝细胞的损伤。另一方面茴三硫能够减低自由基活性, 从而减轻酒精及四氯化碳诱发的肝脏毒性、减缓纤维化形成。本实验成功复制了大鼠酒精及四氯化碳致肝纤维化动物模型, 茴三硫对其有明显的防治作用, 以中剂量组最为显著。参考文献1Hall PD , Plummer JL , Ilsley AH , et al. Hepatic fibrosis and cirrhosis afterchronic adm inistration of alcohol and “low 2dose ”carb