人教版高中生物选修一专题二课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计教案

1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数【课题目标】研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。【课题重难点】重点：对图样的选取和培养基的配置难点：微生物的计数【知识要点和教学方法】1、 筛选菌株知识要点：微生物的选择培养，是指利用培养基的组成使适宜生长的特定微生物得到较快繁殖的技术，也称为微生物的“选择培养”。在有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在选择培养基上生长的微生物不一定是所需要的微生物，还需要进一步的验证。教学方法：根据教材上的事例，分析寻找菌株的要点，再根据书上的培养基配方，分析选择培养的方法。二、统计菌落数目知识要点：统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度

2、足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在 30300的平板进行计数。教学方法：教材中用楷体字编排的实例是为了说明设置重复组的重要性。根据这个实例，启示学生。【教学过程】课程导入上一节课我们学习了微生物的实验室培养方法，本课题和下一课题都是在此基础上对具体微生物进行分离和纯化培养。卫生么想到研究分解尿素的微生物呢？我们看一看教材课题背景部分。课题背景1. 尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。只有土壤中的细菌将尿素分解成氨

3、之后才能被植物利用。2. 细菌能分解尿素的原因土壤中的细菌能分解尿素是因为它们能合成脲酶。CO(NH2)2+H2O2NH3+CO23. 课题目的从土壤中分离出能够分解尿素的细菌；统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。研究思路1. 筛选菌株2. 统计菌落数目3. 设置对照筛选菌株1. 实例：DNA多聚酶链式反应(PCR)是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。原因：因为热泉温度70800C，淘汰了绝大多数微生物，只有Taq细菌被筛选出来。启示：在寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。2. 实验室中微生物的筛选原理人为提

4、供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。3. 本课题使用的培养基（教材P22）分析：固体培养基 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 能选择出分解尿素的微生物的原理培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。统计菌落数目1. 显微镜直接计

5、数利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察。2. 活菌计数法（间接计数法）原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，即一个菌落代表原先的一个单细胞。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。常用方法：稀释涂布平板法。计算公式：每克样品中的菌落数(C÷V)×M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。注意事项为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。为使结果接近真实值,可将同一稀释度的菌液加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目低。涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。统计微生物数目方法 显微镜直接计数法 活菌计数法（稀释涂布平板法间接计数） 比浊法 滤膜法（教材P26旁栏）（又叫膜过滤法）