杜仲叶绿原酸的提取分离

1、杜仲叶绿原酸的提取分离钱骅赵伯涛张卫明(南京野生植物综合利用研究院南京210042摘要比较了17种大孔吸附树脂对杜仲叶绿原酸的吸附、洗脱性能和吸附动力学特性;筛选试验表明NK A -9是一种性能优良的吸附剂。关键词杜仲;绿原酸;大孔树脂;纯化绿原酸是杜仲叶重要有效成分之一,具有广泛的抗菌、抗病毒、抗诱变、抗肿瘤作用,同时还是一种抗氧剂1。因其结构特性,而有一定的极性及水溶性。大孔吸附树脂在70年代末开始应用于中草药化学成份的提取分离,因其吸附容量大,选择性好,易于解吸附,机械强度高,再生处理简单,吸附速度快,操作简单,得率恒定,产品质量稳定等特点,且吸附法仅用少量溶媒洗脱树脂就能达到浓缩分离的

2、目的,溶媒用量大为减少,避免了溶媒法严重的乳化现象,特别适合从水溶液中分离低级性或非极性化合物,故与溶媒法和沉淀法相比,树脂法有其独到的优越性。寻找一种合适的树脂,对于优化生产工艺,充分利用杜仲叶资源具有重要意义。本文通过对17种大孔吸附树脂的筛选,发现极性树脂NK A-9是一种对绿原酸吸附性能优良的吸附剂。1材料及仪器杜仲叶:采自南京野生植物综合利用研究院。大孔吸附树脂:LD605、LD632、D140、D138、P97 -136为化工部成都有机硅研究中心提供;860021、C AD-40、DD-130为山东鲁抗树脂分厂提供;X-5、S-8、AB-8、NK A-9、NK A-、AAS、D40

3、20、D4006、D3520为天津南开大学化工厂提供。绿原酸标准品由中国药品生物制品检定所提供。岛津UV-250可见紫外分光光度计,三用紫外分析仪,ZFA-10型旋转蒸发器,薄膜浓缩器。所用试剂均为分析纯。2方法与结果2.1绿原酸测定参照文献2。2.2上样液制备杜仲叶干粉用70%乙醇(pH= 2.5,90提取3次,每次提取半小时,料液比分别为1:12,1:10,1:8。提取液浓缩至一定体积,预处理后上样。2.3树脂预处理先以蒸馏水溶涨后浮选,再用0.5NHCl浸泡1天,并不时搅拌,倾去酸液,水洗至中性,再用70%乙醇浸泡1天,并不时搅拌,再水洗至无须状物为至,抽干,室温干燥至不粘。2.4吸附率

4、的测定分别精密称取各种树脂1g于三角烧瓶中,再精密量取绿原酸溶液10ml,净态吸附24小时,过滤,对滤液在326nm下测吸光度A值。按下式计算各树脂室温下的吸附率(原液浓度10 ml-滤液浓度滤液体积(原液浓度10ml100%。各树脂对杜仲叶绿原酸的吸附性能见表1。2.5解吸率测定:分别依次用30%、60%、93%乙醇各10ml浸提10小时,按下式计算解吸率(各浸提液浓度各浸提液体积(原液浓度10ml-滤液浓度滤液体积100%。结果见表2。表1吸附树脂对绿原酸吸附率(%树脂型号吸附率(%树脂型号吸附率(% X-52586002120S-856C AD-4023AB-824DD-13022NK

5、A-926D13817D400612D14019D402011LD60519D352016LD63211AAS30P97-1369 NK A-25表1结果表明S-8、AAS有高的吸附率,其次是NK A-9,NK A-,X-5,AB-8,C AD-40,DD -130,860021。而D4006、D4020、D3520、D138、D140、LD605、LD632、P97-136只有很小的吸附。51杜仲叶绿原酸的提取分离表2结果表明,较易吸解附的树脂有X -5、AB -8、其次为NK A -9、DD130、860021、D4006、C AD -40,而S -8则很难被解吸下来,不易用作分离。表2不

6、同浓度乙醇对绿原酸的解吸率(%树脂型号30%乙醇60%乙醇93%乙醇X -5100-S -802821AB -88111-NK A -96530-D4*12D4020-D3520-AAS 63221NK A -4638108600216125-C AD -4045721DD -1306321- D138-D140-LD605-LD632-P97-136-综观上述各树脂吸附与解吸附特性的比较,AAS 、NK A -9、NK A -、X -5、AB -8、C AD -40和DD130既有较高的吸附性,又有较高的解吸率,可考虑进一步分析测定其吸附容量和动态吸附过程,以进一步筛选。2.6吸附时间与吸附

7、率的关系在有充分时间吸附的情况下,有些树脂可能具有相近的饱和吸附量,但是由于各树脂化学和物理结构的差异,其吸附动力学过程不同。从图1可见AAS 、NK A -、NK A -9达到吸附平衡所需时间最短,属快速吸附树脂。X -5、AB -8、C AD -40吸附容量虽然和NK A -、NK A -9相当,但吸附时间较长,为中速吸附树脂。DD -130达到平衡所需时间最长,其吸附容量也不大,为慢速吸附树脂。综上所述AAS 、NK A -、NK A -9具有较高的吸附容量且达到吸附平衡所需时间短。图1吸附树脂对绿原酸的吸附力学曲线 2.7树脂吸附洗脱特性参数比较以杜仲叶浓缩液(1ml 浓缩液所含杜仲叶

8、为1.34g ,其中绿原酸含量为18.2mg ml 预处理后为上样液,依次以水洗、30%乙醇、70%乙醇洗脱,分别收集水洗液和不同浓度乙醇洗脱液,用T LC 法定性检查,并依据检查结果,合并各段收集液。根据方法2.1测定绿原酸。所得结果如表3。比上柱量(saturation ratio :达到吸附终点时,单位质量干树脂吸附夹带成分的总和,S =(M 上-M 残M 。比吸附量(abs orbtion ratio :单位质量干树脂吸附成分的总和,A =(M 上M 残M 水洗M 。比洗脱量(eluation ratio :吸附饱和后,用一定溶剂洗脱至终点,单位质量干树脂洗脱成分的质量,E =M 洗脱

9、M 。以上M 为干树脂质量;M 上为上柱液中成分的质量;M 残为过柱流出液中成分的质量;M 水洗为洗脱下来的成分的质量;M 洗脱为洗脱成分的质量。表3树脂吸附纯化绿原酸的特性参数树脂比上柱量杜仲叶计g g绿原酸计mg g 比吸附量绿原酸计mg g 比洗脱量30%乙醇mg g 70%乙醇mg g AAS 3.852.150.4 4.918.3NK A -9 3.4146.344.832.17.6NK A - 3.3245.140.717.314.6表3结果表明,不同树脂对绿原酸吸附能力有差异,即AAS 的吸附容量最大,但较难被洗脱下来;NK A -9有较大的吸附容量,且易被解吸,洗脱峰较集中,分离效果较好;NK A -号有较大的吸附容量,也较易被洗脱,但洗脱峰平缓而不集中。3讨论与结论树脂的实际应用是由树脂的极性、孔径、比表面、孔容等综合性能决定的,因树脂的制造材料及结构的不同,其性能也不同。对树脂性能的评价要从吸附率、解吸率和吸附动力学试验的结果综合考虑。本文研究结果表明:NK A -9不仅具有较高的吸附容量,且吸着反应易于进行,