中医药对心肌细胞损伤保护作用的研究(一)

1、中医药对心肌细胞损伤保护作用的研究(一)    对缺糖缺氧损伤的保护作用 大量实验研究表明，培养的心肌细胞如缺糖缺氧6小时，则迅速引起细胞内能量耗竭，导致细胞功能受损，LDH等酶溢出，并伴有细胞超微结构损害。研究发现，中药能有效地对上述损害起保护作用。张家新1研究发现：在LDH酶水平显著高于正常对照组(P0.01)的缺糖缺氧心肌细胞培养液中，加入玫瑰茄提取液后，培养液中的LDH显著低于未加药物的缺糖缺氧组(P0.05)，提示该药物能较好的对缺糖缺氧损伤起保护作用。陈兴坚2等将中药提取物酸枣仁总皂甙分别用两种浓度(33g/ml和11g/ml)加入模型组中，

2、结果发现高浓度组可减轻缺糖缺氧心肌细胞LDH的释放，低浓度组则没有这样的作用，说明该药对心肌细胞的保护作用存有量效关系。值得一提的是：培养的心肌细胞对不同中药的浓度反应也有较大差异，杜锐生3研究发现，100g/ml与250g/ml的三七总皂甙均能减少缺糖缺氧组心肌细胞的LDH与-羟丁酸脱氢酶(-HBD)的释放，但作用以100g/ml浓度为明显，250g/ml的浓度反有减弱的趋势，提示中药保护心肌细胞与适宜的浓度相关，过大过小均不能达到最大效应。 有关中药保护心肌细胞缺糖缺氧损伤机理的研究，近年来也取得了长足的进展。洪行球4采用中药复方何氏心悸方(党参、五味子、麦冬等)观察其对细胞内琥珀酸脱氢酶

3、(SDH)活性的影响，该酶是三羧酸循环及线粒体氧化磷酸化有关的主要酶。实验发现，缺糖缺氧组细胞内SDH染色示活性明显降低，加入该药抽滤液后可明显提高SDH的活性，且使细胞搏动恢复，说明何氏心悸方是通过改善心肌细胞内代谢起到保护心肌细胞作用。汪长华5等采用计算机技术和SDH染色相结合的方法。将该酶活性量化，并检测LDH.心肌细胞内总磷酯和总胆固醇含量以及Ca2+Mg2+ATP酶活性进行综合分析发现，大豆磷脂脂质体可抑制心肌细胞培养液中LDH的活性和心肌细胞内SDH的反应性增加，减轻心肌细胞Ca2+Mg2+ATP酶活性的降低，提高心肌细胞总磷脂和总胆固醇的含量，说明大豆磷脂脂质体减轻培养心肌细胞缺

4、糖缺氧性损伤，可能与其作用于细胞膜脂质有关。近年来，有关中心肌细胞保护作用机理研究已达到分子水平。杜锐生3用同位素标记法研究发现，三七总皂甙可以减少缺糖缺氧心肌细胞DNA合成的降低。王玮67用精制血府胶囊(柴胡、赤芍、红花、桃仁等)取药给兔灌胃后，心脏采血，分离含药血清，研究其对缺糖缺氧心肌细胞的保护作用，发现该药可以提高缺糖缺氧心肌细胞的3Hurid(尿嘧啶核苷)及3HLeu(亮氦酸)的掺入率，提示中药能够减轻缺糖缺氧心肌细胞的DNA、RNA、蛋白质等大分子物质的合成，起到保护心肌细胞的作用。王玮进一步研究显示，该药能够改善心肌细胞-氧化氦合成酶(NOS)基因的表达，可能亦是精制血府胶囊保护

5、心肌细胞的重要机理之一。 心肌细胞超微结构的研究，进一步对中药保护心肌细胞提供形态学依据。陈家畅810发现缺糖缺氧6小时的心肌细胞核畸形，染色体边缘浓缩，线粒体肿胀，嵴消失，甚至出现空泡变性，此外，肌原结构破坏，有些区域偶见Z膜和A带，I带模糊不清或消失。有些肌原纤维有断裂和破碎，分别加用黄芪、当归，当归养血汤等后，大部分细胞核正常、染色质均一，肌原纤维内粗细肌丝排列整齐，Z膜、A带和I带清楚。局部未见肌原纤维断裂破碎，说明上述中药有较好的抗心肌细胞缺糖缺氧损伤作用。金花淑11发现，熊胆能够明显恢复缺糖缺氧心肌细胞的核畸形、线粒体及肌浆网肿胀，并与对照组比较，糖元增加，分布均匀。另外，中药对缺

6、氧再给氧对心肌细胞结构性损伤也有很好的保护作用。万华印12发现：正常细胞超微结构清晰，缺氧15分钟心肌细胞结构基本正常，仅偶见线粒体嵴变平、消失，而缺氧复氧组心肌线粒体损伤明显，肿胀、嵴溶解消失，并可见致密体，A带和I带消失。加入酸枣仁皂甙组及SOD组细胞超微结构明显改善，仅见部分线粒体肿胀，肌原纤维排列整齐，A带、I带清晰可见。提示：酸枣仁总皂甙有明显的抗缺氧复氧损伤作用。对缺氧再给氧损伤的保护作用 现代病理生理学研究提示：缺氧再给氧损伤主要表现在自由基损伤及钙超载两 个方面。参照Laurse13法建立心肌细胞缺氧再给氧损伤模型。万华印14发现：缺氧再给氧时，心肌细胞内超氧化构歧化酶(SOD

7、)活性降低，过氧化产物丙二醛(MDA)升高，细胞膜脂质流动性下降，酸枣仁总皂甙能够剂量依赖地显著降低缺氧再给氧心肌细胞MDA的含量。提高SOD活性。增加细胞膜流动性。说明其具有抗自由损伤的作用。杨世杰15研究外源性自由基损伤黄嘌呤一次黄嘌呤氧化酶(x-xo)系统，损伤的心肌细胞，发现损伤后细胞起搏比例明显降低，电参数(动作电位幅度、超射、阈电位及最大除极速度)等均变小，呈膜损伤改变，加入西洋参茎叶皂甙后细胞起搏比例及电参数与正常组对比改变不明显，说明该药有抗外源性自由基损伤的作用。在众多抗自由基损伤中药中，人参的研究尤为深入。钟国赣16应用电子自旋共振法(ESR)检测人参各组份抗外源性自由基损

8、伤(x-xo系统)时，心肌细胞内自由基的含量，发现11种人参皂戒单体中，有8种单体(Rg1、Rb1、Re、Rb2、RL、Rg2、Rb3、Rk1)可使心肌细胞内自由基明显少于对照组，有一种单体Rd对自由基含量无明显影响，另二组单体Rf、R0使细胞内自由基数量明显高于对照组。提示：人参皂甙净效应有良好的抗自由基损伤作用，但不同组份可出现效应迥异。作者认为，这主要取决于与甙元相连的糖基链，其中达玛烷型四环三萜被认为是抗自由基作用最主要的甙元基团。 钙离子超载是缺氧再给氧损伤的又一病理生理过程。唐景荣17应用同位素45Ca示踪法，发现50400g/ml丹皮磺酸钠能够显著地抑制正常及受损心肌细胞内钙摄取

9、量，并使心肌细胞膜唾液酸(SA)含量恢复正常，后者是维持心肌细胞正常Na+Ca2+交换的主要阴离子成份，提示钙阻滞是该药保护心肌细胞的机理之一。该作者的另一项研究18证实丹皮酚有同样的作用，且可以降低过氧化酯质LP水平。战术1920采用微电极细胞动作电位分析，发现刺五加茎叶皂甙单体Sb(200g/ml)和SC1(5080g/ml)可使心肌细胞动作电位波幅、波宽、阈电位、最大舒张电位、最大除极速度均减低，类似于尼莫地平的电生理效应，可见Sb、SC1的心肌细胞保护作用是其钙离子阻滞所致。应用相同的方法，齐晖21验证了大豆皂甙的钙离子阻滞作用。近年来，应用膜片钳技术成功地观察到心肌细胞膜上不同离子电

10、流进行离子通道的研究。钟国赣22应用该技术确证了人参二醇组、人参三醇组单体有钙通道阻滞作用，表现为钙离子通道的开放时间及开放频率减少。进一步研究人参皂甙单体Rh1等，结论基本相同，表明人参保护心肌细胞的另一可能机理为钙阻滞。 对病毒、化疗药物损伤的保护作用 郭祺23应用45Ca示踪发现，黄芪能够减轻柯萨其病毒B3(CB3)感染心肌细胞的继发性钙超载，并对细胞内病毒的RNA复制具有抑制作用。崔燕岗24研究证实：牛磺酸可保护CB3病毒感染的心肌细胞，其作用可能与Ca2+阻滞有关。近年来，中药复方制剂抗病毒感染也出现了可喜的苗头，崔新颖25发现心肌宁可明显抑制CB3吸附细胞表面，并直接灭活病毒，为临

11、床中药抗病毒性心肌损伤提供可靠的实验依据。 叶丹26在临床中观察到，生脉散可以减轻化疗病人的心肌受损，但在培养的心肌细胞实验中并未发现生脉散有直接心肌细胞保护作用。提示中药抗化疗损伤心肌作用，体液因素不可忽视。 参考文献 1张家新.玫瑰茄提取液对体外培养乳鼠心肌细胞损伤的保护作用J.第一军医大学学报.1992，(3)：243245 2陈兴坚.酸枣仁总甙对培养大鼠心肌细胞的保护作用J.中国药理学报，1990，(2)：153 3杜锐生.三七总皂甙对体外培养乳鼠心肌细胞缺血性损伤模型的保护作用J.中华儿科杂志，1992，(2)：744洪行球.何氏心悸方对培养心肌细胞缺糖缺氧性损伤的保护作用J.浙江中

12、医杂志，1992，(12)：562 5汪长华.大豆磷脂脂质体对培养心肌细胞缺氧缺糖性损伤的影响J.中国循环，1995，10(5)：293295 6王玮.精制血府胶囊刺激缺氧缺糖性心肌细胞RNA及蛋白质合 成J.北京中医药大学学报，1997，20(2)：1719 7王玮.精制血府胶囊对缺氧缺糖心肌细胞NO合成酶基因表达的影响J.中国中西医结合杂志.1996，16(11).670 8陈家畅.当归对体外培养心肌细胞缺糖缺氧性损伤保护作用的超微研究J.河南中医，1990，(3)：15 9陈家畅.黄芪对体外培养心肌细胞缺糖缺氧性损伤保护作用的超微研究J.河南中医，1990，(3)：5253 10陈家畅.

13、当归补血汤对培养乳鼠心肌细胞缺糖缺氧性损伤保护作用的超微结构研究J.中成药，1990，(2)：2526 11金花淑.熊胆对体外培养心肌细胞的保护作用J.延边医学院学报，1996，19(2)：83 12万华印.酸枣仁总皂甙抗心肌细胞缺氧复氧损伤作用及其机理J.中国病理生理杂志，1997，13(5)：522 13Laurse AVD,HoLaar N,Volk LJM.Release of alpha.hgdroxybutgtate from neonatal rat heart cell exposead to anoxio and reoxygenation:com parisonimpair

14、ment structure and funtion of damage cardroc cell cardivoas Res，1979，13:345 14万华印.酸枣仁总皂甙对缺氧再给氧心肌细胞的保护作用J.生物化学与生物物理进展，1995，22(6) 15杨世杰.西洋参茎叶皂甙对大鼠培养心肌细胞氧化损伤的保护作用J.中国中药杂志，1992，(9)：555 16钟国赣.用电子自旋共振法比较观察11种人参皂甙单体对培养心肌细胞自由基含量的影响J.生物化学与生物物理学报，1993，25(6)：667 17唐景荣.丹皮酚磺酸钠对钙反常培养乳鼠心肌的Ca2+内流的抑制作用J.药学学报，1991，(3)：161 18唐景荣.丹皮酚对钙反常培养心肌细胞的保护作用J.中国中药杂志，1991，(9)：557 19战术.刺五加叶皂甙单体Sb对培养大鼠心肌细胞动作电位的影响J.白求恩医科大学学报，1995,21(1)：17 20战术.刺五加叶皂甙单体SC1对培养大鼠心肌细胞自发性搏动及动作电位的影响J.白求恩医科大学学报，1995，21(6)：568 21齐晖.大豆皂甙单体I对培养心肌细胞自发性搏动与动作电位的影响J.中国应用生理学杂志，1993，9(4)：363 22钟国赣.人参二醇组及三醇组皂甙对大鼠心室肌细胞钙通道阻滞作用单通道分析J.中国药理学报，1994，15(2)：173