艾滋病实验室检测规范要求

1、艾滋病实验室检测规范要求及有关艾滋病实验室检测规范要求及有关艾滋病实验室检测方法的选择与质量控制艾滋病实验室检测方法的选择与质量控制 实验方法检测策略结果解释样本问题人类免疫缺陷病毒人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiency Virus, HIV)(HumanImmunodeficiency Virus, HIV)，属于逆转录病毒，属于逆转录病毒，RNARNA病毒，主要病毒，主要 破坏人体的免疫系统，主要分为破坏人体的免疫系统，主要分为HIV-1HIV-1和和HIV-2HIV-2两种型两种型 别。别。HIV的主要基因及其产物 （HIV标志物）标志物）HIVHIV病毒标志物产生

2、的动力学病毒标志物产生的动力学 病毒RNA P24抗原 AB感染时间标志物强度安全安全输血输血流行流行病学病学调查、调查、高危高危人群人群监测监测自愿自愿咨询咨询检测检测VCTVCTBCD临床临床诊断诊断A抗病毒治抗病毒治疗耐药性检测疗耐药性检测免疫功能免疫功能测定测定F抗病毒治抗病毒治疗后效果检测疗后效果检测EG实验室检测主要目的实验室检测主要目的HIVHIVHIV抗体检抗体检 测测HIV-1 P24抗原抗原检测检测HIV核酸检测核酸检测CD4+/CD8+T淋淋巴细胞检测巴细胞检测艾滋病适宜检测技艾滋病适宜检测技术术筛查试验 酶联免疫吸附试验 ELISA 快速检测 RT：金标、硒标等 化学发

3、光免疫分析（CLIA） 时间分辨荧光免疫（TRFIA） 电化学发光免疫分析（ECLIA)补充试验补充试验 免疫印迹法 WB:（Western Blot） 条带免疫试验RIBA/LIA核酸定性定量实验原理：实验原理：利用包被在固相载体表面的HIV抗原或抗体，与待检 血清及酶标记抗原结合形成抗原抗体复合物，加底物显色，用酶标仪（450/620nm双波长）测定光密度值。ELISA 是国际上应用最早是国际上应用最早!目前目前HIV临床最常用的初筛检测方法临床最常用的初筛检测方法!E固相抗原固相抗原标本（含抗标本（含抗 体）体） 酶标抗酶标抗原原底物底物EE实验原理：实验原理：利用包被在固相载体表面的H

4、IV抗原或抗体，与待检 血清及酶标记抗原结合形成抗原抗体复合物，加底物显色，用酶标仪（450/620nm双波长）测定光密度值。ELISA 是国际上应用最早是国际上应用最早!目前目前HIV临床最常用的初筛检测方法临床最常用的初筛检测方法!E固相抗原固相抗原标本（含抗标本（含抗 体）体） 酶标抗酶标抗原原底物底物EE4.2 HIV 抗体检测的要点4.2.1 根据目的选择检测方法及检测策略。4.2.2 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。4.2.3 结果判定以试剂盒说明书为标准。4.2.4 筛查试验有反应，须作补充试验。补充试验是通过检测样本中是否存在艾滋病病毒抗体、抗原或者核酸而确定艾滋病病毒感

5、染的检测方法。补充试验包括抗体确证试验（免疫印迹试验，条带/线性免疫试验，特定条件*下的替代检测，免疫层析或免疫渗滤试验）和核酸试验（核酸定性和核酸定量试验）。替代检测包括三种酶联免疫试验、三种快速试验或酶联免疫加快速试验。(替代确认策略，四川不用)* 特定条件：高流行地区（流行率大于5%）、高危人群（如男男同性恋，吸毒人群）、三种试剂均经过使用地区中心实验室评价。4.2.5 筛查试验无反应，不应做补充试验。4.2.6 对筛查及补充试验对象均应做好咨询工作。酶联免疫吸附试验（ ELISA）以珠海丽珠试剂为例实验的操作步骤（加样、温育、洗板、显色）必 须严格按照试剂说明书要求；实验必须设置4阳性

6、孔+3阴性孔+1外部对照孔， 其中HIV-1阳性2孔，HIV-2阳性2孔；实验审核发放的前提：必须是实验阳性、阴性质 控孔正确显色，外部对照结果在控。若外部对照失 控，应分析查找实验原因，做好失控处理记录，立 即重新实验，实验在控后才能审核结果。酶标仪、洗板机必须定时、规范的做好仪器维护 和保养；实验必须做好样本原始检测记录、复查记录登记， 患者信息需完善。阳性样本应立作危急值处理，电话告知患者和临床 医生，做好危急异常值记录和临床沟通记录；阳性样本除按要求送样到相关做补充实验， 实验室还应保存患者血清样本，并做好相应的保存记录。阳性样本初筛实验室结果报告模式“待确认”ELISA容易出的问题不

7、仔细看说明书，不能理解说明书含义：对照设孔错误*样本量错误CUT值计算错误结果是否有效等？3、快速检测方法（ RT）：金标、 硒标等优点：简便快速，一般可在1030分钟内得出结果。适用于应急检测、门诊急 诊检测。检测结果采用目测法，不需要特殊的仪 器设备。对检测人员技术要求不高，适 用于各级检测机构。做好实验记录（快速检测原始记录以能再现检测过程为主）1、全国艾滋病检测技术规范2015年修订版对快速检测质控专门有要求2、采用商用质控品或自制质控品。 （8NCU/ml？）3、可以由当地CDC不定期提供质控品全国艾滋病检测技术规范2015年修订版对快速检测质控专门有要求分为分为HIVHIV定性和定

8、性和HIVHIV定量检测两大类定量检测两大类：HIVHIV定性检测：定性检测：HIVHIV核酸核酸（RNARNA和前病毒和前病毒DNADNA）的）的检测检测HIVHIV定量检测：定量检测：又称又称HIVHIV病毒载量病毒载量检测（检测（ViralloadViralload），主要用于），主要用于抗病毒治疗患者的疗效评价，也抗病毒治疗患者的疗效评价，也可用于补充试验。可用于补充试验。艾滋病实验诊断方法艾滋病检测策略原则艾滋病检测策略原则首先应选择 最敏感的实 验第二次实验应 该采用更特异 的实验HIV检测顺序孕产妇产检时HIV初筛和复检流程孕产妇临产及分娩首次HIV检测 流程临产及分娩的孕产妇首

9、次检测，应同时应用两种不同的快速检测试剂 进行筛查，若两种试剂均无反应直接报告阴性，若两种均有反应或其 中一种有反应必须立即报告临床采取相应措施。 适用于未进行婴儿早期诊断检测或婴儿早期诊断检测结果为阴性的儿童。应于12、18月龄进行艾滋病抗体筛查 及必要的补充试验，以明确艾滋病感 染状态。 HIV感染产妇所生婴幼儿满12个月时应 进行第一次HIV抗体检测。同时使用两 种不同原理或不同厂家筛查试剂进行样本问题抗体筛查和确认，目前常用的是血清或血浆 不复合要求样本： 严重脂血 严重溶血 样本量严重不足 要有规范的送检单检测试剂的选择希望是敏感度和特异度均为100%，(任何检测都不可能绝对，所有方

10、法都存在缺陷和不足)检测结果是给临床医生提供诊断参考，而不是把实验结果作为唯一标准。临床医生不应该过度依赖检测结果，而应该结合临床进行综合分析。检测要点根据目的选择检测方法及策略严格遵守实验室标准操作程序（SOP）结果判定以试剂说明书为标准筛查试验有反应，须作补充试验筛查试验无反应，不应作补充试验对筛查及补充试验对象均应做咨询工作（接诊医生尤其作好工作）结果解释初筛实验中的假阳性：初筛实验中的假阳性：血液恶性病变自身免疫性疾病多发性胆汁型肝硬化酒精性肝炎疫苗接种（流感，乙肝）多发性骨髓瘤肾移植或慢性肾衰竭疟疾或丝虫病其他（试剂或操作原因、某些孕妇）结果解释初筛实验中的假阴性初筛实验中的假阴性窗

11、口期*抗体迟反应*免疫移植换血输血恶性肿瘤免疫功能丧失（B细胞功能缺损）其他（试剂或操作原因）结果解释确证试验的假阳性确证试验的假阳性样本搞错样本搞错实验过程中意外实验过程中意外。结果解释确证试验的假阴性确证试验的假阴性感染晚期，无法产生能检测限内的抗体感染晚期，无法产生能检测限内的抗体样本错误样本错误。实际上确证样都是筛查阳性才确认，所实际上确证样都是筛查阳性才确认，所以筛查的结果非常重要，记录也要能够以筛查的结果非常重要，记录也要能够准确无误。准确无误。低病毒检测值可能是核酸污染所致的结果，低病毒检测值可能是核酸污染所致的结果，阴阴性不能排除感染！性不能排除感染！核酸用于核酸用于HIV-1

12、HIV-1感染的诊断感染的诊断* *：检测值检测值5000 CPs/mL(5000 CPs/mL(或或IUs/mL)IUs/mL)，报告检测值；检测值，报告检测值；检测值 5000 CPs/mL(5000 CPs/mL(或或IUs/mL)IUs/mL)* *，尽快再次严格按核酸检测，尽快再次严格按核酸检测的要求采样检测，报告检测值，结果的要求采样检测，报告检测值，结果5000 CPs/mL(5000 CPs/mL(或或IUs/mL)IUs/mL)，报告检测值，结果仍，报告检测值，结果仍5000 CPs/mL5000 CPs/mL，则需充，则需充分结合流行病学史、临床病史、分结合流行病学史、临床病史、CD4+TCD4+T淋巴细胞计数和淋巴细胞计数和HIV-1HIV-1抗体随访检测结果等进行综合判断。抗体随访检测结果等进行综合判断。结果解释是否把核酸检测作为