蒽酮法测定可溶性糖方法

1、蒽酮法测定可溶性糖方法（一) 实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。（二）材料、仪器设备及设计1 材料12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。2 仪器设备分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。3 试剂 （1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于

2、棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。 （2）100 ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml浓硫酸，定容至刻度线。100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶 ，加蒸馏水定容。 （3） 浓硫酸（比重1.84） （三） 实验步骤1标准曲线的制作：按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在

3、630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。试剂管号01，23,45,67,89,10100µg.1-1蔗糖/ml00.20.40.60.81水/ml21.81.61.41.21蔗糖量/µg0204060801002 取样取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。取完后将样品放入-80冰箱中保存。3 可溶性糖的提取 将样品从冰箱中取出，称取0.200.30 g，记录重量，使用镊子将样品夹入刻度试管中，加入10 mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，

4、于沸水中提取30 min（提取2次），提取液过滤入25 ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。4 显色测定吸取样品提取液0.5 ml于20 ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5 ml，然后加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比（切勿忘掉对照）。在630 nm波长下测其光密度，测定样品的光密度。 5计算可溶性糖的含量，计算公式：   C × V总 × D 样品含糖量（%）= 

5、;  × 100%                          W × V测 × 106 其中：C在标准曲线上查出的糖含量（µg），  V总提取液总体积（ml），  V测测定时取用体积（ml）， 

6、; D稀释倍数，  W样品重量（g），  106样品重量单位由g换算成µg的倍数数据统计表海拔处理编号吸光度标准曲线斜率标准方程求得糖含量C（ug）提取液量V（ml）吸取样品液体积a（ml）稀释倍数组织重量（W）计算所得可溶性糖含量平均值2900CK1 1 11 1 21 1 31 1 4 PEG1 2 11 2 21 2 31 2 43000CK2 1 12 1 22 1 32 1 4 PEG2 2 12 2 22 2 32 2 43100CK3 1 13 1 23 1 33 1 4 PEG3 2 13 2 23 2 33 2 43258CK4 1 14 1 2

7、4 1 34 1 4 PEG4 2 14 2 24 2 34 2 43600CK5 1 15 1 25 1 35 1 4 PEG5 2 15 2 25 2 35 2 43600-1CK6 1 16 1 26 1 36 1 4 PEG6 2 16 2 26 2 36 2 43700CK7 1 17 1 27 1 37 1 4 PEG7 2 17 2 27 2 37 2 43800CK8 1 18 1 28 1 38 1 4 PEG8 2 18 2 28 2 38 2 43900CK9 1 19 1 29 1 39 1 4 PEG9 2 19 2 29 2 39 2 44000CK10 1 110 1 210 1 310 1 4 PEG10 2 110 2 210 2 310 2 4410