芦丁渗透泵片的体外释放度方法研究

1、芦丁渗透泵片的体外释放度方法研究    【摘要】   目的建立芦丁渗透泵片体外释放度测定方法。方法考察不同溶出方法、溶出介质和搅拌桨速度对芦丁渗透泵片体外释药的影响，用紫外分光光度法测定芦丁的含量，并用不同配比处方的芦丁渗透泵片制品进行体外释放度差异测定。结果溶出介质的pH值、溶出方法及搅拌桨转动速度均对芦丁渗透泵片体外释药行为无显著影响；确定了释放介质的种类与体积、溶出方法和搅拌桨转速，建立了芦丁渗透泵片体外释放度测定方法，并能测出不同配比处方的芦丁渗透泵片制品体外释放度差异。结论所建立的释放度测定方法能有效地对辅料进行筛选，可以用于处方优化

2、等。 【关键词】   芦丁； 渗透泵片； 体外释放度            药物体外释放度是指药物从缓释制剂、控释制剂、肠溶制剂及透皮贴剂等在规定条件下释放的速率和程度，是评价药物制剂质量的内在指标，是制剂质量控制的重要手段。芦丁为槲皮素的3-O-芸香糖苷，具有广泛的药理作用1,2，临床用于防止脑溢血、高血压病等心血管疾病。芦丁口服普通片剂存在给药频繁的问题，开发芦丁口服渗透泵片，可降低给药频率，提高患者用药的顺应性。芦丁渗透泵片的体外释放度方法的研究，是处方设计和优化的重要

3、保证。本实验对芦丁渗透泵片体外释放度方法进行研究。 1  仪器与试药     TU-1201紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；ZRS-8智能溶出试验仪(天津大学无线电厂)；Sartrius BP211S型 电子 天平(德国赛多司)；BUG25.12型超声清洗机；DSY-1-4孔电热恒温水浴锅(北京国华医疗器械厂)；DGG-9240型电热恒温鼓风干燥箱(上海森信实验仪器有限公司)。    芦丁原料药 （四川彭县植化厂，批号：002807）；芦丁对照品（芦丁含量91.7%， 中国 药品生物制品检定所，批号：10

4、0080-200306）；芦丁渗透泵片试制品（成都医学院药学实验室自制，批号：080427）；无水乙醇、氢氧化钠、盐酸、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾均为分析纯，水为纯化水。 2  方法与结果 2.1  芦丁含量测定方法的建立2.1.1  测定波长的选择精密称取经干燥器干燥至恒重的芦丁对照品适量数份，置容量瓶中，分别加入乙醇、纯水、0.1 mol/L HCl、pH 4.5磷酸盐缓冲液、pH 7.4磷酸盐缓冲液，超声使溶解并定容，制成浓度为12 mg?L-1的芦丁对照品溶液，以相应溶剂为空白，在200500 nm进行波谱扫描，结果芦丁紫外吸收光谱由两个主要吸收带组成，带在3

5、50370 nm之间，带在250275 nm之间，带吸收峰的强度大于带（见图1），本实验选用带吸收峰对应的吸收波长为测定波长。2.1.2  专属性研究分别取芦丁对照品、芦丁渗透泵片试制品、空白辅料适量，加乙醇超声处理15 min，滤过，续滤液定容至100 ml，摇匀，精密量取3 ml置于25 ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，以乙醇为空白，在200500 nm进行波谱扫描，同法分别考察以纯水、0.1 mol/L HCl、pH 4.5和pH 7.4磷酸盐缓冲液为溶剂时的专属性，结果空白辅料均没有干扰。2.1.3  标准曲线的制备精密称取经干燥器干燥至恒重的芦丁对照品约15 mg

6、，置100 ml量瓶中，加乙醇适量，振摇使溶解，加乙醇稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为153.8 mg?L-1的贮备液。精密量取贮备液适量，置于10 ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，得到3.076，6.152，12.304，18.456，24.608 mg?L-1标准系列溶液，在UV分光光度计258 nm处，测定吸收度，并将吸收度数据和标准品浓度进行回归处理，制备芦丁在水为溶剂中的标准曲线。同法分别以纯水、0.1 mol/L HCl、pH 4.5和pH 7.4磷酸盐缓冲液，制备相应标准系列溶液，在各自最大吸收波长处测定吸收度，并将吸收度数据和标准品浓度进行回归处理，制备芦丁在不同溶剂中的标准曲线

7、。（见表1）。结果表明，芦丁在3.07624.608 mg?L-1内浓度和吸收度呈良好的线性相关性。表1  不同介质中芦丁的标准曲线方程介质测定波长（略）2.1.4  精密度实验取芦丁对照品乙醇溶液（12.304 mg?L-1）和芦丁渗透泵片试制品供试液，重复测定吸光度5次，结果RSD均<2，表明精密度良好。2.1.5  稳定性实验取芦丁渗透泵片试制品供试液分别于0，30，60，90，120 min测定吸收度，结果所测时间点的吸光度的RSD为1.2，表明样品供试液在120 min内稳定。2.1.6  重复性实验取芦丁渗透泵片试制品20片，除去包衣，

8、研细，分别取5份样品，每份约0.12 g，精密称定，置于100 ml量瓶中，加入乙醇适量振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.8 ml，置于10 ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，在258 nm处测定吸收度。结果样品中芦丁的平均含量为124.7 mg/g，RSD=0.94。2.1.7  加样回收率实验取已知含量的芦丁渗透泵片试制品20片(49.88 mg/片)，除去包衣，研细，取约0.06 g，精密称定，置于100 ml量瓶中，加入乙醇适量振摇使溶解，分别加入芦丁对照品乙醇溶液（3.012 mg/ml）2，2.5，3 ml，加乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取0.8 

9、60;  ml，置于10 ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，在258 nm处测定吸收度，按下述公式 计算 回收率。（见表2）。结果表明平均回收率为101.2，RSD为1.41，加样回收良好。表2  回收率实验结果（略）    公式：回收率(%)=（测得量-制剂中含量）/加入对照品量×100%2.2  体外释放度方法的建立2.2.1  释放介质的研究    释放介质温度的选择：芦丁渗透泵片主要是在胃肠道吸收，本试验条件是模拟人体胃肠道环境，故溶出介质温度的选用人体的温度（37±0

10、.5）。    释放介质种类的选择：芦丁原料药在不同介质中稳定性的比较：将芦丁原料药15 mg，与不同介质0.1 mol/L HCl、纯水、pH 4.5 PBS、pH 7.4 PBS各100 ml配成溶液，室温放置，分别于第0，2，4，8，12 h取样稀释10倍后测定其吸收度，结果芦丁在上述4种介质中吸光度值的RSD分别为1.35，0.95，0.92，1.54，表明芦丁在上述4种介质中12 h内均稳定。 芦丁原料药在不同介质中溶解度的测定：取芦丁原料数份，分别置于50 ml具塞锥形瓶中，分别加入上述介质各25 ml，配成芦丁的饱和溶液，置于37恒温水浴中振荡，于设

11、定的取样点吸取上清液，经0.8 m微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作适当稀释后，以相应介质为空白对照，在相应的检测波长下测定吸收度，将吸收度值代入相应的标准曲线， 计算 药物在各种介质中的溶解度。测定结果见表3。根据芦丁在不同介质中溶解度的大小及释放度测定的漏槽条件，则纯水、0.1 mol/L HCl和pH 7.4 PBS均可作为释放介质。表3  芦丁在不同介质中的溶解度（略）    芦丁渗透泵片试制品在不同介质中释放度的测定:采用 中国 药典2005版部附录XC溶出度测定法中第一法4，分别以去空气的新鲜纯水、pH 7.4 PBS为溶出介质，用量为90

12、0 ml，以0.1 mol?L-1 HCl为溶出介质，用量为1 000 ml，温度为(37±0.5)。分别在第1，2，3，4，5，6，8，10，12 h取样2 ml（及时补充同温同体积的介质），在相应波长处测定吸收度，计算累积释药百分率，并绘制体外释药曲线。（见图2）。结果表明介质的pH值对芦丁渗透泵片体外释药行为无明显影响。    释放介质种类的确定：综上试验研究，结合中国药典2005版部附录XIX D 缓释、控释和迟释制剂指导原则，释放介质以去空气的新鲜纯水为最佳释放介质，故选择纯水为芦丁渗透泵片体外释放度研究的释放介质。  &#

13、160; 释放介质体积的选择:一般要求释放介质的量是溶解药物所需介质量的3倍以上3，根据本品每片芦丁的含量及芦丁在水中的溶解度，选择纯水体积为900 ml。2.2.2  溶出方法的选择比较中国药典2005版部附录X C溶出度测定法中的第1法和第2法4。转篮的转速为100 r/min，桨叶的转速为50 r/min；溶出介质为新鲜脱气蒸馏水，温度为(37±0.5)，体积为900 ml。分别在第1，2，3，4，5，6，8，10，12 h取样2 ml（及时补充同温同体积的水），在267 nm处测定吸收度，计算累积释药百分率，并绘制体外释药曲线。结果见图3。由图3可知，溶出方法对芦丁

14、渗透泵控释片试制品体外释放行为无显著影响，为便于观察，选择第2法桨法。2.2.3  转速的确定采用桨法，溶出介质为新鲜脱气蒸馏水，温度为（37±0.5），体积为900 ml，分别考察桨叶转速为50，100，150 r/min时对药物释放的影响。结果见图4。由图4可知搅拌桨的转速对芦丁渗透泵控释片试制品体外释放行为无显著影响，为接近胃肠蠕动情况，选择转速为50 r/min。2.2.4  释放度测定方法的确定采用中国药典2005版部附录X C溶出度测定法中第2法，以去空气的新鲜纯水为溶出介质，用量为900 ml，温度为(37±0.5)，转速为50 r/min

15、。分别在第1，2，3，4，5，6，8，10，12 h取样2 ml（及时补充同温同体积的水），以纯水作空白，在267 nm处测定吸收度，计算累积释药百分率。2.3  验证用上述建立的释放度测定方法测定不同配比片芯处方压制的芦丁渗透泵片样品体外释药行为差异。2.3.1  不同种类渗透活性物质的处方片芯处方配比（见表4）。按照“2.2.4”项下的方法测定体外释放度，并绘制释药曲线。（见图5）。结果表明，渗透活性物质种类不同，芦丁渗透泵片体外释药行为不同，以蔗糖组渗透活性最强。表4  不同种类渗透活性物质的处方配比（略）2.3.2  不同蔗糖用量的处方片芯处方配

16、比。（见表5）。按照“2.2.4”项下的方法测定体外释放度，并绘制释药曲线（见图6）。结果表明，蔗糖用量不同，芦丁渗透泵片体外释药行为不同，以蔗糖用量250 mg组渗透活性最强。表5  不同蔗糖用量的处方配比（略）2.3.3  阻滞剂羟丙甲纤维素（HPMC）阻滞效果的研究片芯处方配比。（见表6）。按照“2.2.4”项下的方法测定体外释放度，并绘制释药曲线。（见图7）。结果表明， HPMC K15的加入严重影响了芦丁渗透泵片的释放，不适合作本制剂的阻滞剂。表6  不同羟丙甲纤维素用量的处方配比（略） 3  讨论     芦丁在

17、37的纯水中溶解度为185.41 mg?L-1，为难溶性药物，遵照现有中国药典记载的释放度测定方法，在选择这种难溶性而剂量较大的药物制剂的释放介质体积时，若满足漏槽条件后，在其制剂释药前期存在药物溶液浓度低，吸光度在0.2以下，给含量分析带来难度的问题。针对此问题，在以后的研究中可有以下解决办法，一是采用能降低检测限的新的溶出度测定方法流通池法5，该法已被英国药典1993年版、美国药典第23版及日本药局方第12改正版第1增补版所收载6，也希望我们国家药典尽快收载该测定方法；二是采用灵敏度更高的含量检测方法，如HPLC法、LC-MS法等，可解决此问题。释放度系指药物从缓释制剂、控释制剂、肠溶制剂及透皮制剂等在规定条件下释放的速率和程度。对于难溶性药物芦丁渗透泵片，在测定其释放度过程中，发现药物从给药系统中释放出来后，并不象易溶性药物一样很快溶解到释放介质中，而是被释放药物的一部分仍保持固体状态；同时，我们在测芦丁的溶解度前，作其溶解平衡曲线时，也发现芦丁达到溶解平衡需要一定时间，有的长达12 h，即芦丁的溶解需要一定的时间，因此，作者认为对于难溶性药物的渗透泵制剂，按照现有的溶出度测定方法，每一取样时间点所测累积释放率并不是其真正累积释放率，并不能真正反映其释放的速率与程度，这可能也是难溶性药物缓、控释制剂研究