[免疫学]实验1

1、1.免疫血清的制备与应用（一）：家兔皮内注射羊红细胞悬液免疫血清的制备与应用（一）：家兔皮内注射羊红细胞悬液2.吞噬细胞吞噬功能检测吞噬细胞吞噬功能检测3.免疫器官的组织免疫器官的组织结构观察结构观察 分组、组长 课代表联系方式实验室规则实验室规则1上实验课时，穿好隔离衣。上实验课时，穿好隔离衣。2实验室内要保持肃静和秩序，不得谈笑或随处走动，实验室内要保持肃静和秩序，不得谈笑或随处走动，少说、少说、 多做、多想多做、多想。3实验室内禁止饮食和吸烟，关闭通讯工具。实验室内禁止饮食和吸烟，关闭通讯工具。4用过的实验材料，放于指定地点，不得随意抛置。用过的实验材料，放于指定地点，不得随意抛置。5注

2、意节约实验试剂，爱护实验器材（显微镜、组织切片的使注意节约实验试剂，爱护实验器材（显微镜、组织切片的使用）。用）。6易燃物品（如酒精等）不准接近火源。易燃物品（如酒精等）不准接近火源。7实验结束后，以小组为单位将实验台整理清洁，值日同学打实验结束后，以小组为单位将实验台整理清洁，值日同学打扫好室内卫生并检查水、电等开关是否关好，离开实验室要关扫好室内卫生并检查水、电等开关是否关好，离开实验室要关好门窗。好门窗。养成良好的习惯养成良好的习惯Part I 免疫血清的制备与应用免疫血清的制备与应用（一一）：）：免疫注射免疫注射【原理原理】 将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间将适当的抗原物质注

3、入动物体内，经过一定时间后，动物血清中可以产生大量的特异性抗体，这种含后，动物血清中可以产生大量的特异性抗体，这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清。有特异性抗体的血清称为免疫血清。 优质免疫血清的产生，主要取决于优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度抗原的纯度和和免疫原性免疫原性，以及，以及动物的应答能力动物的应答能力。此外，尚需考虑免。此外，尚需考虑免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因素。等因素。抗体（抗体（Ab、溶血素）、溶血素）浆细胞浆细胞B细胞细胞流程：流程：制备抗原制备抗原免疫动物免疫动物采血、分离血清采血、分离血清纯化

4、、鉴定纯化、鉴定分装、保存分装、保存【步骤步骤】1.备皮：家兔背部剪毛。备皮：家兔背部剪毛。2.消毒：碘酒、酒精。消毒：碘酒、酒精。3.抽取抽取0.51.0mL绵羊红细胞悬液。绵羊红细胞悬液。4.针头斜面向上，刺入针头斜面向上，刺入皮内皮内后平行进针使针头没入，推注后平行进针使针头没入，推注0.1ml羊红细胞悬液。羊红细胞悬液。56点注射。点注射。5.注射器以及消毒棉球弃掉，将家兔放回笼子。注射器以及消毒棉球弃掉，将家兔放回笼子。Part II 吞噬细胞吞噬功能检测吞噬细胞吞噬功能检测 【原理原理】： 机体内的吞噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性，受到趋化机体内的吞噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性，

5、受到趋化因子的趋化作用可以到达炎症部位，对细菌等异物进行吞噬和因子的趋化作用可以到达炎症部位，对细菌等异物进行吞噬和消化。消化。巨噬细胞：大吞噬细胞（长寿）巨噬细胞：大吞噬细胞（长寿）中性粒细胞：小吞噬细胞（短寿）中性粒细胞：小吞噬细胞（短寿）1.动物：小白鼠。动物：小白鼠。2.试验器材：剪刀、镊子、注射器、解剖板、瑞氏染试验器材：剪刀、镊子、注射器、解剖板、瑞氏染液、载玻片、显微镜等。液、载玻片、显微镜等。3.抗原：白葡菌菌液。抗原：白葡菌菌液。【材料材料】Mouse handling and manual restraintIntraperitoneal injection of mous

6、e 1. 取已注射过淀粉肉汤的小白鼠一只，取白葡菌菌液取已注射过淀粉肉汤的小白鼠一只，取白葡菌菌液1ml注注入其入其左下腹腔左下腹腔，轻揉腹部。，轻揉腹部。2. 30min后，将小白鼠拉颈处死，固定，打开腹腔，用玻片后，将小白鼠拉颈处死，固定，打开腹腔，用玻片在暴露的肠管上印片，自然晾干。在暴露的肠管上印片，自然晾干。3. 滴加滴加3滴瑞氏染液于印片上，滴瑞氏染液于印片上，20秒秒后加等量蒸馏水，混匀后加等量蒸馏水，混匀染色染色3min（一直保持湿润）。自来水冲洗，滤纸吸干。（一直保持湿润）。自来水冲洗，滤纸吸干。4. 显微镜下观察。显微镜下观察。5. 交回实验器材，最后将小鼠，玻片弃掉。交回

7、实验器材，最后将小鼠，玻片弃掉。【步骤步骤】吞噬有细菌的吞噬细胞吞噬有细菌的吞噬细胞吞噬细胞的百分率吞噬细胞的百分率100个吞噬细胞个吞噬细胞100吞噬指数吞噬指数100个吞噬细胞中所吞噬的细菌总数个吞噬细胞中所吞噬的细菌总数1002.计算：计算：1. 巨噬细胞的吞噬现象：油镜下可见大量巨噬细胞，胞浆巨噬细胞的吞噬现象：油镜下可见大量巨噬细胞，胞浆内数量不等的蓝色细菌。淀粉肉汤已经注射内数量不等的蓝色细菌。淀粉肉汤已经注射23天，游走至天，游走至肠管外的中性粒细胞因为寿命短多已死亡。肠管外的中性粒细胞因为寿命短多已死亡。【结果结果】1. 小鼠的抓法，拉颈处死手法，不能伤害动物；小鼠的抓法，拉颈

8、处死手法，不能伤害动物；2. 右侧腹腔注射易伤及肝脏；开腹时正中皮肤剪开，沿腹白线，右侧腹腔注射易伤及肝脏；开腹时正中皮肤剪开，沿腹白线，避免伤及血管避免伤及血管；印片时避免印到肝脏上；印片时避免印到肝脏上；3. 瑞氏染液与蒸馏水等量，染液完全覆盖印迹，并瑞氏染液与蒸馏水等量，染液完全覆盖印迹，并防止干片防止干片；4. 显微镜的使用。显微镜的使用。5. 用品放入指定地点用品放入指定地点，注意个人防护。，注意个人防护。【注意事项注意事项】瑞氏染色瑞氏染色 10 40瑞氏染色瑞氏染色 10 40Part 免疫器官的组织结构观察免疫器官的组织结构观察 免疫系统：机体执行免疫应答和免疫功能的重要系统。

9、免疫系统：机体执行免疫应答和免疫功能的重要系统。 免疫器官免疫器官 骨髓、骨髓、胸腺、淋巴结、脾脏胸腺、淋巴结、脾脏等；等； 免疫组织免疫组织 淋巴小结、弥散的淋巴组织等；淋巴小结、弥散的淋巴组织等； 免疫细胞免疫细胞 T细胞、细胞、B细胞、细胞、NK细胞等；细胞等； 免疫分子免疫分子 抗原、抗体、细胞因子等。抗原、抗体、细胞因子等。免疫器官免疫器官法氏囊（法氏囊（Bursa of Fabricius）免疫细胞免疫细胞1.胸腺（胸腺（Thymus）:位于胸腔纵隔上部、胸骨后方，分左右两叶，青春期后开始缓位于胸腔纵隔上部、胸骨后方，分左右两叶，青春期后开始缓慢退化。慢退化。胎儿胸腺胎儿胸腺成人胸

10、腺成人胸腺胸腺的结构胸腺小叶胸腺的结构胸腺小叶 皮质皮质 深皮质区和浅皮质区深皮质区和浅皮质区 胸腺细胞（未成熟胸腺细胞（未成熟T细胞）细胞） 8590% 胸腺上皮细胞（胸腺上皮细胞（TEC） 巨噬细胞（巨噬细胞（M ） 胸腺基质细胞（胸腺基质细胞（TSC） 树突状细胞（树突状细胞（DC） 髓质髓质 较成熟的胸腺细胞较成熟的胸腺细胞 胸腺上皮细胞（胸腺上皮细胞（TEC） 单核巨噬细胞单核巨噬细胞 树突状细胞（树突状细胞（DC） 胸腺小体（赫氏小体）胸腺小体（赫氏小体）胸腺基质细胞（胸腺基质细胞（TSC）胸腺的结构胸腺的结构HE 100胸腺小体的结构胸腺小体的结构HE 4002.淋巴结（淋巴结（

11、lymph node）皮质区：皮质区： 初级淋巴滤泡：初级淋巴滤泡： 浅皮质区：浅皮质区： 淋巴滤泡淋巴滤泡 静止静止B细胞细胞 （淋巴小结）（非胸腺依赖区）（淋巴小结）（非胸腺依赖区） 次级淋巴滤泡：次级淋巴滤泡： 生发中心，生发中心， 增殖分化增殖分化B细胞细胞 深皮质区：深皮质区： T细胞，巨噬细胞，内皮细胞；细胞，巨噬细胞，内皮细胞；（胸腺依赖区）（胸腺依赖区） 高内皮小静脉（高内皮小静脉（HEV），淋巴细胞再循环），淋巴细胞再循环髓质区：髓质区： 髓索：髓索：B细胞，浆细胞，部分细胞，浆细胞，部分T细胞和细胞和M 髓窦：大量髓窦：大量M 淋巴结的结构淋巴结的结构深（副）皮质区深（副）

12、皮质区淋巴小结淋巴小结被膜下淋巴窦被膜下淋巴窦被膜被膜淋巴结的结构淋巴结的结构HE染色染色 100小结帽小结帽：小淋巴：小淋巴细胞为主细胞为主明区明区：中淋巴：中淋巴细胞为主细胞为主暗区暗区：大淋巴：大淋巴细胞为主细胞为主淋巴小结的结构淋巴小结的结构-生发中心生发中心淋巴结髓质的结构淋巴结髓质的结构髓索髓索髓窦髓窦淋巴结深皮质区的高内皮小静脉模式图淋巴结深皮质区的高内皮小静脉模式图3.脾的基本结构脾的基本结构脾脏的基本结构脾脏的基本结构:白髓白髓脾小体（脾小体（B细胞区）细胞区）中央动脉与动脉周围淋巴鞘中央动脉与动脉周围淋巴鞘红髓红髓边缘区（边缘区（T、B、M ）脾血窦脾血窦脾索（脾索（B，浆

13、细胞，浆细胞， M ，DC）脾脏的基本结构脾脏的基本结构:红髓红髓试验报告：试验报告：1.免疫血清的制备与应用：免疫血清制备的原理、注射步骤。免疫血清的制备与应用：免疫血清制备的原理、注射步骤。2.吞噬细胞吞噬功能检测的原理、步骤及镜下观察结果吞噬细胞吞噬功能检测的原理、步骤及镜下观察结果（红蓝铅笔画图）。（红蓝铅笔画图）。 （标注典型结构（标注典型结构 瑞氏染色瑞氏染色 观察倍数观察倍数1000/400 ） 3.绘制免疫器官（脾脏，胸腺，淋巴结）的镜下观察结果绘制免疫器官（脾脏，胸腺，淋巴结）的镜下观察结果 （红蓝铅笔画图）。（标注典型结构（红蓝铅笔画图）。（标注典型结构 HE染色染色 观察倍数观察倍数100）值日：值日： 请班干部排好值日生，清理实验桌面，清理显微镜，关掉显请班干部排好值日生，清理实验桌面，清理显微镜，关掉显微镜