层析和膜技术在生物制药中的应用 ppt课件

1、层析技术在 生物制药中的应用一一. 离子交换层析技术离子交换层析技术l定义：利用溶液中各种带电颗粒与离子交定义：利用溶液中各种带电颗粒与离子交换剂之间结合力的差异进行物质分离的操换剂之间结合力的差异进行物质分离的操作称离子交换法。作称离子交换法。l离子交换剂由惰性的不溶性载体，功能基离子交换剂由惰性的不溶性载体，功能基团和平衡离子组成。团和平衡离子组成。l平衡离子带正电荷的为阳离子交换剂，平平衡离子带正电荷的为阳离子交换剂，平衡离子带负电荷的为阴离子交换剂，可见衡离子带负电荷的为阴离子交换剂，可见离子交换剂是一类具有活性基团的荷电固离子交换剂是一类具有活性基团的荷电固相颗粒。相颗粒。离子交换层

2、析技术离子交换层析技术RSO3X+Y+= RSO3Y+X+离子交换反应：离子交换反应：离子交换剂与交换离子间的作用是由静电引力而产生的，离子交换剂与交换离子间的作用是由静电引力而产生的，是一个可逆的反应过程，当这个反应达到动态平衡时，其是一个可逆的反应过程，当这个反应达到动态平衡时，其平衡点随着平衡点随着pHpH、温度、溶剂的组成及交换剂本身性质的改、温度、溶剂的组成及交换剂本身性质的改变而变化。例如，向平衡体系中加入过量的变而变化。例如，向平衡体系中加入过量的X+X+离子，反应离子，反应倾向于生成倾向于生成R-SO3-X+R-SO3-X+。离子交换层析技术离子交换层析技术 由于待分离的溶质分

3、子带有不同性质的由于待分离的溶质分子带有不同性质的电荷和不同电荷量，因而在作为固定相的电荷和不同电荷量，因而在作为固定相的离子交换剂和流动相的洗脱液之间发生可离子交换剂和流动相的洗脱液之间发生可逆交换作用，并通过调节逆交换作用，并通过调节pH值、或改变同值、或改变同性离子的浓度等方法，使溶质分子移动的性离子的浓度等方法，使溶质分子移动的速度发生变化，从而达到分离的目的。速度发生变化，从而达到分离的目的。 离子交换层析的应用如庆大霉素，小诺霉素的提炼，应用了离子交换技术。如庆大霉素，小诺霉素的提炼，应用了离子交换技术。 H H+ + 中中和和 7 73 32 2树树脂脂 庆庆大大发发酵酵液液 中

4、中性性S So ol lu u 饱饱和和树树脂脂 静静态态吸吸附附 洗洗涤涤、洗洗脱脱 洗洗脱脱液液 进进一一步步处处理理 庆大霉素的提炼庆大霉素的提炼l 酸化的目的在于将庆大霉素从菌丝体中释放出来，然后为酸化的目的在于将庆大霉素从菌丝体中释放出来，然后为了便于离子交换，将酸化液中和，再于中性溶液中投入了便于离子交换，将酸化液中和，再于中性溶液中投入732732强强酸性阳离子树脂。因为庆大霉素属于碱性抗生素，系有机碱，酸性阳离子树脂。因为庆大霉素属于碱性抗生素，系有机碱，能与多种酸成盐，在水溶液中以离子状态能与多种酸成盐，在水溶液中以离子状态G+G+存在，可以为阳存在，可以为阳离子树脂所吸附，

5、对吸附了庆大霉素的离子树脂所吸附，对吸附了庆大霉素的732732树脂进行洗涤，先树脂进行洗涤，先用稀酸洗至无用稀酸洗至无Ca2+Ca2+、Mg2+Mg2+，接着用无盐水洗至无，接着用无盐水洗至无Cl-Cl-，然后用，然后用稀氨洗去小组分杂质，最后用浓氨进行洗脱，洗脱液解吸稀氨洗去小组分杂质，最后用浓氨进行洗脱，洗脱液解吸液用液用711711阴离子树脂进行脱色，然后经浓缩，转盐、活性炭阴离子树脂进行脱色，然后经浓缩，转盐、活性炭脱色，喷雾干燥即得庆大霉素成品。脱色，喷雾干燥即得庆大霉素成品。l 离子交换层析的应用 粗卵蛋白的分级分离粗卵蛋白的分级分离 卵蛋白中：主要有卵清蛋卵蛋白中：主要有卵清蛋

6、白白54-57%（pI4.5)；蓝；蓝清蛋白清蛋白12-15%（pI6.1)；卵粘蛋白卵粘蛋白3-4%(pI4.7)。 卵白过滤，用卵白过滤，用polybuffer74稀释，离心，稀释，离心，上上PBE94柱，以柱，以0.025mol/L咪唑咪唑-HCl (pH7.2)平衡，用平衡，用1:10polybuffer74洗脱，洗脱，分辨率良好。分辨率良好。二二. 凝胶层析凝胶层析l凝胶层析，是指样品混合物通过一定孔经的凝胶固凝胶层析，是指样品混合物通过一定孔经的凝胶固定相，由于流经体积的差异，使不同分子量的组分定相，由于流经体积的差异，使不同分子量的组分得以分离的一种分离技术。得以分离的一种分离技

7、术。l因整个层析过程与过滤相似也称凝胶过滤。因整个层析过程与过滤相似也称凝胶过滤。l又由于物质在分离过程中的阻滞减速现象，也称排又由于物质在分离过程中的阻滞减速现象，也称排阻层析。或称凝胶扩散层析。阻层析。或称凝胶扩散层析。l凝胶的每个颗粒的细微结构如同一个筛子，小的分凝胶的每个颗粒的细微结构如同一个筛子，小的分子可以进入凝胶网孔，大的分子被排阻于凝胶颗粒子可以进入凝胶网孔，大的分子被排阻于凝胶颗粒之外，因而也称分子筛层析。之外，因而也称分子筛层析。凝胶层析分离原理凝胶层析分离原理 分子筛理论最容易理解，当含分子筛理论最容易理解，当含有大小分子的混合物品流给凝有大小分子的混合物品流给凝胶层析柱

8、时，各组分随洗脱液胶层析柱时，各组分随洗脱液的流动而移动的流动而移动. 大分子进入不了大分子进入不了颗粒内部，最先流出；中分子颗粒内部，最先流出；中分子部分地进入颗粒，流出速度中部分地进入颗粒，流出速度中等；小分子进入所有颗粒内部，等；小分子进入所有颗粒内部，移动速度慢，最后流出。整个移动速度慢，最后流出。整个样品接分子量大小顺序先后流样品接分子量大小顺序先后流出层析柱，从而达到分离。出层析柱，从而达到分离。凝胶层析分离原理凝胶层析分离原理凝凝胶胶层层析析的的总总床床体体积积（V V t） ，可可分分为为三三个个组组分分，即即 hdVVVVgiot24 V Vo o：凝凝胶胶颗颗粒粒之之间间的

9、的液液相相体体积积，称称外外水水体体积积； V Vi i：凝凝胶胶颗颗粒粒内内部部所所含含的的液液相相体体积积，称称内内水水体体积积； V Vg g：凝凝胶胶颗颗粒粒本本身身的的体体积积； d d：层层析析柱柱直直径径； h h：凝凝胶胶柱柱床床之之高高。 凝胶层析分离原理凝胶层析分离原理l当将含有三种不同分子量物质的混合样品用某种规格的凝当将含有三种不同分子量物质的混合样品用某种规格的凝胶柱进行分离，然后以洗脱体积为横坐标，各物质浓度为胶柱进行分离，然后以洗脱体积为横坐标，各物质浓度为纵座标，即得下图的洗脱曲线。纵座标，即得下图的洗脱曲线。l 凝胶层析的应用凝胶层析的应用l凝胶层析目的或称分

10、离形式一般有二种：分凝胶层析目的或称分离形式一般有二种：分组分离和分级分离。组分离和分级分离。l分组分离亦称类分离，其目的是将分子量极为悬分组分离亦称类分离，其目的是将分子量极为悬殊的两类物质分开，如蛋白质与盐的分离殊的两类物质分开，如蛋白质与盐的分离, ,常用常用Sephadex G-25Sephadex G-25，因为其分离范围是，因为其分离范围是1,000-5,0001,000-5,000，被分离的两组物质的分子量正好落在分离范围的被分离的两组物质的分子量正好落在分离范围的两侧，大分子组为全排阻，而小分子组为全渗入，两侧，大分子组为全排阻，而小分子组为全渗入，其其KdKd值的差可达最大值

11、值的差可达最大值1 1。凝胶层析的应用l分级分离，将分子量相差不很大的大分子物质加分级分离，将分子量相差不很大的大分子物质加以分离，如分离血清球蛋白与白蛋白。以分离，如分离血清球蛋白与白蛋白。l对于这种分子量相近的物质的分离常常选用排阻对于这种分子量相近的物质的分离常常选用排阻限略大于样品中最高分子量的凝胶，即限略大于样品中最高分子量的凝胶，即OKd1OKd1。l如果样品中含有如果样品中含有3 3个组分的话，最好一个接近全排个组分的话，最好一个接近全排阻，另一个接近全渗入，第三个为部分渗入，且阻，另一个接近全渗入，第三个为部分渗入，且分子量大于渗入限的分子量大于渗入限的3 3倍，并小于排阻限的

12、倍，并小于排阻限的1/31/3。凝胶层析的应用l脱盐l浓缩l去热原l分子量测定l纯化凝胶层析的应用:脱盐和浓缩l脱盐和浓缩属类分离，选择凝胶使大分子组为全排阻，小脱盐和浓缩属类分离，选择凝胶使大分子组为全排阻，小分子组为全渗入分子组为全渗入Kd=1Kd=1）。）。l脱盐用的凝胶多用大粒度的、高交联度的凝胶。脱盐用的凝胶多用大粒度的、高交联度的凝胶。l 交联度大，凝胶颗粒的强度较好；交联度大，凝胶颗粒的强度较好；l 粒度大，柱层操作比较便利，流速也高。粒度大，柱层操作比较便利，流速也高。l洗脱多为易挥发盐的缓冲溶液；洗脱多为易挥发盐的缓冲溶液；l 用水洗脱时，有些蛋白质脱盐后溶解度下降，造成被用

13、水洗脱时，有些蛋白质脱盐后溶解度下降，造成被凝胶粒吸附甚至以沉淀状态析出。凝胶粒吸附甚至以沉淀状态析出。l样品体积最好不大于内水体积的三分之一，以便得到理想样品体积最好不大于内水体积的三分之一，以便得到理想的脱盐效果。的脱盐效果。凝胶层析的应用凝胶层析的应用: :脱盐和浓缩脱盐和浓缩方法：方法：l柱层析柱层析l包埋法包埋法 样品置于透析袋中埋入干胶颗粒样品置于透析袋中埋入干胶颗粒堆内，经过相当时间后，样品中的盐与水堆内，经过相当时间后，样品中的盐与水分一道为干胶所吸收。分一道为干胶所吸收。l直接投入法直接投入法 即将一定量的干胶投入盛样即将一定量的干胶投入盛样品容器或直接使样品溶液从干胶柱上流

14、下。品容器或直接使样品溶液从干胶柱上流下。 凝胶层析的应用凝胶层析的应用: :分离纯化分离纯化用用SephadexG-50纯化牛、猪胰岛素纯化牛、猪胰岛素:用用SephadexG-25SephadexG-25分离氨基酸混合物分离氨基酸混合物用用SephadexG-25SephadexG-25分离氨基酸混合物分离氨基酸混合物l用葡聚糖凝胶分离多组分混合物，除利用分子筛效应外，用葡聚糖凝胶分离多组分混合物，除利用分子筛效应外，还可利用某些物质与凝胶具有程度不等的弱吸附作用。如还可利用某些物质与凝胶具有程度不等的弱吸附作用。如图图7.317.31，用，用SephadexG-25SephadexG-2

15、5分离氨基酸混合物，各个氨基酸分离氨基酸混合物，各个氨基酸流出的先后顺序并不是按分子量大小的顺序，而是按照吸流出的先后顺序并不是按分子量大小的顺序，而是按照吸附作用强弱的顺序，其中二个酸性氨基酸，谷氨酸附作用强弱的顺序，其中二个酸性氨基酸，谷氨酸pI3.22pI3.22），甘氨酸），甘氨酸pI5.97pI5.97先被流出，而先被流出，而pIpI分别为分别为5.485.48和和5.665.66的苯丙氨酸，酪氨酸，由于是苯环化合物，存的苯丙氨酸，酪氨酸，由于是苯环化合物，存在弱吸附故后被流出，而色氨酸是杂环合物，碱性氨基酸，在弱吸附故后被流出，而色氨酸是杂环合物，碱性氨基酸，吸附最强，所以最后流出

16、吸附最强，所以最后流出. .凝胶层析的应用凝胶层析的应用l分子量测定分子量测定l测定依据：不同分子量的物质，只要在凝胶的分测定依据：不同分子量的物质，只要在凝胶的分离范围内渗入限与排阻限之间），其洗脱体积离范围内渗入限与排阻限之间），其洗脱体积VeVe及分配系数及分配系数KdKd值随分子量增加而下降。值随分子量增加而下降。l待测物质洗脱体积与分子量关系符合下式：待测物质洗脱体积与分子量关系符合下式： Ve=-KlogM+CVe=-KlogM+Cl K K、C C 是常数，为直线方程的斜率和外推截距。是常数，为直线方程的斜率和外推截距。l 同时同时 Kav=-KlogM +CKav=-KlogM

17、 +C凝胶层析的应用凝胶层析的应用l测定分子量方法：标准曲线法。测定分子量方法：标准曲线法。l先以先以3 3个以上的已知分子量的标准蛋白有标准蛋个以上的已知分子量的标准蛋白有标准蛋白商品出售过柱，测取各目白商品出售过柱，测取各目VeVe值，以值，以VeVe做纵坐做纵坐标，标，logM logM 做横坐标制作标准曲线，之后在同一测做横坐标制作标准曲线，之后在同一测定系统测取未知物质的定系统测取未知物质的VeVe值，即可由标准曲线求值，即可由标准曲线求得分子量。得分子量。l留意：测得的分子量是近似分子量，误差在留意：测得的分子量是近似分子量，误差在10%10%。l该法操作简便，需要样品量较少，实用

18、价值较大。该法操作简便，需要样品量较少，实用价值较大。凝胶层析的应用凝胶层析的应用: :分子量测定分子量测定三三. 亲和层析亲和层析l人们发现生物体中许多高分子化合物具有和某些相对应的人们发现生物体中许多高分子化合物具有和某些相对应的专一分子可逆结合的特性，专一分子可逆结合的特性，l例如例如 酶与底物、抗原与抗体、激素与受体、核糖核酸与酶与底物、抗原与抗体、激素与受体、核糖核酸与其互补的脱氧核糖核酸，多糖与蛋白复合体等，都具有这其互补的脱氧核糖核酸，多糖与蛋白复合体等，都具有这种特性。种特性。l 生物分子间的这种结合能力称为亲和力，根据生物分子生物分子间的这种结合能力称为亲和力，根据生物分子特

19、异亲和力而设计的层析技术称为亲和层析，在亲和层析特异亲和力而设计的层析技术称为亲和层析，在亲和层析中起可逆结合的特异性物质称为配基，与配基结合的层析中起可逆结合的特异性物质称为配基，与配基结合的层析介质称为载体。介质称为载体。亲和层析的设计原理和过程亲和层析的设计原理和过程:3.亲和层析的应用l由于亲和层析技术具有简便，快速、专一和高效由于亲和层析技术具有简便，快速、专一和高效等特点，应用十分广泛，已普及到生命科学的各等特点，应用十分广泛，已普及到生命科学的各个领域。个领域。l应用范围如下：应用范围如下：l（1 1提取、分离纯化、浓缩各类生物分子；提取、分离纯化、浓缩各类生物分子；l（2 2分

20、离纯化各种功能细胞，细胞器，膜片段和分离纯化各种功能细胞，细胞器，膜片段和病毒颗粒；病毒颗粒；l（3 3用于各种生化成分的分析检测；用于各种生化成分的分析检测；l（4 4其他；其他；3.亲和层析的应用l最大优点：利用它从粗提液中经过一次简最大优点：利用它从粗提液中经过一次简单的处理便可得到所需的高纯度活性物质。单的处理便可得到所需的高纯度活性物质。l 例如分离胰岛素受体时，把胰岛素作为配例如分离胰岛素受体时，把胰岛素作为配基，偶联于琼脂载体上，经亲和层析，从基，偶联于琼脂载体上，经亲和层析，从肝脏匀浆中提取胰岛素受体，纯化达肝脏匀浆中提取胰岛素受体，纯化达80008000倍。倍。金属螯合亲和层

21、析金属螯合亲和层析l原理：蛋白质分子能够与金属离子发生亲和反应，原理：蛋白质分子能够与金属离子发生亲和反应，并与之结合，可用于吸附纯化蛋白质。蛋白质表面并与之结合，可用于吸附纯化蛋白质。蛋白质表面的氨基酸残基，如组氨酸的咪唑基团、半胱氨酸的的氨基酸残基，如组氨酸的咪唑基团、半胱氨酸的巯基、色氨酸的吲哚基团，可提供电子，与金属离巯基、色氨酸的吲哚基团，可提供电子，与金属离子结合，从而发生亲和层析。配基与生物大分子的子结合，从而发生亲和层析。配基与生物大分子的结合机理包括范德华力、疏水键、静电以及金属螯结合机理包括范德华力、疏水键、静电以及金属螯合作用。合作用。 金属螯合亲和层析柱的制备：金属螯合

22、亲和层析柱的制备： 将环氧活化型将环氧活化型Sepharose 6BSepharose 6B与金属螯合剂如亚氨与金属螯合剂如亚氨二醋酸偶联成配基，再用金属离子溶液处理如二醋酸偶联成配基，再用金属离子溶液处理如Zn2+Zn2+、Cu2+Cu2+、Co2+Co2+、Ni2+Ni2+、Cd2+Cd2+），即成。），即成。 金属螯合亲和层析金属螯合亲和层析l上样：柱子经平衡后，可将含有生物活性物上样：柱子经平衡后，可将含有生物活性物质的样品上柱，与固定化的金属配基复合物质的样品上柱，与固定化的金属配基复合物有亲和力的分子都将被滞留，其余则流出柱有亲和力的分子都将被滞留，其余则流出柱外。外。l 洗脱：可

23、通过改变盐的浓度、改变洗脱：可通过改变盐的浓度、改变pHpH、或、或由竞争性的试剂将蛋白质置换下来，这些方由竞争性的试剂将蛋白质置换下来，这些方式的机理都是通过降低固定化金属离子和蛋式的机理都是通过降低固定化金属离子和蛋白质之间的亲和常数。白质之间的亲和常数。金属螯合亲和层析的应用金属螯合亲和层析的应用: 利用含汞树脂分离谷胱甘肽利用含汞树脂分离谷胱甘肽l 谷胱甘肽中的半胱氨酸含有巯基，巯基化合物与汞具有很强的化学亲和作用，因此用含汞树脂提取含巯基化合物能取得很好的效果。l谷胱甘肽多从酵母中提取，也可从啤酒生产的废酵母中提取。酵母的提取液中除了含谷胱甘肽外，还含有其他含巯基的氨基酸和短肽，含汞

24、树脂对这些物质也有一定的吸附。可通过调节酵母提取液的pH值，改变树脂对各种杂质成分的吸附力，以达到分离的目的。有机染料亲和层析有机染料亲和层析l基本原理：一些有机染料如蒽醌化合物和偶氮化基本原理：一些有机染料如蒽醌化合物和偶氮化合物具有类似于合物具有类似于NAD+NAD+的结构，因此一些需要核苷的结构，因此一些需要核苷酸类物质为辅酶的酶，对这些染料有一定的亲和酸类物质为辅酶的酶，对这些染料有一定的亲和力，如果这些染料作为配基共价偶联到纤维素或力，如果这些染料作为配基共价偶联到纤维素或琼脂糖等多糖载体上，就能制得染料亲和层析柱。琼脂糖等多糖载体上，就能制得染料亲和层析柱。常用的有机染料有二羟偶氮

25、复合物。常用的有机染料有二羟偶氮复合物。l有机染料亲和层析已成功地分离纯化了多种酶，有机染料亲和层析已成功地分离纯化了多种酶，以及应用于白蛋白、脂蛋白和干扰素等的分离。以及应用于白蛋白、脂蛋白和干扰素等的分离。有机染料亲和层析应用：有机染料亲和层析应用： 苯丙氨酸脱氢酶的纯化苯丙氨酸脱氢酶的纯化 苯丙氨酸脱氢酶的纯化应用了有机染料亲苯丙氨酸脱氢酶的纯化应用了有机染料亲和层析法。将一种模拟生物的染料配基和层析法。将一种模拟生物的染料配基商品名：商品名：Procion Red HE-3B）,结合在结合在Sepharose CL-4B上。上。Procion Red HE-3B与依靠与依靠NAD/NA

26、DH作辅酶的酶有特异性作辅酶的酶有特异性的结合，因而在分离这种类型的酶时，应的结合，因而在分离这种类型的酶时，应用很广。用很广。有机染料亲和层析应用：有机染料亲和层析应用： 苯丙氨酸脱氢酶的纯化苯丙氨酸脱氢酶的纯化l将含有苯丙氨酸脱氢酶的酶提取液上柱，亲和柱将含有苯丙氨酸脱氢酶的酶提取液上柱，亲和柱专一性地吸附苯丙氨酸脱氢酶。然后，用平衡缓专一性地吸附苯丙氨酸脱氢酶。然后，用平衡缓冲液洗去杂蛋白，再用冲液洗去杂蛋白，再用1mmol/L1mmol/L的的 NADHNADH配于平配于平衡缓冲液中将酶洗脱下来。经过这种方法纯化衡缓冲液中将酶洗脱下来。经过这种方法纯化的酶，纯度达到单一区带，达到了诊断

27、用酶制剂的酶，纯度达到单一区带，达到了诊断用酶制剂的纯度要求。的纯度要求。l苯丙氨酸脱氢酶可作为诊断试剂，用于测定和监苯丙氨酸脱氢酶可作为诊断试剂，用于测定和监测遗传性代谢疾病苯丙酮酸尿。作为诊断用酶制测遗传性代谢疾病苯丙酮酸尿。作为诊断用酶制剂的市场很大。剂的市场很大。 四四. .膜分离技术膜分离技术透析技术透析技术 透析是应用得最早的膜分离透析是应用得最早的膜分离技术。技术。 透析法的特点透析法的特点, , 是用于分是用于分离两类分子量差别较大的物质。离两类分子量差别较大的物质。即将分子量即将分子量103103级以上的大分级以上的大分子物质与分子量在子物质与分子量在103103级以下级以下

28、的小分子物质分离，属于分子的小分子物质分离，属于分子水平的分离，无相的改变。透水平的分离，无相的改变。透析法都是在常压下依靠小分子析法都是在常压下依靠小分子物质的扩散运动来达到分离浓物质的扩散运动来达到分离浓缩目的。此点不同于超滤。缩目的。此点不同于超滤。透析技术透析技术l优点：简便，不需要复杂装置。优点：简便，不需要复杂装置。l缺陷：速度慢、处理量小。缺陷：速度慢、处理量小。l用途：用途：l（1 1透析法多用于去除大分子溶液中的小分子物透析法多用于去除大分子溶液中的小分子物质，称为脱盐；质，称为脱盐；l（2 2常用来对溶液中小分子成分进行缓慢的改变。常用来对溶液中小分子成分进行缓慢的改变。即

29、所谓的透析平衡，如浓缩大分子、透析结晶等。即所谓的透析平衡，如浓缩大分子、透析结晶等。旋转透析装置旋转透析装置连续透析器连续透析器l平面透析器平面透析器l 用塑料框把透析管张开成为很薄的平面用塑料框把透析管张开成为很薄的平面透析管，使透析面积增大，提高了效率。透析管，使透析面积增大，提高了效率。l 浅流透析器浅流透析器l 可兼用于透析和超滤。可兼用于透析和超滤。超滤技术超滤技术l超滤技术是近几十年迅速发展起来的一项分子级超滤技术是近几十年迅速发展起来的一项分子级薄膜分离手段，它以特殊的超滤膜为分离介质，薄膜分离手段，它以特殊的超滤膜为分离介质，以膜两侧的压力差为推动力将不同分子量的物质以膜两侧

30、的压力差为推动力将不同分子量的物质进行选择性分离。进行选择性分离。l 超滤膜的最小截留分子量为超滤膜的最小截留分子量为500500道尔顿，在生物道尔顿，在生物制药中可用来分离蛋白质、酶、核酸、多糖、多制药中可用来分离蛋白质、酶、核酸、多糖、多肽、抗生素、病毒等。肽、抗生素、病毒等。超滤技术超滤技术l优点：没有相转移，无需添加任何化学物质，可优点：没有相转移，无需添加任何化学物质，可以在低温下操作，过滤速度较快，便于做无菌处以在低温下操作，过滤速度较快，便于做无菌处理，分离操作简便，避免生物活性物质的活力损理，分离操作简便，避免生物活性物质的活力损失和变性。失和变性。l用途：用途：大分子物质的脱

31、盐和浓缩；大分子物质的脱盐和浓缩；l 小分子物质的纯化；小分子物质的纯化；l 大分子物质的分级分离；大分子物质的分级分离；l 生化制剂或其他制剂的去热原处理。生化制剂或其他制剂的去热原处理。超滤技术的应用超滤技术的应用l浓缩和脱盐浓缩和脱盐l 优点是不消耗试剂，无相转移，可在低温下优点是不消耗试剂，无相转移，可在低温下进行，浓缩的同时还可脱掉盐和其他小分子杂质。进行，浓缩的同时还可脱掉盐和其他小分子杂质。l脱盐方法：脱盐方法：l （1 1稀释超滤法稀释超滤法l 盐离子等小分子杂质随溶剂水不断透过盐离子等小分子杂质随溶剂水不断透过滤膜而去，当浓缩到一定浓度时再加入溶剂至原滤膜而去，当浓缩到一定浓

32、度时再加入溶剂至原体积，如此反复多次，绝大部分小分子物质可被体积，如此反复多次，绝大部分小分子物质可被除去。除去。l （2 2渗滤法脱盐渗滤法脱盐 原理与稀释法相同。原理与稀释法相同。 超滤的应用l分级分离与纯化分级分离与纯化l 如右图所示，按分子如右图所示，按分子量截留值由大而小串联几量截留值由大而小串联几个超滤器，各自保持一定个超滤器，各自保持一定体积，用体积，用10-2010-20倍体积的倍体积的缓冲液逐级洗下，不同分缓冲液逐级洗下，不同分子量物质相应下移，在各子量物质相应下移，在各滤器中获得不同分子量范滤器中获得不同分子量范围的组分，从而使大分子围的组分，从而使大分子量得到分离和纯化，同时量得到分离和纯化，同时也进行了浓缩。也进行了浓缩。超滤的应用超滤的应用l除菌除菌 超滤是一种很好的冷灭菌法，适合超滤是一种很好的冷灭菌法，适合于不能高压消毒灭菌的生化产品；于不能高压消毒灭菌的生化产品；l去热原去热原 适合一些分子量较小的生物药物适合一些分子量较小的生物药物的去热