反相高效液相色谱法测定保健食品中他达那非

1、反相高效液相色谱法测定保健食品中他达那非92中国卫生检验杂志2007年1月第l7卷第1期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,Jan2007;Vol17NoI【化学测定方法】反相高效液相色谱法测定保健食品中他达那非沈志武,王碾,唐宏兵(江苏省常州市疾病预防控制中心,江苏常州213003)摘要目的:建立一种保健食品中他达那非的反相液相色谱测定方法.方法:采用ODS色谱柱,0.02moVL-7,胺:甲醇:乙腈(45:33:22)为流动相,流速1.0ml/min,二极管阵列检测器,检测波长217.4nni,标准曲线计算他达那非含量.结果:该方法他达那非

2、在0.440/ml浓度范围内线性良好,相关系数0.9998,相对标准偏差为0.55%0.71%,回收率为97.6%105%,最低检出限为5ng.结论:该方法简便快速,准确可靠,可用于保健食品中他达那非含量的测定.关键词反相高效液相色谱法;保健食品;他达那非中图分类号0657.72文献标识码A文章编号10048685(2007)01009202DeterminationoftadalafflinhealthfoodwithRPl肌CShengZhit,u,WangPei,Hong-bing(ChangzhouCenterforDiseaseControlandPrevention,Changzh

3、ou213003,China)AbstractObjective:Toset叩amethodofRPtodeterminetheconcentoftadalafilinhealthfood.Mlls:OnaODSco1umn,ngo.02mel/Ltriethylamine/methanol/acetonitrile(45:33:22)asmobileTheflowratewfl81.0mL/min.ThedetectorWEllSDThedecetivewavdengthwassetat217.4nni.andcalibrationtracemethodW88usedforquantific

4、ation.Results:Thelinearrange0fcalibrationcurveoftadalafilW88o.440./mLThecorrelationcoefficientwasQl98.andwasQ55%一Q71%.nleaveragerecoverywas97.6%1cI5%.ThedetectionlimitoftMIA61was5ng.Conclusion:nlemethodi8simple,rapid.accurateandsensifiwItc趴beusedasaquantitativeanalysingmethodforlinhealthfood.Keyword

5、sReversedphasehighperformanceliquidchromatography;Healthfood;Tadalafil他达那非(英文名:tadalalil)是一种口服的新型磷酸二酯酶5(PDE一5)抑制剂,主要治疗男性勃起功能障碍.其化学名为(6R,12aR)一6一(1,3一苯并二氧戊环一5)一2,3,6,7,12,12a一六氢一2一甲基一吡嗪并1,2:1,6吡啶并3,4一b吲哚一1,4一二酮,相对分子质量为389.4,分子式C22H.,N,04.本品的不良反应较西地那非少,最常见的是头痛和消化不良,还能引起血压中等程度的下降.该药是一种处方药,严禁添加在保健品中,然而一

6、些保健食品生产企业为突出产品的功效,置消费者健康于不顾,仍然擅自在抗疲劳类保健品中非法添加他达那非等壮阳药类.长期服用此类保健食品对身体产生的副作用是不容忽视的.本文就是参考相关文献的方法选取合适的色谱条件,建立了一种测定保健食品中他达那非的反相高效液相色谱方法.1材料与方法1.1主要仪器和试剂1.1.1仪器美国Waters510高效液相色谱仪;996二极管阵列检测器;Prodigy5ODS3柱250x4.60nim;超声波发生器;溶剂真空过滤器.作者简介沈志武(1966一),女,学士,副主任技师,主要从事食品理化检验工作.1.1.2试剂甲醇(色谱纯);乙腈(色谱纯);磷酸(分析纯);三乙胺(

7、分析纯);0.1mg/ml他达那非标准使用溶液:精确称取他达那非标准对照品0.0100g于100ml容量瓶中,以1:1的甲醇水溶液溶解并定容.1.2方法1.乞1样品溶液制备精确称取混合均匀样品0.05g左右,置于50ml容量瓶中,加入约30ml左右甲醇:水=1:1溶液超声溶解10min,再用此溶液定容至50ml,以0.45m滤膜过滤备用.1.2.2色谱条件流动相:0.05mol/L三乙胺(磷酸调pH至4.0):甲醇:乙腈=45:33:22,流速1.0ml/min,检测波长217.4nni,柱温28,进样量2o.2结果与讨论2.1检测波长的测定在190700nin波长范围内,对他达那非标准品进行

8、扫描,结果显示其最大吸收波长分别为217.4Bill和281.4nni,两个波长下峰型相似,但同一浓度的标准峰在217.4nni波长下的峰面积高出281.4nni波长下峰面积的数倍,故选择217.4nni波长检测灵敏度高.2.2提取溶剂的选择称取相同量已知含有他达那非的样品两份,一份用甲醇:中国卫生检验杂志2007年1月第17卷第1期ChineseJoinrodofHealthLaboratoryTechnology,Jan2OO7;Vol17No193水=1:1溶液超声提取10rain,另一份用pH=4的水(用磷酸调节pH)超声提取10min,两份样品均用相应的提取液定容到相同体积,用0.4

9、5p,m滤膜过滤后进相同量测定,结果见图1,图2.很明显用甲醇水作提取液灵敏度高很多.时间(min)图1甲醇:水(1:1)提取样他达那非色谱图0000O0时间(min)图2pH=4水提取样品他达那非色谱图2.3标准曲线用甲醇:水=1:1作溶剂将0.1mg/IIlI的他达那非标准应用液配制成0.40,1.0,2.0,4.0,10,20,40/IIlI的标准系列,再分别进2O测定,以标准系列浓度为横坐标,标准峰面积为纵坐标制备标准曲线.线性回归方程:Y=481.48+1944.63X,相关系数r=0.9998,表明他达那非在0.4040pe,/na的浓度范围内线性良好,线性范围较宽.继续配制一个0

10、.25p/na的标准点,进同样体积,峰面积仍符合以上线性关系,故本法在此条件下的最低检出限为5ng.2.4含量及精密度测定分别对2份样品按上述方法重复测定6次,计算样品中他达那非含量和6次测定的相对标准偏差,结果见表1.表1他达那非含量及精密度测定(翟I/lg.6)2.5回收率试验精密称取同样质量的1号胶囊,2号胶囊各2份,分别加入不同浓度的标准溶液,以上4份样品均按1.2.1样品溶液制备测定,结果见表2.表2回收率试验3小结本方法适用于抗疲劳类保健食品中他达那非含量的测定.操作简便快速,灵敏度高,线性范围宽,较低浓度时也能检出,精密度准确度较好,结果准确可靠.参考文献】1储刚,王进欣,李念光

11、,等.治疗勃起功能障碍新药他达那非J.中国新药杂志,2006,15(3):235237.2鲁琳,高燕红,李少霞,等.高效液相色谱一二极管阵列检测法测定保健食品中枸橼酸西地那非的研究J.中国卫生检验杂志,2005.15(9):10521053.(收稿日期:200608一l8)(上接第14页)3小结本实验所建立的方法,具有较好的回收率和精密度,样品前处理简单,能快速,准确地测定全血中氟鼠灵和溴鼠灵含量,以满足中毒病人的诊断要求.参考文献】1陈志龙,刘大鹏,张爱军.抗凝血灭鼠剂灭鼠效果研究J.中华卫生杀虫药械,2004.10(2):8789.2关福玉,刘力,罗毅.高效液相色谱法测定血桨中七种灭鼠剂【

12、J.分析化学,1995,23(2):159161.3GuanFY,AkiraI,HiroshiS,eIa/.Amethodforsimultaneousdeter-ruinationoffiveanticoagulantrodenticidesinserumbyhighperform-a/iceliquidchromatographyJ.JPharmBiomedAnal,1999,21(1):179185.4FauconnetV,PouliquenH,PinaultLReversedphaseflPLCdeter-ruination0feightanticoagulantrodenticidesinavinmlhv日【J.JAnalToxicol,1997,21(3):548553.5ThongchaiC,LawrenceJF,MiehanelJM.Simultaneousdeterminationofeightanticoagulantrodenticidesinblood咖andliverJ.JAnalToxicol,1993,17(1):5661.6GuanFY,lshiiA,SenoH,eIUseofionpairingreagentforhighperformanceliquidchromatographyatmosphericpressurechemic