HPLC法测定注射用雷贝拉唑钠的含量及有关物质

1、HPLC法测定注射用雷贝拉唑钠的含量及有关物质赵俊,陈祥峰*,唐燕平(南京海光应用化学研究所,南京211112摘要 目的:建立注射用雷贝拉唑钠含量及有关物质的HPLC检测方法。方法:采用Sh i m adzu CLC-OD S不锈钢柱(150mm 4 6mm,5 m;流动相为磷酸盐缓冲液-乙腈(6040,流速1 0mL!m i n-1,检测波长为292n m。结果:雷贝拉唑钠与其相邻杂质峰能完全分离,雷贝拉唑钠在16 9168 5 g!mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0 9999,高、中、低3种不同浓度的回收率为99 0%100 8%(n=9。结论:本方法操作简便,精密度好,结果准确可靠,

2、可用于该制剂的质量控制。关键词:雷贝拉唑钠;含量;有关物质;高效液相色谱法中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:0254-1793(200903-0423-04HPLC deter m inati on of rabeprazole sodi u m for i njectionand its rel ated s ubstancesZ HAO Jun,CHEN X iang-feng*,TANG Y an-ping(Nan ji ng H ai guang App lied Che m istry In stitute,N an ji ng211112,Ch i naAbst ract

3、 Objective:To establish anH PLC m e t h od for the and deter m i n ati o n of assay re lated substances of Rabe prazole Sodiu m for I n j e ction。M et hods:The chro m atograph w as equ i p ped w ith a150mm 4 6mm sta i n less co l um n(m ode:l Sh i m adzu CLC-ODS,w ith m obile phase o f a m i x t u r

4、e of phosphate buffer and acetonotrile (6040,flo w rate of1 0mL!m i n-1and detection w avelength at292nm。R esults:The data sho w s t h at t h is m ethod can clearly separate R abeprazole peak fro m its nearby i m purity peaks,w ith a better li n ear range o f16 9-168 5 g!mL-1(r=0 9999,and R abeprazo

5、le Sodi u m average recovery range o f99 0%to100 8%duri n g tests i n its high,m i d d le and lo w er concentrations(n=9。Conc l u sion:This m ethod i s si m ple,accurate and re li a ble,so it can be used for qua lity contro l of this preparation.K ey w ords:rabeprazo le sodium;assay;related substanc

6、es;H PLC雷贝拉唑钠(rabeprazo le sod i u m由日本卫材公司开发的新一代质子泵抑制剂,与奥美拉唑等第一代抑制剂相比具有较高的pKa值,口服后可在体内快速活化,与质子泵结合发挥抑酸作用。雷贝拉唑钠在抗分泌作用、抗幽门螺杆菌作用、药物的相互作用、药物的安全性以及代谢的多态性等方面与第一代质子泵抑制剂相比具有明显的优点13。目前在国内已上市剂型为肠溶片,江苏奥赛康药业有限公司研制开发了注射用雷贝拉唑钠。雷贝拉唑钠及其制剂含量测定已有文献报道,雷贝拉唑采用非水溶液滴定法4,肠溶片采用HPLC法5,报道的色谱条件不但主药与降解产物峰分离效果不好,而且供试品溶液放置易降解。本文采

7、用HPLC法测定注射用雷贝拉唑钠的含量及有关物质,结果可靠,重现性好,可用于该药的质量控制。1 仪器与试剂岛津LC-10Avp高效液相色谱仪(日本岛津公司;UV-2401PC紫外-可见分光光度计(日本岛津公司。注射用雷贝拉唑钠由江苏奥赛康药业有限公司提供,规格:20mg,批号:20060523, 20060528,20060602;雷贝拉唑钠对照品由南京海光应用化学研究所提供,含量采用非水滴定法测定为99 72%。乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯。2 色谱条件和系统适用性色谱柱:Sh i m adzu CLC-ODS柱(150mm 4 6 mm,5 m;流动相:磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钠1 1

8、19g和磷酸二氢钠0 179g,加水1000mL溶解 -乙腈(6040;流速:1 0m L!m i n-1;检测波长:*通讯作者 Te:l(02551198909;E-ma i:l n j chenxf yahoo co m cn292nm;进样体积20 L 。理论板数按雷贝拉唑钠峰计算不低于2000,雷贝拉唑钠与各杂质间的分离度应符合规定。3 方法的专属性考察3 1空白试验取处方量的空白辅料甘露醇加0 001m o l !L -1氢氧化钠溶液溶解并稀释,量取20 L 进样,结果可见稀释液及辅料对含量与有关物质检查均无干扰,色谱图见图1。3 2酸破坏取本品(20060523批适量(约相当于雷贝

9、拉唑15m g,置50m L 量瓶中,加0 1m o l !L -1盐酸溶液4mL ,于室温条件下放置4h ,用碱中和后,加0 001m ol !L -1氢氧化钠溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液进样20 L,记录主峰保留时间2倍的色谱图。3 3碱破坏取本品(20060523批适量(约相当于雷贝拉唑15m g,置50m L 量瓶中,加0 1m o l !L -1氢氧化钠溶液4mL,于室温条件下放置4h,用酸中和后,再加0 001m o l !L -1氢氧化钠溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液进样20 L,记录主峰保留时间2倍的色谱图。3 4氧化破坏取本品(20060523批适量(约相当于雷

10、贝拉唑15m g,置50mL 量瓶中,加30%过氧化氢2mL ,于室温条件下放置4h 后,加0 001mo l !L -1氢氧化钠溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液进样20 L ,记录主峰保留时间2倍的色谱图。3 5光照破坏取本品(20060523批适量(约相当于雷贝拉唑15mg ,置50mL 量瓶中,加0 001m ol !L -1氢氧化钠溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,置强光条件下(4500Lx 放置4h 后,取出,滤过,取续滤液进样20 L ,记录主峰保留时间2倍的色谱图。3 6高温破坏取本品(20060523批适量(约相当于雷贝拉唑15mg ,置50mL 量瓶中,加0 001m ol !

11、L -1氢氧化钠溶液使溶解并稀释至刻度,置100#水浴上加热4h 取出,冷却,滤过,取续滤液进样20 L ,记录主峰保留时间2倍的色谱图。测试结果表明:该方法专属性强,能有效检测本品经酸、碱、氧化、光照、热破坏后产生的降解产物等杂质,说明本色谱条件可行。色谱图见图1。 图1H PLC 法专属性考察图谱Fi g 1 Ch ro m at ogra m s of t h e specificit y validati on A.辅料及稀释液(access ory and d il u ent B.未破坏(no da m ageC .酸降解产物(degradati on product s i n

12、acid m ed i um D .碱降解产物(degradation produ cts i n a l kali ne m ed i um E.氧破坏产物(degradati on p roducts i n oxidati on m ed i um F .氧化剂(oxi d antG .光破坏产物(degradationproducts under strong lightH.热降解产物(degradati on p roducts under h igh te m perat ure1.雷贝拉唑钠(rab epraz o l e sod i um 4 含量测定的方法学研究4 1线性关系

13、取雷贝拉唑钠对照品适量(约相当于雷贝拉唑20m g,精密称定,置50mL量瓶中,加0 001m o l!L-1氢氧化钠溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,分别精密量取该溶液1,3,5,7,10mL,置25mL量瓶中,加0 001m o l!L-1氢氧化钠溶液稀释至刻度,配制成系列对照品溶液,精密量取各溶液20 L分别注入液相色谱仪,记录色谱图,以雷贝拉唑钠峰峰面积A对溶液浓度C( g!mL-1进行线性回归,得到回归方程:A=1578 3C-51 516r=0 9999结果表明:雷贝拉唑钠在16 9168 5 g!mL-1浓度范围内线性关系良好。4 2定量限、检测限取4 1%项下最低浓度的溶液用0 00

14、1m o l!L-1氢氧化钠溶液逐级稀释,取20 L进样,记录色谱图。按信噪比S/N=10计算定量限为2ng;按信噪比S/N=3计算检测限为0 6 ng。4 3精密度试验取4 1%项下中间浓度的溶液,连续进样6次,结果雷贝拉唑钠峰面积的RSD为0 66%,表明进样精密度良好。4 4 回收率试验按照制剂处方配制样品,其中雷贝拉唑钠对照品分别按处方量的80%,100%, 120%投料,照6%项下测定方法制备样品溶液,每个浓度测定3份样品,计算平均回收率。结果低、中、高3种浓度的平均回收率分别为99 0%, 100 8%,99 4%;RSD分别为1 01%,0 69%, 0 83%。4 5重现性试验

15、取同一批号注射用雷贝拉唑钠(批号:20060523,按6%项下方法测定雷贝拉唑钠的含量,共测定6次,结果含量测定的平均值为99 52%,RSD为0 22%,表明本方法重现性良好。4 6稳定性试验取4 5%项下的供试品溶液,分别在室温放置0,1,2,4,6,8,12h后测定,结果雷贝拉唑钠的峰面积RSD为0 34%,表明雷贝拉唑钠溶液在12h内稳定。5 有关物质取本品适量(约相当于雷贝拉唑15mg,精密称定,用0 001mo l!L-1氢氧化钠溶液配制成浓度为0 3mg!mL-1的供试品溶液和浓度为3 g! mL-1的对照溶液。量取对照溶液20 L注入液相色谱仪,调节仪器检测灵敏度,使雷贝拉唑钠

16、峰高为满量程的20%25%;再量取供试品溶液20 L注入液相色谱仪,记录色谱图至主峰保留时间的2倍。量取所有杂质峰面积的和与对照溶液主峰面积比较,测定本品3批(20060523,20060528,20060602的有关物质分别为0 45%,0 38%,0 49%。6含量测定取本品5瓶分别测定每瓶装量,计算平均装量,取内容物适量(约相当于雷贝拉唑20m g,精密称定,用0 001m o l!L-1氢氧化钠溶液溶解并稀释制成浓度为80 g!mL-1的供试品溶液,精密量取20 L,注入液相色谱仪,记录色谱图;另取雷贝拉唑钠对照品适量,同法测定,按外标法以峰面积计算,测得本品3批(20060523,2

17、0060528,20060602的含量分别为99 57%,103 1%,101 1%。色谱图见图2。图2对照品(A和样品(B色谱图F i g2C hro m atogra m s of referen ce(Aand sa mp le(B1.雷贝拉唑钠(rabep razole sod i um7 讨论7 1 稀释液的选择因雷贝拉唑钠在酸性及中性溶剂中不稳定,在碱性溶剂中稳定,故有关物质及含量测定均选择0 001m o l!L-1的氢氧化钠溶液作为样品配制的稀释液。7 2 检测波长的选择取雷贝拉唑钠适量,分别加流动相及稀释液(0 001m o l!L-1氢氧化钠溶液溶解并制成浓度为12 g!m

18、L-1的溶液,在450190 nm波长范围内绘制吸收曲线图,结果可见本品在两种溶液中于292n m波长处均有最大吸收,故选择292nm作为测定波长。7 3 专属性考察空白试验表明稀释液及辅料对测定无干扰;破坏试验表明本品在碱性条件下较稳定,在酸性、氧化、强光、热条件下均易产生降解产物,且各降解产物均与主峰分离良好,不影响含量测定及有关物质检查。7 4 本文所建立的HPLC方法灵敏、准确、专属性强,雷贝拉唑钠浓度在16 9168 5 g!mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,本法操作简便,可同时测定含量及有关物质。参考文献1 M AO Yu(毛煜,SHE Jia-hong(佘佳红,YUAN B

19、 o-j un(袁伯俊.Recent progress es of the p rot on pu m p i nh i b it ors b enz i m i dazol es (苯并咪唑类质子泵抑制剂的药理和临床研究进展.C hin Ne wD rug s(中国新药杂志,2006,15(1:172 HE J i e-s h eng(何解生.Anti-u l cer drug rab eprazol e of the d iseaseand cli n ical phar m aco l ogy(抗溃疡病药雷贝拉唑的药理与临床.P ra ctic a l Phar m C lin R e

20、m(实用药物与临床,2005,8(1:423 S tedman CA,B arcl ay M L.Revi e w articl e:co m paris on of the phar m acok i netics.A ci d s uppress i on and effi cacy of proton pum p i nh i b it os.A li m e n tP har m acol t her,2000,14:9634 Drug Specificati on s Pro m u l gated by S t ate Food and Drug A d m i n istrati

21、on(I n teri m(国家食品药品监督管理局标准(试行.YBH110120045 HUANG Shen-yi(黄伸义,LI ANG Ji an-x i n(梁建新.Rabep razole three agen ts conten t(三种雷贝拉唑制剂的含量比较.S hangha iM e d Pharm J(上海医药,2005,26(8:371(本文于2008年6月5日收到中检所常务副所长金少鸿赴墨西哥参加打击假药和药品安全研讨会Anti-CounterfeitingM edical Products and Phar m aceutical Products Safety Se m

22、inar% 应亚太经合组织(APEC生命科学创新论坛(LSI F%的邀请,中国药品生物制品检定所常务副所长金少鸿教授与丛佳处长参加了2009年2月17日2009年2月20日在墨西哥举行的以保护病人健康、建立国际合作(Bu ilding Internati o na lCooperation to Protect Patients%为主题的打击假药和药品安全研讨会%(Anti-Counterfe iti n g M ed i c al Products and Phar m aceu tica l Pr oducts Safety Se m inar%。应大会组委会的要求,金少鸿教授作了关于中国检测伪劣药品行动规划成功事例(Success Sto r yCh i n a Counter fe itM ed icine Detecti o n Progra m的大会报告。参加此次研讨会的104名代表分别来自墨西哥、新加坡、马来西亚、印度尼西亚、越南、秘鲁、巴拿马、阿根廷、巴西、洪都拉斯、美国、英国、中国等40多个国家和地区,世界卫生组织(WHO总部专门负责药品打假工作