响应曲面法优化蚕豆壳中原花青素的微波提取工艺 - 中

1、八珍益智颗粒制备工艺研究牛 阳收稿日期基金项目 科技人员服务企业行动项目（项目编号： SQ2009GJG3004800）第一作者 牛阳，硕士，教授，从事中医内科学研究，Tel:E-mail: niuyang通讯作者 张霞，硕士，高级工程师，从事药物分析研究，Tel:E-mail: ydzhx ，张 霞2*，王 荣1，侯延辉2，杨建宏2（1.宁夏医科大学中医学院; 2. 宁夏医科大学药学院; 宁夏 银川750004）第一作者 牛阳，教授，硕士，从事中医内科学研究，Tel:E-mail: 通讯作者 张霞，高级工程师

2、，硕士，从事药物分析研究，Tel:E-mail: ydzhx 摘 要 目的：优选八珍益智颗粒最佳制备工艺。方法：以总多糖提取率为评价指标，采用L9(34) 正交设计试验法，对八珍益智颗粒制备过程中的水提取工艺条件进行优化，并进行制粒工艺研究。结果：该颗粒剂水提取最佳工艺条件为：加水量分别为12倍、10倍，浸泡0.5 h，提取时间2 h，提取次数为2 次；制粒工艺：提取液减压浓缩后喷雾干燥得药粉，以90%乙醇作润湿剂，药粉辅料为10.3，矫味剂用量为2%。结论：该工艺合理可行，适用于八珍益智颗粒的制备。 关键词 八珍益智颗粒；制备工艺；多糖；正交试验；喷雾干燥中图分类

3、号 R943.4 文献标识码 A 文章编号Optimization of the Preparation Process of Increase the Intelligence of Bazhen Granules NIU Yang1, ZHANG Xia2 *, WANG Rong1, HOU Yan-hui2, YANG Jian-hong2(1. College of Chinese Medicine, Ning Xia medical university, Yinchuan 750004, China; 2., College of Pharmacy, Ning Xia medic

4、al university, Yinchuan 750004, China;）Abstract Objective: To optimize preparation technology of Increase the Intelligence of Ba Zhen Granules (IIBZG). Method: Using the extraction rate of total polysaccharide as the index, the amout of water (A) , extracting times (B) , extraction time (C) , degree

5、 on extraction technology were evaluated by L9(34) orthogoral design method. Granulating conditions was studied. Result: The superior technology of water extraction were as follow: 12 and 10 times as much water, soaked 0.5 h, extracted 2 h for 2 times. Wetting agent was 90% alcohol, extraction powde

6、r: adjuvant was 10.3. 2% sweetingagent was added. Conclusion: The preparation procedure is stable and feasible, it could be used for the preparation of IIBZG. Key words： Increase the Intelligence of Ba Zhen Granules (IIBZG); preparation process; total polysaccharide; orthogoral design; spray dry ; 随

7、着老年人口的不断增多，记忆力减退成为影响老年人生活质量的重要因素，如何增强老年人的记忆力、延缓智能减退已成为当前医学界研究的热点问题之一。中医药在增强智力、延缓衰老方面积累了丰富经验，具有独到疗效和优势。八珍益智颗粒的处方来源于成方便读，由龙眼肉、茯苓、山药、莲子肉、白术等八味药组成，具有增强智力、延缓衰老的功效。将其制成无糖型颗粒剂既可保留汤剂吸收快、显效迅速等特点，又可有效减小制剂体积，方便患者服用。为保证制剂的质量及疗效，本研究对八珍益智颗粒的制备工艺进行了优选。1 仪器与试药UV-2550型紫外分光光度计（岛津）；SHZ-D循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）；RE-52A旋转蒸发器

8、（上海亚荣生化仪器厂）；AL104分析天平（梅特勒-托利多）；DL-5-B台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；B-290喷雾干燥机（瑞士步琦）；D(+) - 无水葡萄糖对照品（上海信然对照品公司）；龙眼肉、茯苓、山药、莲子肉、白术等8 味中药（均购自宁夏明德中药饮片有限公司，经药学院中药教研室鉴定，符合中国药典2010年版一部要求）；浓硫酸、苯酚等试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 剂型的选择 由于本方单方剂量较大，通过预试验得知药材出膏率较高，所以不宜选用胶囊剂和片剂、口服液等剂型。无糖型颗粒剂具有服用量少、携带方便、吸收快、起效迅速、稳定性高等优点，故本方选用无糖型颗粒剂。2.2 处方药材

9、提取工艺的优化2.2.1 吸水率的考察按处方比例称取药材适量，加10倍水浸泡至透心(8 h)，过滤，滤饼称重，计算得药材吸水率为208% (RSD = 1.9%, n = 3)，因此在第一次提取时应多加2 倍量的水以补足吸水量。2.2.2 正交设计优化工艺 经预试验确定浸泡时间为0.5 h，在此基础上采用正交试验进一步优化提取工艺条件。选择加水量、提取次数、提取时间为考察因素，因素水平见表1。以处方中主药活性成分多糖提取率为评价指标，用L9(34) 正交表安排试验，正交试验设计见表2。表1 因素水平表Tab.1 factor and level of orthogoral design水 平因

10、 素加水量(倍) (A)提取次数(B)提取时间( h) (C)181121021.5312322.2.3 提取实验依处方比例称取药材110g，共9 份，按正交试验设计表的安排(见表2)，分别加水浸泡，第一次提取时多加2 倍量水。煎提，过滤，收集滤液，减压浓缩至约400 mL，转移至500 mL量瓶中，加水定容，备用。2.2.4 苯酚-硫酸法测定总多糖的含量(1) 苯酚溶液的配制取苯酚100 g，加入0.1 g 铝片和0.05 g碳酸氢钠，加热蒸馏，收集182 馏份，称取4.0 g重蒸馏苯酚，加水溶解，稀释至100 mL，即得4%苯酚溶液，棕色瓶避光保存。(2) 对照品贮备溶液的制备精确称取10

11、5 干燥至恒重的无水葡萄糖对照品22.0 mg，置10 mL 量瓶中，以蒸馏水溶解并稀释至刻度。分别精密吸取上述溶液0.25，0.5，1.0，1.5，2.0 mL 置25 mL 量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度的对照品贮备液。(3) 标准曲线的绘制分别吸取上述5个浓度的对照品贮备液1 mL，置10 mL 具塞试管中，依次加入蒸馏水使终体积为2.0 mL，另取2.0 mL 蒸馏水作空白对照，各管加入5% 苯酚试液1 mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸各5 mL，摇匀后放置5 min，置沸水中加热20 min，冰水浴冷却之后，于484 nm处测定吸光度。以葡萄糖质量浓度X (mg.mL-1)

12、为横坐标，吸光度Y为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y = 5.305X - 0.023，r = 0.9990，表明葡萄糖质量浓度在0.022 - 0.176 mgmL-1 线性关系良好。(4) 供试品溶液的制备精密吸取2.2.3 项下提取液10 mL，置离心管中，加入95%乙醇85 mL，放置1 h 后，离心( 3 000 rmin-1，20 min) ，倾去上清液，吹干沉淀中残余乙醇，加水10 mL 溶解，同法再醇沉1 次，将沉淀物加适量水溶解，定量转移至100 mL 量瓶中，稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液6 mL，加水稀释至100 mL，混匀，作为供试品溶液。(5) 总多糖含量测定精密

13、吸取供试品溶液1 mL，置10 mL具塞试管中，按标准曲线绘制方法测定并计算总多糖的含量。总多糖的提取率 = %（式中，Y为吸光度；m为称取的药材质量(g)）(6) 精密度试验 取同一对照品溶液连续测定6 次，测得吸光度的RSD(n = 6)分别为0.53%。(7) 重复性试验 依处方比例称取药材6 份，精密称定，按相同提取工艺条件提取后，依法制备供试品溶液测定，计算提取率。结果提取率的平均值分别为4.54%，RSD为2.0% (n = 6)。 (8) 稳定性试验 取供试品溶液一份，室温下放置，分别在0，0.5，1，1.5，2 h测定吸光度。结果吸光度的RSD分别为1.5% ( n = 5)。

14、表明供试溶液在2 h内稳定。(9) 加样回收率试验 依处方比例称取药材6 份，精密称定，加入无水葡萄糖5.00 g，按表2中序号1的条件提取后测定，结果加样回收率为90.3%，RSD为2.0% (n = 6)。正交试验设计及实验结果见表2。表2 水提工艺正交试验设计表及结果Tab.2 design and result of orthogonal test for water extraction因素列号A1B2C3D4多糖提取率%1234567891112223331231231231232313121233122314.357.508.387.438.514.957.554.558.82K

15、1K2K3 R 6.7436.9636.9730.2306.4436.8537.3830.9404.1677.9178.1473.5307.2276.6676.7870.5602.2.5 数据分析 对表2 数据进行直观分析可知，以总多糖提取率为评价指标，最佳提取工艺条件为A3B3C3，各因素的主次顺序为C、B 、A，其中C因素经方差分析表明对总多糖的提取率有显著影响，A、B因素对总多糖的提取率没有显著影响（见表3）。从省时、节约、降低成本角度考虑，A因素取A2，B因素取B2, C因素取C3，因此，确定方案A2B2C3为最佳提取工艺条件，即加10倍量水(第一次提取加12倍量水，浸泡0.5 h)，

16、提取2 次，每次2 h。表3 方差分析表Tab.3 Variance analysis of the content误差来源离差平方和自由度方差F值方差临界值显著性ABC误差E0.1011.33323.4040.5222220.1932.55444.83519.00019.000 19.000*2.2.6 验证试验按处方比例称取药材适量，平行3份，根据优化得到的工艺条件进行提取，结果总多糖提取率为8.53% (RSD = 1.8%，n = 3)。验证试验表明，优化得到的提取工艺稳定可行。因此确定八珍益智颗粒的提取工艺为：加水量分别为12倍和10倍，浸泡0.5 h，煎煮2 次，每次2 h。2.3

17、 制粒工艺条件的筛选2.3.1 浸膏粉的制备 处方药材按优化的提取条件提取后，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度1.05 - 1.10(60 )，滤过，进行喷雾干燥。喷雾干燥的工艺参数为：进液物料温度50 60 ，进风口温度170 ，出风口温度90 ，在此条件下可得到干燥的药粉且尽可能地保留药物的有效成分。2.3.2 润湿剂的选择 由于本方的药粉粘性较强，因此选用一定浓度的乙醇为润湿剂。制粒时软材情况与乙醇浓度的关系见表4。根据试验结果应选择90%乙醇作为制粒时的润湿剂。表4 不同浓度乙醇对制粒的影响Tab 4 Effect of different alcohol concent on

18、granulating乙醇浓度(%)软材情况制粒难易0507090糖膏状捏之成团，但不散捏之成团，不易散捏之成团，轻敲即散不能制粒很难制粒难制粒易制粒2.3.3 辅料的选择颗粒剂(无糖型)常用辅料有乳糖、糊精和可溶性淀粉。称取喷雾干燥粉与辅料比例为1:0.5，分别混合均匀，以90%乙醇为润湿剂制粒。60 干燥10 h，以吸湿性、成型性及休止角为考察指标选定成型辅料。结果表明，以可溶性淀粉为辅料制粒时，可成粒，但易粘连。以乳糖和糊精为辅料时，易成粒，不粘连，所得颗粒均匀，吸湿性及休止角无明显差异。由于乳糖价格较高，考虑生产成本，选用药用糊精为赋型剂。2.3.4 辅料用量的选择 称取喷雾干燥粉与辅

19、料适量，分别混合均匀，制粒，通过考察颗粒的成型性、吸湿率及休止角确定所用辅料，结果见表5。随着辅料用料的增加，颗粒的成型性变好，吸湿性降低，流动性增强，考虑服用量应以少为佳，确定药粉与辅料的比例为10.3。表5 辅料用量的考察Tab.5 Effect of different excipients compound on extract granulating药粉辅料成型性吸湿率(%)休止角10.110.310.5很易粘连易成粒，不粘连，颗粒均匀易成粒，不粘连，颗粒均匀32.1631.8528.7138.3037.6937.112.3.5 矫味剂用量的选择 虽然本处方龙眼肉、茯苓等均含有多糖等

20、甜味成分，但仍然有一定的苦涩味，为改善制剂的口感，使患者容易接受，应加入一定量的矫味剂掩盖不良口味。加入蛋白糖的量分别为药粉量的0.5%，1.0%，1.5%，2.0%，2.5%，试验结果表明当加入蛋白糖2.0%时已能起到较好的矫味作用，药香自然，故确定加入蛋白糖2.0%进行矫味。2.3.6 颗粒临界相对湿度(CRH)的测定配制不同浓度硫酸溶液和饱和盐溶液1，分别置于干燥器中，20 恒温放置48 h，使其内部湿度平衡，构成不同相对湿度(RH)的环境；另精密称取21份药物颗粒，每份约5 g，置于干燥恒重的称量瓶中，按每3份一组置上述不同RH的干燥器中，恒温吸湿至恒重，精密称重计算吸湿率。以吸湿百分率为纵坐标，相对湿度为横坐标作图。试验结果在20 时，颗粒的临界相对湿度为54%，在此湿度下颗粒吸湿变化不大。因此，颗粒在制粒、包装、储藏时，环境湿度应控制在54%以下，以减少水分对药物性质及稳定性的影响。3 讨论八珍益智颗粒由龙眼肉、茯苓、山药、莲子肉等八味药材组成，本方重用龙眼肉为君药，本草纲目称龙眼肉