金龙胶囊对行肝动脉栓塞化疗的肝癌患者血清白细胞介素2和可溶性白细胞介素2受体水平的影响

1、金龙胶囊对行肝动脉栓塞化疗的肝癌患者血清白细胞介素2和可溶性白细胞介素2受体水平的影响         【摘要】  观察并探讨金龙胶囊对行肝动脉栓塞化疗（transarterial chemoembolization, TACE）的肝癌患者血清细胞因子白细胞介素2（interleukin2, IL2）及可溶性白细胞介素2受体（soluble interleukin2 receptor, sIL2R）表达的影响。方法：48例肝癌患者随机分为两组：金龙胶囊联合TACE组（金龙胶囊组）和单纯TACE组（对照组）

2、，每组24人。金龙胶囊组患者在第1次行TACE后口服金龙胶囊2个月（4粒/次，3次/d），对照组患者单纯行TACE治疗，两组患者在间隔5560 d后行第2次TACE。第1次TACE治疗前和第2次TACE治疗的第1、7、15天分别检测血清细胞因子IL2及sIL2R表达水平。结果：两组患者IL2及sIL2R在第1次TACE治疗前表达水平相当（P0.05），IL2水平低于正常成人，sIL2R水平则高于正常成人。第2次TACE治疗的第1、7、15天，金龙胶囊组IL2表达水平较同期对照组明显升高（P0.05），sIL2R表达水平则较对照组明显降低（P0.05）。结论：TACE辅助金龙胶囊口服可以改善肝癌

3、患者血清IL2及sIL2R的表达异常，提高患者机体的免疫水平，起到较好的辅助治疗作用。 【关键词】  肝癌 介入放射学 白细胞介素2 金龙胶囊 随机对照试验   Objective: To observe and discuss the dynamic changes of interleukin2 (IL2) and soluble interleukin2 receptor (sIL2R) and their significance in the patients with primary liver cancer after transarterial c

4、hemoembolization (TACE) therapy combined with Jinglong Capsule.   Methods: A total of 48 patients with primary liver cancer, who failed to be treated by major surgery, were randomly divided into two groups: Jinlong Capsule group (TACE therapy plus Jinlong Capsule) and control group (TACE t

5、herapy alone). There were 24 cases in each group. The levels of peripheral blood IL2 and slL2R were measured before the first TACE and 1, 7 and 15 days after the second TACE respectively by using doubleantibody sandwich enzymelinked immunosorbent assay. The data from Jinlong Capsule group were compa

6、red with those from the control group.   Results: The level of sIL2R in Jinlong Capsule group was significantly lower than that in the control group (P0.05), while the level of IL2 was significantly higher than that in the control group (P0.05).   Conclusion: Jinlong Capsule can

7、significantly improve the lymphocyte function of the patients with primary liver cancer after TACE. The levels of IL2 and sIL2R can be considered as the valuable parameters for evaluating the effects on primary liver cancer, and Jinlong Capsule is helpful for the patients with primary liver cancer.&

8、#160;  Keywords: liver cancer; radiography, interventional; interleukin2; Jinlong Capsule; randomized controlled trial   细胞因子及其受体表达水平是判断机体免疫机能强弱的重要指标，在临床上对一些疾病的诊断以及疗效和治疗预后的判断都有比较重要的参考价值。金龙胶囊是以鲜活药用动物为原料，运用低温冷冻及现代生化分离提取工艺制备而成的现代中药，具有抗肿瘤及免疫调节双重作用。通过检测部分行肝动脉栓塞化疗（transarterial chemoemboliz

9、ation, TACE）联合口服金龙胶囊的中晚期肝癌患者外周血细胞因子白细胞介素2（interleukin2, IL2）和血清可溶性白细胞介素2受体（soluble interleukin2 receptor, sIL2R）的动态变化，评价金龙胶囊对TACE治疗后患者机体免疫功能的影响。   1  资料与方法   1.1  病人一般情况  2005年10月2006年10月在上海长海医院首次就诊的原发性肝癌患者48例（预期寿命大于3个月者），采用简单随机分组的方法分为金龙胶囊联合TACE组（金龙胶囊组）和单纯TACE组（对照组

10、），每组24例。金龙胶囊组：男性19例，女性5例；年龄3581岁，平均（50.2±8.3）岁；肝功能Child分级A级6例，B级15例，C级3例；影像学分型结节型5例，肿块型16例，弥漫型3例。对照组：男性20例，女性4例；年龄3079岁，平均（51.4±8.9）岁；肝功能Child分级A级7例，B级15例，C级2例；影像学分型结节型6例，块状型15例，弥漫型3例。   1.2  治疗方法  TACE采用Seldlinger穿刺技术，经股动脉插管至腹腔动脉，行腹腔干造影，了解血管解剖和肿瘤供血等情况后，再进行超选择血管灌注化疗及栓塞。

11、所用化疗药物以表阿霉素、卡铂、羟基喜树碱、5氟尿嘧啶为主，采用二联或三联给药，栓塞材料为碘化油，具体用量根据肿瘤大小及血管情况而定。金龙胶囊组在第1次TACE治疗后开始口服金龙胶囊（由鲜金钱白花蛇、鲜蝰蛇和鲜蛤蚧等组成），金龙胶囊由北京建生药业有限公司生产，生产批号为050806，批准文号为（98）卫药准字Z070号。用法：4粒/次，3次/d，持续2个月；对照组TACE治疗后不服用金龙胶囊或其他免疫调节药物。两组患者在第1次TACE治疗后间隔5560 d行第2次介入治疗。所有患者在第1次TACE治疗前及第2次TACE治疗后第1、7、15天（时间分组分别称为治疗前、第1天、第7天和第15天）检测

12、血清IL2和sIL2R的表达水平。   1.3  细胞因子检测  患者在规定时间空腹取静脉血5 ml，血清IL2和sIL2R水平检测采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法（enzymelinked immunosorbent assay, ELISA），将标准品倍比稀释，分别在450 nm处测光密度（optical density, OD）值，绘制标准曲线；测定各标本OD450值，从中求出每个标本中的相关细胞因子浓度。IL2和sIL2R ELISA试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司，酶标仪为荷兰产Organon Tcknika 230S型。 

13、0; 1.4  统计学方法  实验数据以x±s表示，组间比较用SPSS 11.0软件进行计量资料t检验，检验水准=0.05。   2  结  果   治疗前，两组患者外周血IL2和sIL2R水平比较，差异无统计学意义（P0.05），其中IL2水平明显低于正常人标准，同期11例正常人IL2水平为（970.16±76.52）ng/L，而sIL2R水平则明显高于正常人标准，同期正常人水平为（251.66±89.34）ng/L。第2次TACE后第1、7、15天金龙胶囊组IL2表达水平均较对照组

14、明显升高（P0.05），而sIL2R水平则较对照组明显降低（P0.05）。对照组患者第2次TACE后第7天IL2水平较第1天下降，同期的sIL2R水平则上升；第15天IL2水平较第7天有所上升，同期的sIL2R水平则下降。见表1和表2。表1  两组患者不同时间血清IL2水平表2  两组患者不同时间血清sIL2R水平   3  讨  论   肿瘤免疫学证实机体的免疫状况与恶性肿瘤的发生和发展有密切联系，当机体免疫机能低下或受抑制时，肿瘤发生率高。肿瘤发生后可通过其产生的免疫抑制因子进一步抑制机体的防御机能，致使机体内

15、环境免疫机制呈现紊乱状态，表现为某些细胞因子低表达，而另外一些细胞因子高表达1。   目前研究已经证实T细胞介导的细胞免疫在机体抗肿瘤免疫中起主导作用。成熟T细胞按表型不同分为CD4 T细胞和CD8 T细胞2个亚群。过去人们主要强调CD8 T细胞在肿瘤免疫反应中的作用，近年来，随着研究的深入，已逐渐认识到CD4 T细胞在抗肿瘤过程中的重要作用。CD4 T细胞主要为Th（辅助）细胞，根据其分泌细胞因子的不同，可把CD4T细胞分为Th0、Th1和Th2等3个亚群，Th1和Th2均由Th0细胞发育而来2。   IL2是免疫系统的重要因子，由CD4 T细胞中的T

16、h1亚群细胞分泌，在特异性免疫调节中处于中心统筹地位。IL2具有显着的免疫增强作用，能够激活T细胞，促进T细胞生长、分化，促进B细胞增殖、分化和合成抗体，诱导其他细胞因子产生和受体表达，刺激自然杀伤细胞（natural killer, NK）增殖等3。IL2不仅可增强NK及淋巴因子激活杀伤细胞等非特异的免疫反应，而且可增强主要组织相容性抗原复合物限制性的特异细胞毒性T淋巴细胞反应4。IL2本身具有抗癌作用，还可能通过诱生其他细胞因子（如肿瘤坏死因子和干扰素等）而产生抗癌效应；IL2可活化血管内皮细胞，促进T细胞表面黏附分子的表达，从而有助于T细胞迁移到肿瘤局部，更有效地诱导抗肿瘤免疫及介导肿瘤

17、杀伤。IL2能抑制多种肉瘤和腺癌的肝、肺转移等，通过外源性导入IL2或刺激机体提高本身IL2的表达将有助于抑制肿瘤的生长5，6。            细胞因子都是通过与靶细胞表面高亲和力的特异性受体结合后才能发挥其生物学效应。IL2受体有2种：表达在细胞膜表面的膜结合型白细胞介素2受体（membrane interleukin2 receptor, mIL2R）和游离于血清中的sIL2R。slL2R由IL2诱导产生，它作为一种低亲和力受体可与mIL2R竞争结合IL2，通过中和活化T细胞周围的I

18、L2和抑制已活化的T细胞克隆扩增，从而抑制机体的免疫反应7。因此，一般认为血清sIL2R可间接反映机体细胞免疫功能状态。同时，sIL2R还可作为一种转运蛋白与IL2结合，将其转运到远离IL2产生的部位，延长IL2的半衰期，促使这些部位有足够活化和增殖的效应细胞。这一作用理论上有助于肿瘤等疾病的恢复，但sIL2R与mIL2R竞争结合IL2则明显降低了IL2的生物学活性，加重了机体免疫功能紊乱。研究表明，slL2R在正常人血清中处于较低水平，但在恶性肿瘤患者血清中的表达水平则明显升高，该指标对于病情发展及机体免疫状态评价具有重要的参考价值8，9。   肝癌是我国常见的恶性肿瘤，

19、由于早期缺乏典型症状，临床确诊的患者大多已属于中晚期，手术切除率低。TACE是目前公认的肝癌非手术治疗中疗效好、使用广泛的方法之一。但TACE并不能使肿瘤组织彻底灭活，并且TACE也可引起肝功能损害，导致患者免疫功能受损。因此，与其他肿瘤一样，如何在治疗过程中进一步改善其疗效，减少肝功能及免疫功能损害等并发症是目前临床需要重视的问题10。肝癌在中医学中属“肝积、臌胀、黄疸”的范畴。其病机主要为肝气郁滞和肝热血瘀，中医治疗当清热解毒、活血化瘀、软坚散结。利用中药或中成药辅助TACE抑制肿瘤生长，提高机体免疫力是临床值得研究的一个重要领域。   金龙胶囊以鲜金钱白花蛇、鲜蝰蛇和

20、鲜蛤蚧等新鲜动物药为主要成分，经低温及现代生化提取分离技术工艺制备，将低温、快速、高效三者结合起来，具有破瘀散结、解郁通络之功。现代药理研究证实该药保留了动物药的各种生物活性，特别是多种氨基酸、小分子多肽类物质、酶、核苷酸与多种微量元素，其有效成分中98以上的分子量在10 kD以下。这此小分子物质易于被人体吸收、代谢，能够激活淋巴细胞，同时产生多种效应因子，能够抑制肿瘤细胞，进而激发、增强、调节人体免疫功能，显着增强人体对疾病的防御能力。有学者研究表明，金龙胶囊可以通过影响外周血T细胞亚群比例进行免疫调节11。   本组资料显示，肝癌患者与其他多种恶性肿瘤患者一样，血清IL

21、2表达明显降低，而slL2R则呈现高表达12，13。TACE辅助口服金龙胶囊能有效调整机体免疫功能，使IL2表达水平增加，slL2R表达水平降低。对照组患者在第2次TACE后第7天IL2水平较第1天下降，同期的sIL2R则上升，说明短期内TACE治疗对患者机体免疫功能有一定影响；第15天IL2水平较第7天上升，同期的sIL2R则下降。其原因可能有两方面：其一是随着时间推移，TACE的副作用逐渐减缓，使患者机体免疫功能逐步恢复；其二是TACE治疗导致肿瘤坏死，由肝肿瘤负荷诱发的免疫紊乱得到一定的纠正，削弱了免疫紊乱根源，因此细胞因子的表达趋于好转。而结合口服金龙胶囊则能加快对机体免疫紊乱的纠正，

22、改善患者的免疫状况，提高治疗效果。   金龙胶囊是临床治疗肝癌的常用辅助药物，对提高原发性肝癌患者的疗效、生存率和生活质量有一定帮助。本研究结果提示对接受TACE治疗的肝癌患者而言，同时口服金龙胶囊能对患者免疫机能进行有效调节。【参考文献】  1 ElShanawani FM, AbdelHadi AA, Abu Zikri NB, et al. Clinical significance of aflatoxin, mutant P53 gene and sIL2 receptor in liver cirrhosis and hepatocellular ca

23、rcinoma. Egypt Soc Parasitol. 2006; 36(1): 221239.2 Handzel ZT, Barak V, Altman Y, et al. Increased Th1 and Th2 type cytokine production in patients with active tuberculosis. Isr Med Assoc J. 2007; 9(6): 479483.3 Sandberg JK, Moll M. Effects of interleukin2 treatment on CD1drestricted natural killer

24、 T cells. Clin Cancer Res. 2007; 13(14): 43114315.4 Garrod KR, Wei SH, Parker I, et al. Natural killer cells actively patrol peripheral lymph nodes forming stable conjugates to eliminate MHCmismatched targets. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007; 104(29): 1208112086.5 Porta C, Paglino C, Imarisio I, et a

25、l. Cytokinebased immunotherapy for advanced kidney cancer: past results and future perspectives in the era of molecularly targeted agents. ScientificWorldJournal. 2007; 7: 837849.6 Barker SE, Grosse SM, Siapati EK, et al. Immunotherapy for neuroblastoma using syngeneic fibroblasts transfected with IL2 and IL12. Br J Cancer. 2007; 97(2): 210217.7 Ottaiano A, Leonardi E, Simeone E, et al. Soluble interleukin2 receptor in stage IIII melanoma. Cytokine. 2006; 33(3): 150155.8 Izzo F, Cremona F, Delrio P, et al. Soluble interleukin2 receptor levels in hepatocellular cancer: a more sensitiv