细胞凋亡抑制因子(FasAPO-1)与抗β2-肾上腺素能受体自身抗体的关系(1)

1、    细胞凋亡抑制因子(Fas/APO-1)与抗2-肾上腺素能受体自身抗体的关系(1)    】 目的 检测并比较心肌梗死急性期不同时间点，2自身抗体阳性组与阴性组，患者血清中Fas/APO-1水平差异，了解2自身抗体对Fas/APO-1的影响。方法 41例急性心肌梗死患者，分别于发病24h、7天、24周时取血，采用ELISA的方法，检测血清中2自身抗体的阳性率以及Fas/APO-1的水平；另外取34位性别、年龄匹配的健康人的血同法检测Fas/APO-1作为对照。结果 心肌梗死急性期Fas/APO-1的水平均高于

2、对照组（P<0.05），以梗死后24hFas/APO-1的水平为最高；心肌梗死急性期不同时间点，2自身抗体阳性组Fas/APO-1的水平均高于阴性组，但两组的结果差异无显著性（P0.05）。结论 血清Fas/APO-1水平可以在一定程度上反映心肌细胞凋亡的变化趋势，2自身抗体对Fas/APO-1的确切影响，有待更大规模的实验来证实。        【关键词】 心肌梗死；细胞凋亡；Fas/APO-1；自身抗体；2受体        

3、    【Abstract】 Objective To find the influence of autoantibody against the 2-adrenergic receptor (2 autoantibody) on Fas/APO-1，by comparing the difference of serum levels of Fas/APO-1 between 2 autoantibody positive and negative groups on different time point at acute stage of my

4、ocardial infarction.Methods By ELISA method，the positive ratio of 2 autoantibody and the serum level of Fas/APO-1 were tested in 41 acute myocardial infarction(AMI) patients on 24 hours，7days and 24 weeks of symptoms onset，and the same method was used to test the serum level of Fas/APO-1 in 34 sex a

5、nd age matched healthy donors.Results The serum level of Fas/APO-1 in patients at the acute stage of myocardial infarction was higher in the 2 autoantibody positive group than that of the negative group，but the difference was not significant statistically （P0.05）.Conclusion The serum level of Fas/AP

6、O-1 may to certain extent reflective the cardiomyocyte apoptosis.The large scale of trails should be done to confirm the accurate influence of 2 autoantibody on Fas/APO-1.        【Key words】 myocardial infarction；apoptosis；Fas/APO-1；autoantibody；2-receptor

7、0;       目前有研究认为，多种心血管疾病中存在心肌细胞凋亡，而2-肾上腺素能受体表达的轻度升高，有对抗心肌细胞凋亡的作用。抗2-肾上腺素能受体自身抗体（2-受体自身抗体）因具有2受体激动剂样作用，可能也具有对抗细胞凋亡的作用。血清中细胞凋亡抑制因子（Fas/APO-1）的水平能间接反应机体细胞凋亡的情况，但尚无文献报道，在心肌梗死急性期2-受体自身抗体与Fas/APO-1的关系。本实验希望通过检测心肌梗死急性期2-自身抗体阳性与阴性组患者血清中Fas/APO-1的水平，明确两者之间的关系，为临床对抗心肌细胞凋亡提供一

8、些参考。    1 资料与方法    1.1 研究对象    1.1.1 急性心肌梗死组（AMI组） 共41例，为2002年2月2002年11月在朝阳医院心脏中心CCU病房住院治疗的患者，男28例，女13例，平均年龄60.4±12.8（3680）岁。急性心肌梗死的诊断标准见文献1。所有病人均为症状发生12h以内来院的，并经冠状动脉造影证实为急性心肌梗死。        1.1.2 对照组

9、（NC组） 34例性别、年龄与AMI组匹配的健康人，经胸片、肝、肾功能、尿常规检查未见异常，排除冠状动脉粥样硬化性心脏病、高血压病、心肌病、内分泌及自身免疫性疾病。        1.2 取血 正常对照组取静脉血5ml，AMI组患者分别于发病24h、7天及24周内各取静脉血5ml，2000rpm室温下离心10min，收集上层血清，装入Eppendorf管，-20冰箱贮存待测。    1.3 细胞凋亡抑制因子Fas/APO-1测定    

10、    1.3.1 测定原理 采用上海森雄科技实业有限公司提供的试剂盒，用ELISA法定量检测Fas/APO-1的水平。操作时标准孔及待测样品均做双孔，两孔的平均值作为检测结果。        1.3.2 结果计算与判断 （1）所有OD值都应减去空白值后再行计算。(2)以标准品100、50、25、12.5、6.25、3.2、1.6ng/ml之OD值在半对数纸上作图，画出标准曲线。（3）根据样品OD值在该曲线图上查出相应人血清Fas/APO-1的含量。  &

11、#160;     1.4 受体抗原肽段的合成及血清自身抗体的测定 由中国科学院生物分子研究所，合成相当于人2-肾上腺素能受体细胞外第二环氨基酸序列的特异性抗原决定簇，合成肽段纯度为99%，2-肾上腺素能受体肽段为172197位的氨基酸序列：H-W-Y-R-A-T-H-G-E-A-I-N-C-Y-A-N-E-T-C-C-D-F-F-T-N-G-C。        用SA-ELISA法，以5ug/ml的2抗原液包被酶标板，血清按1：201：160浓度进行倍比稀释，其它

12、检测步骤见文献2。        1.5 判断标准 用比例法，以阳性血清与阴性血清的吸光度之比即P/N比值来判断，P/N2.1为阳性P/N=（标本OD值-空白对照OD值）/（阴性对照OD值-空白对照OD值）。        1.6 统计学处理 使用SPSS统计软件包进行数据分析。计量资料以均数±标准差表示，组间数据比较采用t检验，多组样品的比较采用方差分析；计数资料用2检验，均以P<0.05为差异有显著性，以P<0

13、.01为差异有非常显著性。        2 结果        2.1 将标准品倍比稀释后的浓度及所测得的对应的OD值输入计算机进行数据处理，二者在半对数条件下呈正相关关系，计算出相关方程Y=2.0372e1.7677x，R2=0.9634X为OD值，Y为Fas/APO-1的浓度（ng/ml），R为相关系数。        2.2 AMI后24h、7天及2

14、4周时，Fas/APO-1的水平均高于对照组，且这种差异都有显著性（P<0.05）。AMI后24h Fas/APO-1的水平，明显高于7天及24周时的检测结果，这种差异也有显著性（P<0.05）。具体数值见表1。            作者：陈牧雷，杨新春，刘瑞红，刘秀，张 磊，张 麟【摘】目的检测并比较心肌梗死急性期不同时间点，2自身抗体阳         本篇论文是由3COME文档

15、频道的网友为您在网络上收集整理饼投稿至本站的，论文版权属原作者，请不用于商业用途或者抄袭，仅供参考学习之用，否者后果自负，如果此文侵犯您的合法权益，请联系我们。表1 AMI组与对照组血清中Fas/APO-1比较表注：VS对照组*P<0.11；VS心肌梗死后24h组#P<0.01            2.3 心肌梗死后24h、7天及24周时，2受体自身抗体阳性组Fas/APO-1的水平均高于阴性组，但两组比较差异无显著性(P0.05)。具体结果见表2。 表2 心肌

16、梗死急性期2受体自身抗体阳性组与阴性组Fas/APO-1比较    3 讨论        在急性心肌梗死动物模型中，心肌细胞凋亡在梗死后412h达高峰，并可持续至梗死后10天左右3，这与本实验所得出的，心肌梗死急性期患者血清中Fas/APO-1的水平，均显著高于对照组，且以发病24h时血清中的Fas/APO-1的水平为最高，以后逐渐减低，至24周时显著降低的结果相吻合。促进心肌细胞凋亡的因素很多，如低氧血症、缺血再灌注、持续过度的机械牵拉以及1受体的过度表达或持续刺激等4，

17、5。在细胞凋亡活跃时，血清中的Fas/APO-1可以显著升高，抑制细胞凋亡的进一步发生6，7。        近来的研究表明，2受体在心肌细胞凋亡的调节中也有重的作用，2受体表达的轻度升高，具有抗心肌细胞凋亡的作用5，8。2受体的作用与1受体不同，它除了与刺激性G蛋白（Gs）结合外，还能与抑制性G蛋白（Gi）结合，起到减弱肾上腺素能受体信号系统的作用；此外2受体还能调节非G蛋白依赖性信号系统的作用，起到保护心脏对抗心肌细胞凋亡的作用5，8。当然2受体对心脏的保护作用，是有一定限度的，如果2受体表达轻度升高，可以改善

18、心功能减少心肌细胞凋亡；如果2受体表达过度升高，反而可以诱发心肌细胞凋亡以及纤维化，甚至造成实验动物早死。        2受体自身抗体对2受体有激动剂样作用，所以可能在一定范围内具有对抗细胞凋亡的作用。但是在本实验中，心肌梗死后24h、7天、24周时，2受体自身抗体阳性组Fas/APO-1的水平虽轻度高于阴性组（两组均数的差值分别为0.4971，0.1860，0.4786），可是差异无显著性。产生这一结果的原因可能与下列因素有关：(1)2受体自身抗体的测定不是定量的，阳性组中部分病因自身抗体的浓度过高，对细胞凋亡

19、的作用会变成促进性的，所以影响了两组的比较结果。如能定量检测2受体自身抗体的水平，有望更好地反映它与Fas/APO-1的相关关系。(2)实验例数较少。Fas/APO-1的血清浓度较低，在心肌梗死急性期与对照组的比较中，两组均数的最小差值仅为0.851，但因两组例数均在30例以上，故仍体现出显著的统计学差异。而在2受体自身抗体阳性组与阴性组的比较中，每组的例数仅在20例上下，所以很难体现出如此细微的差别。(3)2受体自身抗体通过多条途径作用于心肌细胞凋亡，这些途径是否与Fas有关尚无定论，所以需更为深入的基础研究提供有关的信息。     

20、0;  结论：血清Fas/APO-1水平可以在一定程度上反映心肌细胞凋亡的变化趋势，如能增加样本量，定量检测2受体自身抗体的水平，有望明确Fas/APO-1与2受体自身抗体的关系，进一步阐明2受体自身抗体在对抗心肌细胞凋亡中的作用，为心肌细胞凋亡的临床治疗提供更多的参考。【参考文献】    1 链激酶多中心临床试验协作组.急性心肌梗死链激酶静脉溶栓疗法的多中心试验.中华心血管病杂志，1991，22：403-405.        2 张麟，刘慧荣，赵荣瑞，

21、等.扩张型心肌病抗心脏1和M2受体的自身抗体的初步研究.中华心血管病杂志，1998，26：15-17.        3 Abbate A，Biondi-Zoccai GG，Baldi A.Pathophysiologic role of myocardial apoptosis in post-infarction left ventricular remodeling.J Cell Physiol，2002，193：145-153.        4 Saraste A，Pulkki K，Kallajoki M，et al.Apoptosis in human acute myocardial infarction. Circulation，1997，95：320-323.        5 Singh K，Xiao L，Remondino A， et al.Adrenergic regulation of cardiac myocyte apoptosis.J Cell Physiol，2001，189：257-265. &