类风湿关节炎患者RA3336抗体角质蛋白抗体及抗核周因子的相关性初步研究

1、    类风湿关节炎患者RA33/36抗体，角质蛋白 抗体及抗核周因子的相关性初步研究        【 摘要 】目的对类风湿关节炎(RA)患者血清中的RA33/36抗体，角质蛋白抗体(AKA)及抗核周因子(APF)进行检测，并对这些抗体间的相关性进行探讨。 方法采用免疫印迹法检测血清RA33/36抗体；采用IIF法检测AKA及APF抗体；采用卡方检验及Fisher?s检验对结果进行统计学比较。 结果RA患者血清中RA33/36抗体阳性率为35.6%(16/45)，

2、AKA(180)阳性率为31.1%(14/45)，APF的阳性率为53.3%(24/45)。 结论虽然RA患者血清中可出现上述三种抗体，但三者间无相关性。【 主题词 】RA33/36抗体角质蛋白抗体抗核周因子类风湿关节炎 Study on the correlation between anti-RA33/36 antibody,anti-keratin antibody and anti-preinuclear factor in rheumatoid arthritis patients Tian Xinping,Jiang Ming,Song Qinfang,et al.Rheumato

3、logy and Immunology Department,Peking Union Medical College(PUMC) Hospital,PUMC,CAMS,Beijing100730Abstract Three auto-antibodies,anti-RA33/36 antibody,anti-keratin antibody(AKA) and anti-perinuclear factor(APF) in the sera of 45 Rhematoid Arthrits Patients were tested by Western-blot assay and indir

4、ect immunofluosence method.The association between these antibodies was assessed.The results showed the positive rates of anti-RA33/36 antibody,AKA and APF were 35.6%(16/45),31.3%(14.45) and 53.3%(24/45),respectively.This indicated that no significant correlation could be found between these autoant

5、ibodies although they could present in RA patients simultaneously.Subject words Rheumatoid arthritis Anti-RA33/36 antibody Antikeratin antibody Anti-perinuclear antibody 类风湿关节炎(RA)是我国最常见的风湿病，其发生率为0.3%。虽然对它的认识已有近千年的历史，但长期以来，除类风湿因子(RF)外，在RA患者血清中几乎未发现其它自身抗体，因此，RA的诊断基本是以临床表现及X线表现为依据。人们在试发现RA患者血清自身抗体方面作出

6、了很多努力。近来渐发现RA患者血清内有RA33/36抗体，角质蛋白抗体(AKA)及抗核周因子(APF)。本研究不仅对RA患者血清中这三种抗体进行了检测，并对三者间的相关性进行了探讨。材料和方法1.RA患者组：共45例，为我院门诊就诊患者，诊断符合1987年ARA RA分类标准1，其中女41例，男4例，男女=110.3，平均年龄为47.5岁(1568岁)，平均病程9.6年。2.方法(1)免疫印迹法检测血清RA33/36抗体：抗原提取自艾氏腹水瘤细胞，具体方法见参考文献2。(2)IIF法检测AKA及APF抗体：实验材料、抗原来源及具体方法参见参考文献3及4。3.统计学检验：采用卡方检验及Fishe

7、r?s精确检验对结果进行比较。结果1.RA33/36抗体结果判定：由于在RA及其它疾病中亦可出现RA33/36抗体，而当分子量为33×103与36×103抗体同时出现时，则在RA患者中特异性较高，因此，我们仅将同时出现RA33/36×103二条带时判断为阳性；以此为标准，共16例阳性，阳性率为35.6%(16/45)。2.AKA结果判定：将棘细胞层及角质层均出现荧光染色，二者界限清楚且亮度相差明显时判断为阳性。当患者血清稀释度较低时，易出现非特异染色，因此，我们将血清稀释至180时仍阳性者判断为阳性，这虽然降低了敏感性，却提高了特异性。共有14例阳性，阳性率为31

8、.3%(14/45)。3.APF：凡是细胞内出现一个荧光染色阳性颗粒者为阳性；共24例阳性，阳性率为53.3%(24/45)。4.RA33/36抗体、AKA及APF的相关性比较：见附表。从表中可以看出，三种抗体间无明显相关性。附表抗RA33/36、AKA和APF的相关性比较Table. Correlations among anti-RA33/36,anti-AKA and anti-APFRA33/36(+)RA33/36(-)APF(+)APF(-)AKA(+)5968AKA(-)1120P=0.411813P=0.84AKA(+)AKA(-)APF(+)APF(+)RA33/36(+)5

9、11106RA33/36(-)920P=0.231415P=0.79RA33/36(+)RA33/36(-)AKA(+)AKA(-)APF(+)1014618APF(-)615P=0.09813P=0.09讨论1964年Nienhuis和Mandema首次在RA患者中检测出了一种不明成分的抗体，由于这些抗体出现于细胞核周围，故将其称为抗核周因子，即APF。之后发现APF对RA诊断的特异性为72.7%905，6，因此，APF不乏为一种可用于诊断RA的指标。但由于APF的作用底物材料不易获得，其抗原成分也不清楚，因此该抗体未能广泛用于临床诊断7。1970年Young等人以Wistar大鼠食管下1/

10、3段的横切面为底物，用间接免疫荧光(IIF)法在RA患者血清中发现了一种局限于角质层的抗体，将其称为角质蛋白抗体，即AKA，并认为它对RA的诊断具有较高的特异性8。1989年Vincent等的研究发现只有在角质层显示线状或板层状的强荧光，而棘细胞层可能同时出现弱荧光时，才能认为AKA阳性，并认为此时的AKA对RA诊断具有特异性。进一步的临床研究发现，AKA阳性患者表现为ESR增快，CRP(C反应蛋白)增高，循环免疫复合物增多，所伴发的关节外表现较多，预后较AKA阴性者差。并认为AKA是判断RA预后的指标之一。此外还发现，AKA阳性的健康人经随诊后，有一部分可发展为典型的RA。因此，AKA可能是

11、RA的早期诊断指标之一9。RA33/36抗体是1989年Hassfeld在RA患者血清内发现的一种自身抗体，有分子量为33×103和36×103二种成分，认为当二种成分同时出现时，对RA诊断的特异性较高。RA33/36抗体出现于RA病程早期，见于33%的RA患者，一旦出现即不再消失；与患者年龄和病程无关，与RA的病情严重性无关，与RF不具相关性10。因此，RA33/36抗体可作为RA早期诊断的指标，但它与临床表现无明显相关性。虽然人们先后发现了上述三种自身抗体，但对三者间的相关性并未进行深入的研究。一般认为，APF由于其敏感性和特异性较高，可用于RA的筛选；而AKA与患者的

12、病情有关，可用于对患者病情及预后的判断，由于AKA和RA33/36抗体出现于RA患者早期，故有助于早期诊断。本研究表明，虽然RA患者中可出现上述三种抗体，但这三种抗体的出现无明显相关性。在研究中我们还发现，在一个患者中可检测出一种、二种抗体，甚至可同时出现上述三种抗体，但也有一部分患者体内检测不出上述任何抗体。目前为止，未发现这二组患者的临床表现有明显差异，这可能与本研究纳入患者人数较少有关。近来人们对HLA-类基因与RA发病及其临床表现的相关性进行了研究，发现DR基因与RF的阳性率相关11。但我们的一项研究发现，DR基因与其它自身抗体如RA33/36抗体、AKA及APF的出现无关。这些抗体的

13、出现是否与类基因的其它位点如DQ、DP有关，或与其它基因有关，尚需进一步研究。 作者单位：100730 北京，中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科(田新平，蒋明，宋琴芳)；中国医学科学院中国协和医科大学检验科(李永哲，崔京涛)参考文献1Arnett FC,Edworth SM,Bloch DA，et al.The american association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis.Arthritis Rheum,1988,31315-324.2周志杰，蒋明，宋琴芳.抗

14、类风湿关节炎36kD和33kD抗体对RA诊断意义的研究.中华内科学杂志，1994，33(4)251-255.3周志杰，蒋明，王慧珍，等.类风湿关节炎的抗角质蛋白抗体角质层.中华内科学杂志，1995，34(5)330-332.4梅树恩，蒋明，王慧珍，等.抗核周因子对RA的诊断意义.中华医学杂志，1995，75(8)507.5Veys EM,Dekeyser F,De Vlank,et al.The anti-perinuclear factor.Clin Exp Rheumatol,1991,8429-432.6Gaby C,Prieur AM and Meger O.Occurence of

15、anti-perinuclear,anti-keratin and anti-RA33 antibodies in Juvenile chronic arthritis.Ann Rheum Dis,1993,52785-792.7Youinou P and Goff PL.There lability of the anti-perinuclear factor test despite the inconstantly of the targeted antigens.J Rheumatol,1994,211190-1196.8Young BJJ,Malya RK,Leslie RDG,et al.Anti-keratin antibodies in rheumatoid arthritis.BMJ,1979,297-99.9Paimela L,Gripenberg M,Kurki P,et al.Antikeratin antibodies:diagnostic and prognostic marker of early rheumato