细胞周期素E和p53同时表达与早期胃癌临床病理的关系

1、细胞周期素E和p53同时表达与早期胃癌临床病理的关系【摘要】目的探讨细胞周期素 E和p53的同时表达在早期胃癌进展中的意义。方法用免疫组化法检测97例早期胃癌中细胞周期素 E和p53的表达。结果早期胃癌中细胞周期素 E和p53的表达显著相关，二者的同时表达率为19%（18/97）。同时表达的早期胃癌中，平均肿瘤最长径(2213) mm，幽门部发生率30%（15/50），分化型占26%（18/70），淋巴管浸润率35%（11/31），均显著低于或高于对照组；淋巴结转移率38%（5/13），静脉管浸润率39%（7/18），均高于对照组。同时表达的18例中，5年生存率仅为61%(11/18)，而细胞

2、周期素E与p53均阴性者5年生存率为90%(P0.004)。结论细胞周期素 E和p53的同时表达很可能参与和促进了早期胃癌的进展，对两者同时表达者应给予更积极的治疗。【关键词】免疫组织化学病理学胃肿瘤 The coexpression of cyclin E and p53: correlation with clinicopathological features in early gastric cancerLI Jiaqing, CAI Wenyan, WUAN Yuanlian.Department of General Surgery, The First Hospital, Bei

3、jing Medical University, Beijing 100034【Abstract】ObjectiveTo investigate the significance of co-expression of cyclin E and p53 in the progression of early gastric cancer. MethodsThe expression of cyclin E and p53 were examined by immunohistochemical method in 97 patients with early gastric cancer. R

4、esultsThe expression of cyclin E was significantly related with that of p53 and the incidence of co-expression of cyclin E and p53 was 18% (18/97) in early gastric cancer.The average diameter of the early gastric cancers with co-expression was （2213） mm, the incidence in antrum was 30% (15/50), the

5、rate of differentiated type was 26% (18/70), the incidence of lymphatic vessel invasion was 35% (11/31), all these parameters were significantly worse than in control groups. As to the carcinomas with co-expression, the incidence of lymph node metastasis was 38%(11/31), the rate of venous vessel inv

6、asion was 39%(7/18); both of the incidences tended to be higher than in their negative control groups. The 5 year survival rate of patients with co-expression was 61%(11/18),vs. 90% in negative cyclin E and p53 controls (P0.004). ConclusionThe co-expression of cyclin E and p53 may promote the progre

7、ssion of early gastric cancer. The patients with co-expression should be given more aggressive postoperative treatments.【Key words】ImmunohistochemistryPathologyStomach neoplasms 尽管医学进展已使早期胃癌的预后明显改善，但仍有部分患者预后不良。鉴别出早期胃癌中细胞生物学特性较恶者，对于及时确定治疗方案和进一步改善患者预后具有重要意义。已证实突变型p53不仅失去了正常野生型p53对细胞生长的抑制作用，而且具有癌基因的功能。

8、1991年首次发现了细胞周期素E（Cyclin E），近来又证实其表达与细胞的肿瘤变形密切相关，并且可能参与了肿瘤的发生发展1，2。最近我们的研究表明，Cyclin E的表达参与、促进了早期胃癌的进展（结果待发表）。同时基础研究提示，Cyclin E和p53的表达之间可能存在某种关系3。因此，与只有单独的Cyclin E或p53表达及二者均无表达的肿瘤相比，二者同时表达的早期胃癌可能具有恶性程度较高的细胞生物学特性；并且同时表达在早期胃癌的发展中可能起不良作用。本文旨在探讨Cyclin E和p53的同时表达在早期胃癌进展中的作用，以期进一步改善早期胃癌中预后较差者的治疗和预后。材料与方法一、标

9、本取19791992年间日本鹿儿岛大学医学院第一外科连续手术切除的早期胃癌97例，其中男72例，女25例。平均年龄64岁（3185）。标本经10福尔马林固定、石蜡包埋。每例标本均选择既包括肿瘤中心又含肿瘤边缘的石蜡块1个，制成3张3微米连续切片后分别经抗Cyclin E、抗p53单克隆抗体和HE染色。早期胃癌临床病理特征的诊断依据为日本胃癌研究的一般规则(第12版)。其肉眼观察类型分为隆起型、凹陷型及混合型。组织学类型分为分化型（包括乳头状与管状腺癌）和未分化型（包括印戒细胞癌、粘液与低分化腺癌）。二、免疫组化染色切片按免疫组织化学法染色2，药盒为Histofine (日本Nichirei公司

10、)产品。二甲苯脱腊后的组织切片经酒精水化后，浸入0.3的双氧水中30分钟，以阻断内源性氧化酶的活性，然后在0.01 mol/L、pH 6.5、100的柠檬酸缓冲液内加热30分钟，以充分暴露抗原。分别经抗Cyclin E单克隆抗体(Santa Cruz生物技术公司，1600倍稀释)和抗p53单克隆抗体（Transduction实验室, Lexington, KY, 美国，1:500倍稀释）4孵育至少12小时后，室温下切片再分别与兔抗鼠血清反应20分钟，过氧化酶复合物反应15分钟。随后Cyclin E及p53染色经二胺基联苯胺四盐酸盐分别显色2分钟和5分钟，再经苏木精复染1分钟，脱水、透明、封片。

11、三、结果评价每张切片选择5个不同的代表性区域（即切片的中心及上、下、左、右四边），分别进行细胞计数。每个区计数200个细胞，5个区共1000个细胞，计算染色细胞所占比例。Cyclin E和p53的染色结果分为：阴性(-)，其染色细胞数小于或等于5；阳性(+)，染色细胞数大于52。四、统计处理使用Statview 4.5版统计软件。 Cyclin E和p53的同时表达与年龄和肿瘤大小的关系采用H检验，与其它临床病理特征的关系采用2检验，与预后的关系采用Kaplan-Meier检验中的Logrank法。结果一、Cyclin E和p53的关系Cyclin E阳性组比阴性组显著频繁地表达了p53(表1

12、)。 1、2显示1例表达Cyclin E的早期胃癌也同时表达了p53。18例（18/97，18%）早期胃癌同时表达了Cyclin E及p53(1，2)。二、临床病理特征与同时表达的关系表2显示Cyclin E与p53同时表达的早期胃癌，肿瘤最大径显著短于二者均无表达者；同时表达者肿瘤主要发生在胃的幽门部，全部为分化型，淋巴管浸润的比例显著较高，淋巴结转移和静脉浸润的比例也倾向较高。三、预后与同时表达的关系Cyclin E与p53同时表达组的5年生存率显著低于非同时表达组(表3)。表197例早期胃癌Cyclin E与p53表达的关系Cyclin E表达例数p53表达阴性（%）阳性（%）阴性625

13、0(81)12(19)阳性3517(49)18(51) 注：2值=16.123，P0.01 1癌上皮细胞被抗Cyclin E单克隆抗体染色4002同一病例的癌上皮细胞也同时被抗p53单克隆抗体染色400 表297例早期胃癌中临床病理特征与Cyclin E和p53同时表达的关系临床病理特征例数Cyclin E和p53的表达2值P值Cy-p53-(%)Cy-p53+(%)Cy+p53-(%)Cy+p53+(%)总计9750(52)12(12)17(18)18(18)平均年龄(岁)59136913641168910.648005平均肿瘤最长径(毫米)3320211522922137.987005肿瘤

14、位置贲门部2116(76)0(0)4(19)1(5)18.084001胃体部2613(50)7(27)4(15)2(8)幽门部5021(42)5(10)9(18)15(30)组织学类型分化型7029(41)11(16)12(17)18(26)14.230001未分化型2721(78)1(4)5(18)0(0)淋巴管浸润无6637(56)10(15)12(18)7(11)9.193001有3113(42)2(6)5(16)11(35)淋巴结转移无8443(51)11(13)17(20)13(15)6.117005有137(54)1(8)0(0)5(38)静脉浸润无7943(54)10(13)15

15、(19)11(14)6.158005有187(39)2(11)2(11)7(39) 注：Cy-p53-，Cyclin E、p53的表达同时呈阴性；：Cy-p53+，Cyclin E表达呈阴性而同时p53表达呈阳性；：Cy+p53-，Cyclin E表达呈阳性而同时p53表达呈阴性；：Cy+p53+，Cyclin E、p53的表达同时呈阳性。：H检验的H值 表3Cyclin E和p53同时表达与早期胃癌预后的关系Cyclin E和p53的同时表达情况例数5年生存例数百分比（%）Cyclin Ep53494490Cyclin Ep53121083Cyclin Ep53161488Cyclin Ep

16、53181161* 注：P值001*分别与其它3组5年生存率比均有显著差异 讨论Cyclin E系周期素依赖激酶2 (Cyclin-dependent kinase 2, CDK2) 和CDK抑制者在细胞周期的G1晚期分别促进和抑制G1向S期的过渡。正常情况下，作为一种细胞内核蛋白的Cyclin E是有顺序、按计划进行表达的。合成开始于G1中期，最大化表达出现在细胞进入S期的时刻，降解发生在S期内，在G2期和M期不存在。而CDK2在整个细胞周期中均有表达且水平不变，故Cyclin E只能在G1晚期和S早期激活CDK2以促使G1/S过渡4。作为CDK2抑制者的野生型p53，不仅通过激活p21抑制

17、细胞周期进程，而且还通过调控GADD45的转录抑制细胞的生长。异常情况下，Cyclin E由于无顺序、无计划的过度表达而存在于整个细胞周期中，其可持续性地在整个细胞周期中激活CDK2去磷酸化底物，进而驱使细胞超越某些控制机制发生异常增殖4。突变型p53不仅失去了正常野生型p53对细胞生长的抑制作用，而且具有癌基因的功能。提示Cyclin E和p53的同时过度表达者，可能具有较恶的细胞生物学特性。早期胃癌中，Cyclin E阳性者比阴性者显著频繁地表达p53，与同时包括早晚期胃癌病例的研究结果一致2。在接触性抑制细胞中，Cyclin E过度表达能恢复p53的活性3。本结果提示，早期胃癌中过度表达

18、的Cyclin E与p53之间可能具有某种相互促进的关系。采用免疫组织化学方法，我们首次观察到了以下重要现象：(1)同时表达Cyclin E和p53的早期胃癌浸润淋巴管的比例较高，发生淋巴结转移的可能性较大和出现静脉管浸润的可能性较大，因Cyclin E 或p53过度表达的胃癌细胞增殖较快5。结果表明，同时表达的早期胃癌具有较强的能力浸润淋巴系统和静脉管，其细胞生物学恶性程度较高，两者同时表达，可增强癌细胞的浸润能力。具有Cyclin E基因扩增的胃癌淋巴结转移率高6，也从基因水平支持此结论。(2)同时表达者5年生存率显著低下，这可能与此类肿瘤频繁浸润淋巴系统及静脉管有关，证实同时表达者生物学

19、恶性程度较高，故对有同时表达的早期胃癌应该采取更积极的治疗措施。(3)同时表达只发生在分化型早期胃癌，提示分化型和未分化型胃癌的细胞增殖机制可能有所不同，并提示分化型早期胃癌中有同时表达者，其细胞生物学恶性度也可能较高。(4)同时表达的早期胃癌多发生在幽门部且体积小。同时表达很可能参与和促进了早期胃癌的进展，同时表达癌浸润淋巴系统的能力较强且预后较差，对Cyclin E和p53同时表达者，需要采用更加积极的综合治疗措施。志谢：感谢日本鹿儿岛大学医学院第一外科爱甲孝教授对本研究的指导。作者单位：100034 北京医科大学第一医院普外科参考文献1 Thenaa KS，Daniel M. Cell

20、cyclins and cyclin-dependent kinase activities in mouse mammary tumor development. Carcinogenesis, 1995, 16: 823-30.2Yasui W, Akama Y, Kuniyasu H, et al. Expression of Cyclin E in human gastric adenomas and adenocarcinomas: correlation with proliferative activity and p53 status. J Exp Ther Oncol, 1996, 1:88-94.3Deffie A, Hao MM, Oca-Luna RMD, et