呼吸道病毒九联检技术讲解-课件

1、呼吸道病毒九联检技术九项呼吸道感染病原体IgM抗体 l采用间接免疫荧光法（IFA）l同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM抗体l用于呼吸道感染疾病的辅助诊断。 可检的病原体包括：可检的病原体包括：l嗜肺军团菌血清1型、l肺炎支原体、lQ热立克次体、l肺炎衣原体、l腺病毒、l呼吸道合胞病毒、l甲型流感病毒、l乙型流感病毒l副流感病毒1、2和3型。.检测原理检测原理 l间接免疫荧光法IFAl基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。l样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。l在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应l用免疫荧光

2、显微镜观察结果。 试剂盒组成及用途试剂盒组成及用途 简明操作程序简明操作程序 结果判断结果判断l有效性判断有效性判断l每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性。观察到的荧光模式应为：l阳性对照阳性对照：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性质控的1-15%细胞出现苹果绿细胞核、胞浆或胞膜荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿荧光；支原体对阳性质控在细胞外围呈现苹果绿色荧光。l阴性对照阴性对照：军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的

3、细胞呈现红色。阳性结果荧光图谱阴性结果荧光图谱 样本结果判断样本结果判断 l阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。样本结果判断样本结果判断 l阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。临床灵敏度和特异性临床灵敏度和特异性 病原体对比方法样本数量阳性符合率阴性符合率

4、嗜肺军团菌IFA8294.4%98.4%肺炎支原体ELISA6296.8%100.0%Q热立克次体IFA74100.0%97.6%肺炎衣原体IFA61100.0%98.0%腺病毒ELISA7485.7%97.0%呼吸道合胞病毒ELISA9793.8%100.0%甲型流感病毒ELISA4694.1%96.4%乙型流感病毒ELISA40100.0%96.4%副流感病毒ELISA36100.0%96.3%对所需检测的样本要求 l仅适用与于检测人血清。l其血液采集需由专业人员无菌静脉穿刺采集。建议使用消毒或无菌技术，以保持样本的完整性。l血清样本采集后如不在8小时内检测应28 C冷藏，如7天内不检测，

5、则应冷冻（-20C）保存。l不要反复冻融以防止免疫球蛋白滴度降低，特别是IgM。l不要使用高血脂或污染的血清。若样本中含有微粒要离心使之澄清。 呼吸道感染病原体IgG/M抗体检测 l在感染早期采集的样本可能是检测不到IgG的，在这种情况下可采用IgM检测，或者在14-21天后采集第二个血清样本，并与原标本同时检测来确定是否发生血清转换。l在初次感染和再次感染的过程中，IgG和IgM抗体有不同的表现方式：初次感染时，几乎在所有的情况下IgM和IgG均出现（IgM早于IgG出现）；而再次感染时，可能不出现IgM，因此IgG的检测是唯一有用的诊断方法。l在许多疾病中病人的一生都可能存在高滴度的IgG，而IgM一般情况下仅在感染后23个月存在于