忍冬藤菇的成份测定与药理研究

1、忍冬藤菇的成份测定与药理研究张 谦（临沂市农业科学院，山东 临沂 276012）摘要 目的：主要研究忍冬藤菇的有效成份和药理作用。方法：通过形态学鉴定、药理成份分析、药理和毒理实验等方面进行研究。结果：从该菌中测得微量元素23种，氨基酸16种和大量多糖，硅元素含童丰富。实验证实本菌有抗病毒、抗炎作用，对Hela细胞有毒性，对S180瘤细胞有抑制作用，毒性低，LD50>200g/kg，未发现副作用。结论：忍冬藤菇具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤以及免疫调节作用。关键词 忍冬藤菇；化学成份；药理学忍冬藤菇是生长在忍冬根部的一种子实体，属环棱褐孔菌，当地俗称“银花蛾子”。民间常作验方治疗急性上呼吸道感

2、染、扁桃体炎等疾病。迄今未见对该菌进行有效成份和药理的研究。我们自1994年1月-1996年6月对忍冬藤菇的一般性状、药理成份及作用机制、毒理试验等方面进行初步研究，现将有关研究报告如下。1 一般性状研究1.1 命名该菌经鉴定，属多孔菌科，定名为环棱褐孔菌xanthochrous nilgheriensis（Mont)Teng，属真菌门，担子菌亚门，层担子菌纲，多孔菌目，多孔菌科，褐孔菌属。1.2 形态菌体外观呈半圆形，菌盖硬而韧，赤酱色或浅栗色，有同心环状棱纹及微细绒毛，大小约1.5-4×3-4×3-7cm。边缘薄，稍钝，深肉桂色。菌肉深咖啡色，厚2-2.5mm。菌管与菌

3、肉同色，菌管长l-2mm，管口浅肝褐色，圆形，每毫米7-8个。孢子呈广椭圆形，近球形，浅棕褐色，直径近3µm。1.3 生态习性及分布该菌主要寄生于忍冬根茎部和雪柳及阔叶树的腐木上，复瓦状叠生，国内主要分布于山东省沂蒙山区、辽宁省、广东省、海南省等地。2 有效成份分析2.1 材料来源 检测所用环棱褐孔菌系当地忍冬根部采集的优质真菌子实体。2.2 检测方法2.2.1 徽量元素检测方法 微量元素检测采用美国PEZ-500型塞曼原子吸收分光光度计、日本岛津AA-610，AA-640型原子分光光度计、北京产XDY-l型双道原子荧光光度计、日本理光3080E型X荧光光谱仪和微型核反应堆-中子活化

4、分析仪。以X荧光与中子活化采用固体样品直接分析和原子吸收分析样品处理，并利用干法和湿法两种方法检测。(1)干法：首先取样品置于盐酸处理过的铂坩锅中，放入马福炉内，缓慢升温，在有充分氧气的情况下至550，保温两小时，取出冷却后加入10ml HF，lml HNO3，加热蒸至白烟冒尽，补加lml HNO3，加热水溶可溶性盐类，定量50ml待测。分别采用火焰法、石墨炉法、冷原子法、氢化物法测定各元素。2.2.2 氨基酸测定方法 氨基酸测试应用日本产835-50型氨基酸分析仪，取样品后以常规国标G-T/4965-94食物中氨基酸的测定方法进行分析测定。2.2.3 多糖和其它物质的测定方法 多糖分析采用P

5、E-7800红外光谱仪测定，分别测定药材的乙醚提取物、丁酮提取物、水提取物等。多糖提取采用Sevage法(见附图)。2.3 测定结果2.3.1 微量元素测定结果 见表1。表1 微量元素测定结果µg/g元素含量元素含量元素含量Si18000Zn74Pb12.82Ca3800Mn173Sn<1Fe7900Li4.55As1.0Mg5700Sr98Se0.13K6800Co1.45Hg0.15Na4400Ni3.71I1.79P1900Cd0.27Br0.87Cu34Cr7.752.3.2 氨基酸含量 见表2。表2 氨基酸含量分析结果(g/kg)氨基酸含量氨基酸含量门冬氨酸9.74蛋

6、氨酸23.92苏氨酸5.73异亮氨酸9.23丝氨酸5.55亮氨酸6.23谷氨酸9.99酪氨酸3.93脯氨酸4.48苯丙氨酸4.19甘氨酸4.72赖氨酸4.44丙氨酸5.95组氨酸2.11缬氨酸4.65精氨酸3.762.3.3 预测红外光谱结果解析显示 水提取物主要含有多糖、糖蛋白、氨基酸等，多糖得率1.13%；乙醚提取物主要含有萜类化合物(Liebermannburehard反应阳性)、生物碱(Dragendorff试剂反应阳性)；丁酮提取物主要含有甙类、多糖。3 药理研究与毒性试验3.1 抑制病毒试验3.1.1 实验用病毒株 流感病毒(国家代表株)A3/京防/32/92；B/沪防/3/91；

7、呼吸道合胞病毒、腺病毒标准株。3.1.2 实验方法 采用固定药液稀释病毒法。抑制流感病毒：采用鸡胚囊体内法，根据羊水血凝情况判断抑制效果。抑制合胞病毒、腺病毒：分别接种于敏感细胞，根据细胞病变情况判定抑制效果。3.1.3 结果 抗病毒试验显示忍冬藤菇水提液对甲、乙两型流感病毒均有轻抑制效果。药物毒性试验显示72h内鸡胚可生存，对Hela细胞有毒性。3.2 抗炎作用及急性毒性研究3.2.1 材料 药品 忍冬藤菇水提液(lg生药/ml)；仪器 722光栅分光光度计、电子天平、游标卡尺。动物 昆明种小白鼠，兼用，体重18-22g(山医大实验动物中心提供)。3.2.2 方法对小鼠毛细血管通透性的影响。

8、小鼠随机分为5组，忍冬藤菇水提液20ml、l0ml、5ml/kg、地塞米松0.15mg/kg及等容量生理盐水组。连续灌胃给药3d，末次给药lh，各鼠iv伊文氏蓝溶液0.lml/kg，15min后，在各鼠腹部脱毛区涂二甲苯0.02ml/只，再15min后，将小鼠脱颈处死，剥开腹部皮肤，测蓝染面积的长短径，求出平均值为直径，计算蓝染面积。并将蓝染部位剪下，剪碎后置4ml丙酮生理盐水混合液(7：3)浸泡20h，测浸泡液的吸光度值(=620nm)，详细结果见表3。表3 忍冬藤菇水提液对小鼠毛细血管通透性的影响(±S)药物剂量(g/kg)动物数蓝柒面积（mm2）吸光度N.S-12213.1&#

9、177;33.80.146±0.055忍冬藤菇20(ml/kg)10175.9±35.5*0.097±0.031*10(ml/kg)12205.4±37.60.108±0.0445(ml/kg)10181.5±44.00.105±0.052地塞米松0.15(mg/kg)11170.0±30.87*0.097±0.047*与N.S组对比，*P<0.05，*P<0.001急性毒性试验。取体重2g的昆明种小白鼠20只，各半，禁食8h后每鼠灌药给予忍冬藤菇水提液100ml/kg，24h连续灌药2次，观

10、察7d内各鼠的变化。3.2.3 结果 对小鼠毛细血管通透性影响试验结果显示，与生理盐水组相比，忍冬藤菇20ml/kg组和地塞米松组缩小二甲苯致小鼠腹部炎症的蓝染面积明显，P值分别小于0.05和0.01，且吸光度值明显降低，p值均<0.05。急性毒性试验结果显示小鼠体重增加，未发现动物死亡及行为活动的改变，表明该药毒性很低。LD50>200g/kg，相当于人药用量(1g/kg)的200倍以上。3.3 抑瘤试验3.3.1 材料和方法 动物：昆明种小鼠50只，体重18-22g(由山东省动物中心提供)。小鼠S180瘤种。忍冬藤菇水提液(1g/ml，相当于生药量)；呋喃氟脲嘧啶(FT-20)

11、作为阳性对照物。方法 抽取S180瘤种腹水+生理盐水稀释成每毫升含瘤细胞2.5×107，无菌条件下注入小鼠右腋皮下0.2ml瘤液，次日将50只小白鼠分为4组。阴性对照组20只，给5%淀粉液，每鼠0.8ml。其余各组为10只。阳性对照组给FT-20混悬于5%淀粉液中，每鼠0.8ml(相当于2.8mg)。试验组于接种瘤细胞后次日给药，两组剂量分别为0.8ml、0.4ml。给药途径为灌胃，每日一次，连续11天。停药后次日处死小鼠，解剖瘤组织，称瘤重，计算抑瘤率，用t检验评价疗效。3.3.2 结果 抑瘤结果见表4。结果显示忍冬藤菇水提液对S180瘤细胞有一定抑制作用，抑瘤率49.3%，低剂量

12、组为40.7%，与阴性对照组相比有显著性差异。表4 忍冬藤菇水提液对5180瘤细胞的抑制效果组别剂量(ml/只)动物数平均体重(g)治疗天数瘤重(±S)抑瘤率(%)P值开始结束开始结束阴性对照0.8201820.521.8111.40±0.68阳性对照2.8mg101020.525.0110.87±0.3237.8<0.01治疗组0.8101020.522.5110.69±0.7549.3<0.05治疗组0.4101020.522.2110.83±0.4840.7<0.054 讨论4.1 药物成份分析显示，忍冬藤菇含有氨基酸16种，有8种为人体必需氨基酸，有较高营养价值。测得微量元素23种，其中Si含量丰富，达18000µg/g，有较高的药用开发和保健品开发价值。本品含多糖丰富，Sevage法多糖得率为1.13%，可能是其抗病毒和发挥免疫调节作用的药理基础。4.2 药理试验证实，本品有抗病毒、抗炎作用，对甲、乙两型流感病毒有抑制效果，对Hela细胞有毒性。其水提液具有缩小二甲苯致小鼠腹部皮肤炎症的蓝染面积，降低浸泡液的吸光度值，可降低毛细血管的通透性。4.3 抑瘤试验结果显示，本品水提液对S18