微生物实验室培养基质量控制

1、微生物实验室培养基质量控制宁夏疾病预防控制中心刘 翔培养基控制的目的培养基定义、组成与分类培养基的质量控制培养基使用中常见问题养基质量控制应该形成的记录培养基质量控制的目的 为获得准确、可靠的数据，只有对培养基进行有效的监控，才能从根本上保证检测结果的可信和有效。培养基定义、组成与分类定义：按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需要的各种营养物质，由人工配置的营养基质，专供微生物培养及分离鉴别、研究和保存专用。组成：碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子和水六大类营养物质。分类：物理状态、功能和制备工艺物理状态：液体培养基、固体培养基和半固体培养基。功能：基础培养基、选择性培养基和鉴别培养基。制备工艺

2、：自行配置、干燥培养基和即用型培养基。培养基分类培养基质量控制依据ISO/TS 11133.1-2000 ISO/TS 11133.1-2000 食品和动物饲料的微生物食品和动物饲料的微生物学学 培养基制备和生产导则培养基制备和生产导则 第第1 1部分部分 实验室培养基实验室培养基制备的质量保证一般导则制备的质量保证一般导则ISO/TS 11133.2-2003ISO/TS 11133.2-2003食品和动物饲料的微生物学 培养基制备和生产指南 第2部分：培养基性能试验实用导则 SN/T1538.1-2005：实验室培养基制备质量保证通则 SN/T1538.2-2007：培养基性能测试实用指南

3、WS/T232-2002：商业性微生物培养基质量检验规程干粉培养基的质量控制干粉培养基的质量控制 培养基制备过程控制 称量、溶解、分装、灭菌 理化学指标的质量控制 色泽、水分含量、澄清度、PH值及凝胶强度 微生物学指标的质量控制指标生长率（定量方法和定性方法） 选择性（半定量方法和定性方法） 特异性（定性方法）微生物学指标的质量控制方法 各类培养基指控指标： 基础培养基（生长率） 选择性增菌液（生长率、选择性） 选择性分离培养基（定性方法） 生化鉴定培养基 计数类培养基（生长率、选择性和特异性） 适用于基础培养基：此类培养基含有适合大多数微生物生长需要的营养物质。例：脑心浸液肉汤培养基（BHI

4、）质控菌株营养苛求菌 乙型溶血性链球菌 短小芽孢杆菌测定方法 制备108菌悬液，10倍梯度稀释至10-8。 选取适宜的3-4个连续稀释度接种于9mL待检测培养基中，每个稀释度3管，35-37 培养3d。 接种管2/3生长的最高稀释度即为该培养基的灵敏度灵敏度测定法（可以用定性方法代替）混合增菌法（定量）适用于选择性增菌培养基： 此类培养基含有目标菌生长需要的特殊营养物质，及抑制非目标菌生长的抑制剂。例：亚硒酸盐胱氨酸增菌剂（SC肉汤）质控菌株鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌测定方法将沙门氏菌和大肠埃希氏菌的新鲜肉汤培养物按照1：99进行混合，接种于SC肉汤中，36培养18-24h将培养物适当稀释，

5、去稀释液0.1mL涂布MAC平板结果：平板上应90%以上为沙门氏菌、大肠埃希氏菌应10%。适用于选择分离培养基： 此类培养基含有目标菌生长需要的特殊营养物质，及抑制非目标菌生长的抑制剂。 从菌落数量上判断分离培养基对目标菌的选择效果，以及对非目标菌的抑制性。 目标菌的回收率要求在70%以上，并具有典型菌落特征。 非目标菌全部被抑制或部分抑制。回收率测定法质控菌株的选择生化性状典型的强阳性质控菌株生长相对较弱的阳性质控菌株不具备目标菌典型反应特性的质控菌株生长被抑制的阴性质控菌株回收率测定法例1：XLD培养基回收率测定法（定量和定性）例2：沙门氏菌显色培养基 沙门氏菌：紫红色菌落 大肠埃希氏菌：

6、蓝色菌落 奇异变形杆菌：无色菌落 弗氏志贺氏菌：无色菌落 金黄色葡萄球菌：抑制回收率测定法例3：李斯特菌显色培养基 李斯特氏菌属：蓝色菌落 单增和绵羊李斯特氏菌：蓝色菌落,周围有白色不透明晕圈 大肠埃希氏菌：抑制回收率测定法生化鉴定方法适用于生化鉴别培养基： 此类培养基用于检测细菌生理、生化特性，借助于某些微生物所特有的某种酶，对培养基中某一特有成分进行分解，致使培养基中PH值发生改变，再通过指示剂颜色的变化鉴定微生物的生化特性，从而判别微生物属于哪一类型，如KIA、TSI、MIU等。A：未接种培养基B：斜面变碱/底部变酸/ 少量H2S/气体-（伤寒沙门菌）C：斜面变碱/大量H2S/气体+ （

7、鼠伤寒沙门氏菌）D：斜面变碱/底部变酸/ H2S-/气体-（福氏志贺菌）E：斜面变酸/底部变酸/ H2S-/大量气体（大肠埃希菌）F：非发酵/ H2S-/气体-（铜绿假单胞菌） 用于鉴别革兰氏阴性肠杆菌，该培养基含有三种可发酵的碳源即葡萄糖0.1%、蔗糖1%和乳糖1%，被菌体利用产酸，可使酚红指示剂变色。另外某些菌能还原Na2S2O3产生H2S，与硫酸亚铁铵中的亚铁离子反应生成黑色的FeS，而使培养基变黑。例1： KIA（TSI）在同一试管里验证细菌动力、尿素和吲哚产生情况。孵育18-24h，先观察动力、，然后加入Kovacs 试剂检测吲哚的产生注意：一次垂直穿刺接种，离底部1cm处停止，不可

8、多次穿刺，或接种针有弯曲或扭曲。例2：MIU琼脂A：动力-/尿素+/吲哚+（产酸/肺炎克雷伯属） B：动力+/尿素+/吲哚-（奇异变形杆菌）C：动力+/尿素-/吲哚-（沙门氏菌属）CAB例3：西蒙氏枸橼酸盐培养基未接种管绿色（A）鼠伤寒沙门氏菌阳性：培养基变为蓝色（B）大肠埃希氏菌阴性：培养基为绿色（C）产气肠杆菌阳性：培养基变为蓝色（D）ADCB培养基使用中的注意事项容器密闭不适应带来的影响肠道菌增菌肉汤：灭菌时应使用透气性较好的试管塞，如用硅胶塞，则不宜盖得太紧。LST：如果试管塞过紧，影响排气，可能导致灭菌后小倒管中仍有气泡。三糖铁琼脂：培养时不宜将试管塞塞得过紧。MIU琼脂：接种完毕要换成橡胶塞。培养基使用中的注意事项培养基保存的注意事项培养基的保存条件：避光保存于阴凉干燥处，使用后，拧紧瓶盖，避免吸潮、氧化或污染。保质期：一般未开封的培养基可保质年，已开封的可保质半年，在瓶体注明开封日期。个别品种如保存不当，极易变质，如SC增菌液，建议冷藏保存，可延长保质期。制备好的平板：冰箱可以保存最多3个月，含有添加剂或抗生素的培养基即配即用。培养基质控记录入库登记记录配置记录高压灭菌记录技术验收记录