梓醇对L_谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用

1、1258 研究简报中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2008Sep;24(9):12589梓醇对L 谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用王金红,康 白,胡雅儿,夏宗勤22(1.潍坊医学院药理学教研室,山东潍坊 261042;2.上海交通大学医学院细胞调控研究室,上海 200025)5mmol L-1L Glu持续损伤24h,即细胞培养至72h进行指标检测。1.2.2 细胞存活率测定(MTT法) 细胞分为正常对照组、L Glu损伤模型组、梓醇终浓度1、10和100 mol L-1组,同时设空白对照。检测时每孔加5g L-1MTT溶液20 ,l使终浓度0 5

2、g L-1,37孵育4h,弃上清液,加DMSO150 ,l振荡10min,酶标仪测490nm的光密度(OD)。细胞存活率/%=用药组细胞OD/对照组细胞OD!100%。1.2.3 细胞M受体密度测定 细胞分组同上,参照文献方法测定4。1.2.4 K252a对梓醇升高M受体作用的影响 分为正常对照组,L Glu损伤模型组,梓醇终浓度100 mol L-1保护组和200nmol L-1K252a干预梓醇保护组。K252a干预组细胞在加梓醇保护前1h,即细胞培养至23h预先加入终浓度200nmol L-1的K252a干预,余处理同前。1.3 统计学分析 所有数据以 x#s表示,单因素方差分析进行配对

3、统计检验。2 结果2.1 梓醇对PC12细胞存活率的影响 正常对照组细胞存活率为100%,L Glu5mmol L-1损伤细胞24h,细胞存活率下降为62 4%(P<0 01);与模型组比较,梓醇1 mol L-1无明显影响(细胞存活率63 1%),10 mol L-1保护组细胞存活率有所提高69 7%,但差异无统计学意义(P>0 05),100 mol L-1保护组细胞存活率升高至对照组的79%,比模型组提高(P<0 01)。2.2 梓醇对PC12细胞M受体密度的影响 L Glu作用24h后细胞M受体密度明显下降,由正常的41 69pmol g-1protein下降至22

4、26pmol g-1protein(P<0 01)。梓醇对其降低的M受体密度有上调作用,10及100 mol L-1浓度保护组细胞M受体密度较模型组均升高,分别为26 62、34 69pmol g-1Pro(P<0 05和P<0 01)。2.3 K252a对梓醇升高PC12细胞M受体密度的影响 多批实验重复(n=9)检测结果显示,提前1h加K252a阻断神经营养因子作用途径,100 mol L-1梓醇对M受体密度的保护作用明显减弱(26 33pmol g-1Pro),与单纯梓醇作用组31 88pmol g-1Pro比较,P<0 05,但是与模型组21 44pmol g-

5、1Pro比较M受体密度仍有升高(P<0 05),说明K252a能够部分减弱梓醇的作用,但不能完全阻断。3 讨论Glu是哺乳动物脑内主要的兴奋性氨基酸神经递质,参认学习触可6等但量的Glu响CatalpolattenuatesPC12cellsinjuryinducedbyL glutamate112WANGJin hong,KANGBai,HUYa er,XIAZong qin2(1.DeptofPharmacology,WeifangMedicalCollege,WeifangShandong 261042,China;2.CellRegulatoryLabofShanghaiJiao

6、tongUniversitySchoolofMedicine,Shanghai 200025,Chi na)中国图书分类号:R284 1;R329 2;R329 24;R392 11;R745 7;R977 4文献标识码:A 文章编号:1001-1978(2008)09-1258-02关键词:梓醇;PC12细胞;L 谷氨酸;M2受体密度Keywords:catalpo;lPC12cel;lL glutamate;M2receptordensity 梓醇是地黄中含量较高的活性成分,研究表明其对动物模型及培养细胞有明显神经保护作用13。本室研究发现,梓醇可保护A 2535损伤PC12细胞及脑内注射

7、A 2535拟AD小鼠的胆碱能神经系统功能,改善AD的病理变化,但其作用机制不明,既不是胆碱酯酶抑制剂,也不是M受体激动剂或阻断剂4。兴奋性神经递质谷氨酸(glutamate,Glu)神经毒性在AD发病过程中起重要作用对此进行了研究。1 材料与方法1.1 材料 梓醇为本实验室从鲜地黄经乙醇和正丁醇提取,高效液相色谱和质谱鉴定纯度>95%。DMEM高糖培养液(Gibco,USA),MTT、L Glu(Sigma,USA),H QNB(Amer sham公司,比活度1 54PBq mol-1)。1.2 方法1.2.1 细胞培养 PC12细胞由中国科学院上海细胞生物研究所提供。DMEM培养液内

8、含体积分数为0 1的胎牛血清、1!10U L青霉素和100mg L链霉素。细胞长至铺满瓶底约90%时收集,加DMEM稀释后均匀接种,24h换液并加入不同浓度梓醇预处理细胞,正常对照和模型组细胞加等体积生理盐水。继续培养24h后(除外正常对照组)加收稿日期:2008-04-11,修回日期:2008-05-20作者简介:王金红(1972-),女,博士,副教授,研究方向:神经药理学,Te:l0536 2602500,E mai:lwangjinhong1972;康 白(1955-),女,教授,硕士生导师,研究方向:神经内分泌药理学,Te:l0536 2602014,E mai:lkb615163.5

9、-1-135,梓醇的神经保护作用是否与影响L Glu的毒性作用有关,本文利用PC12细胞中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2008Sep;24(9):1259601259昆明山海棠联合环孢素A防治小鼠急性移植物抗宿主病孙海英,李振宇,徐开林,李 晟,潘秀英,鹿群先(徐州医学院附属医院血液科,江苏徐州 221002)文献标识码:A 文章编号:1001-1978(2008)09-1259-02关键词:昆明山海棠;环孢素A;移植物抗宿主病Keywords:tripterygiumhypoglaucumhutch;CyclosporinA;graft ver

10、sus hostdisease移植物抗宿主病(graft versus hostdisease,GVHD)是影响异基因造血干细胞移植患者长期生存和生活质量的重要因素之一。临床常用的治疗包括糖皮质激素、环孢素A等免疫抑制剂,副作用大、费用高。昆明山海棠(tripterygiumhypoglaucumhutch,THH)是一种中药免疫抑制剂,具有肾上腺皮质激素类疗效但无激素类副作用,停药后无反跳和戒断收稿日期:2008-04-09,修回日期:2008-05-28基金项目:江苏省中医药管理局资助课题(NoH05104)作者简介:孙海英(1963-),女,主任医师,副教授,研究方向:造血干细胞移植,T

11、e:l0516 85802175,E mai:lhaiyingsun168;徐开林(1958-),男,博士,教授,博士生导师,研究方向:造血干细胞移植,通讯作者,Te:l0516 85802398,E mai:lhaiyingsun168Preventionofmouseacutegraft versus hostdiseasebytripterygiumhypoglaucumhutchcombinedwithCyclosporinASUNHai ying,LIZhen yu,XUKai lin,LISheng,PANXiu ying,LUQun xian(DeptofHematology,A

12、ffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCol lege,XuzhouJiangsu 221002,China)中国图书分类号:R 332;R282 71;R392 12;R457 7;R617;R979 5症状,且价格低廉。本研究拟将其应用于小鼠清髓性异基因骨髓移植模型中,以观察其是否有预防aGVHD的作用,通过测定受鼠血浆INF 、IL 4、IL 10浓度来探讨其可能的作用机制,并观察其是否能够减少CsA的用量。1 材料与方法1.1 实验动物及药物 受鼠为Balb/C小鼠(H 2d),;供Ca2+内流,损伤神经元,其兴奋毒性在阿尔采末病(Alzheim ersdis

13、ease,AD)的发病过程中起重要作用5,因此大量研究选用L Glu制作细胞损伤模型观察药物的效应。L Glu作用于PC12细胞24h后,细胞存活率和M受体密度明显降低,梓醇对此损伤有明显保护作用。联系到梓醇对拟AD小鼠的胆碱乙酰基转移酶(cholineacetyltransferase,ChAT)活性和M受体密度也有升高作用,改善其学习记忆能力,进一步证明了梓醇对胆碱神经系统的保护作用。但是梓醇既不是胆碱酯酶抑制剂,也不是M受体激动剂或阻断剂,其神经保护作用是通过何种机制产生的?研究表明梓醇对脑神经营养因子(neurotrophicfactors,NTF)家族成员之一BDNF有保护作用,增加

14、老年大鼠海马BDNF、突触素和GAP 433,对脑内注射A 2535造成的拟AD小鼠模型脑BDNF也有升高作用。BDNF参与调节突触传递和突触可塑性,改善学习记忆功能,部分治疗AD的药物如雌激素7可能通过BDNF产生作用。用特异性NTF高亲和力trk受体阻断剂K252a阻断NTF trk作用途径发现,K252a对梓醇的作用有一定阻断作用,但作用没有完全消失,这说明梓醇至少部分通过NTF trk途径发挥作用。 梓醇神经保护作用是否还涉及其他途径有待进一步探讨。此外,由于K252a对trkA、B、C3种受体没有选择性,不能确定3种受体均参与作用还是以其中1种为主,这也有待参考文献:1 祝慧凤,万

15、东,罗 勇,等.梓醇上调GAP243表达伴随局灶脑缺血大鼠神经功能恢复J.中国药理学通报.2007;23(9):1231-6.1 ZhuHF,WanD,LuoY,eta.lCatalpolup regulatedGAP 43proteinexpressionandimprovedbehavioroutcomeoffocalcerebralischemiaratsJ.ChinPharmacolBull,2007,23(9):1231-6.2 LiDQ,LiY,LiuYX,eta.lCatalpolpreventsthelossofCA1hippocampalneuronsandreduceswo

16、rkingerrorsingerbilsafteris chemia reperfusioninjuryJ.Toxicon,2005,46(8):845-51.3 LiuJ,HeQ J,ZouW,eta.lCatalpolincreaseshippocampalneuroplasticityandup regulatesPKCandBDNFintheagedratsJ.BrainRes,2006,1123:68-79.4 王金红,孙启祥,夏宗勤,等.地黄活性成分梓醇对转基因CHO细胞M2受体的调节作用J.中国药理学通报,2006,22(12):1462-5.4 WangJH,SunQX,XiaZQ,eta.lRegulatoryeffectofcatalpolfromRadixRehmanniaeonM2receptortransfectedCHOcellsJ.ChinPharmacolBull,2006,22(12):1462-5.5 SattlerR,TymianskiM.Molecularmechanismsofglutamatereceptor mediatedexcitotoxicneuronalcelldeathJ.MolecularNeuro biology,200