成骨、成脂诱导

1、间充质干细胞成骨及成脂诱导培养基标准 制作方法浏览：185更新：2013-07-01 11:12间充质干细胞培养细胞诱导分化时必然用到的就是培养液，配置出合适的培养液 能够促进细胞的分化，因此这一步操作时相当的关键。如何才能配置适合的诱导 培养液呢？济南中赛生物来介绍成骨与成脂诱导培养液的配备方法。成骨诱导培养液配备与诱导操作：1准备含10%FBS的a-MEM培养液；2在备好的沁IEM培养液中添加50uM抗坏血酸,lOmmp-磷酸甘油和l()()nm地塞 米松；3准备6孔培养板，将P4细胞按照5X103个/平方厘米的规格接种于原始培养液中；4待细胞长至基本融合后，更换上述制备完成的成骨诱导培养

2、液；5每三天换液一次，细胞长至7天时进行碱性磷酸酶染色；6二十八天后再进行矿化结节的茜素红染色。茜素红染色方法介绍:1去除细胞当前使用培养液，使用PES清洗两次；2使用10%甲醛室温固定15分钟，完成后使用重蒸馆水冲洗两次；3按照1 ml/孔加入40mM的茜素红染色液，室温孵育20min并轻微振荡；4清除掉没有完全结合的染料，用重蒸憾水漂洗并振荡5min重复4次；5倾斜放置2min,吸取多余的重蒸馆水；倒置显微镜观察抬照记录。成脂诱导培养液配备与诱导操作：1配置FBS10%含量的HG-DMEM培养液；2在配制完成的HG-DMEM培养液中加入1卩1地塞米松,10Mg/ml胰岛素，2()(加M耐喙

3、美辛和0.5mM IBMX;3准备6孔培养板，将P4细胞按照2X104个/平方厘米的规格接种于原始HG-PMEI培养液中4待细胞长至基本融合后，更换上述制备完成的成脂诱导培养液培养2天，在用 只含有l(Wml胰岛素的成脂维持培养液培养1天，如此交替循环培养至14天, 使用红油O染色。红油()染色方法介绍：1 去除细胞使用的当前培养液，使用PES清洗两次;2.27.5%甲醛室温固定20分钟；3. 重蒸惚水清洗3此，空气中干燥；4. 加入().5%的红油室温孵育一小时;5配制70%乙醇溶液清洗3次；6 倒置显微镜观察拍照记录。丁香园二、诱导成骨体系1.试剂溶剂终浓度储存浓度1ml体系加長Dex 去

4、商于水 0-W ImM 0.1 pLVc PBS50mM lpLA诱酸甘油 PBS 10mM IM 10pL2. DMEM (HG)和 10%FBSo3. 3代以上细胞，24孔板每孔105个细胞，六孔板每孔6000个细胞，每三天半星换液， 共诱导2周。成骨诱导剂：地塞米松(lX10-8moi/L), p-甘袖诱酸钠10mmol/L.维生素C 50ng/ml,高 糖PMEM,青锥霉素各100u/ml,体积分教10%的胎牛血清。成骨诱导培养墓成分:兔骨髓间质干细胞成骨诱导分化墓础培养墓175 mL兔骨髓间质干细胞培养专用胎牛血清20 mL谷氨磁2 mL双抗2 mL抗坏血酸400 pLP甘油诫酸钠2

5、 mL地塞米松20 pL成脂诱导培养基成分:兔骨髓间质干细胞成脂诱导分化培养基A液兔骨髓间质干细胞成脂诱导分化基础培养墓A175 mL兔骨髓间质干细胞培养专用胎牛血清20 mL谷氨酰胺2mL双抗2 mL胰岛素40() pLIBMN （1BMN, 3-异丁基亠甲基黄瞟吟）200 piL罗格列酮（呵嗥美辛）200 jiL地塞米松200 jiL兔骨髓间质干细胞成脂诱导分化培养基B液兔骨髄间质干细胞成脂诱导分化墓础培养墓B175 mL兔骨髄间质干细胞培养专用胎牛血清20 mL双抗2 mL谷氨酰胺2 mL胰岛素400 jiL对成脂肪诱导要特别提醪你，用国产血清比进口的效果更好（仍为10%浓度）。我用的是

6、S1GMA的地塞米松（D1756）, 25mg包装的，248元贵的惊人！须用无水乙醇溶 解。我也用过病房常用的5tng的地塞米松磷酸钠，效果也挺好的。首选的是dcxamcthasonc-watcr soluble, cell culture tested0至少可以配成1:100（）的母液，使用起来很方便。 使用丟用制剂尤其要小心溶剂的问题，奸些制剂不是和解在水里的，如果你没有设置台适的阴性对照，会 给你的实验帯来Bugo脂肪诱导培养液：PMEMJ0%FCS, 10-6M地塞米松,100微克/ml 1一甲墓一 3 异丁墓一黄嚓吟，50微克/ml抗坏血酸。很难找到一套抗兔的抗体。油红染色的方法如下

7、：脂肪油红染色（原位）：1称取0.5g油红干粉，溶于100mL异丙醇中，配成0.5%油红储存液，棕色瓶保存。2除去培养基用PBS洗涤1遍3.加10%中性甲整固定5min4稀释油红储存液，油红法离于水= 3:2,滤纸过滤，室温放直10min （除去一些杂质，染色 结果更清晰）5.染色30min,如果是培养皿或培养板，加的体积覆盖住板底即可。如6孔加1.5ml, 24孔加0.5-lmlo6.显微镜观察，及时照相，时间过长，脂肪滴会自发確裂，到时就前功尽弃了，几个星期 的努力欧！这位大虾的油红染色方法基本正确，但有几个地方修改一下后效果会更好！第一，染色的时间减少到5-10分钟足够了，剩下更多一些拍照的时间