黄根醇提物对四氯化碳所致大鼠肝纤维化的保护作用

1、黄根醇提物对四氯化碳所致大鼠肝纤维化的保护作用         09-09-07 16:03:00     编辑：studa20                       作者：邓家刚，周程艳，郑作文【摘要】  目的研究黄根醇提物对四氯化

2、碳所致大鼠肝纤维化的保护作用。方法大鼠首次于背部皮下注射纯CCl4 5 ml/kg，以后每周2次注射40%(V/V) CCl4花生油3 ml/kg，连续注射8周。8周后取血，计算大鼠的肝脾指数，检测大鼠血清中ALT，AST的活性及其总蛋白（TP）、白蛋白(Alb)的含量，计算白蛋白与球蛋白的比值；检测血清中透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、型前胶原(PC)、型胶原(C) 的含量；检测肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、羟脯氨酸（Hyp）含量、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。结果黄根醇提物能明显降低CCl4所致的大鼠肝纤维化肝脾指数的升高(P<0.01)和

3、血清中ALT，AST活性的升高(P<0.01)，降低血清中HA，LN ，PC，CIV，GLB的含量(P<0.01)，升高血清中的TP，ALB含量和A/G的比值(P<0.01)；降低肝组织中MDA 的水平和Hyp 的含量(P<0.01)，亦能升高肝组织中SOD的活性和GSH-Px的水平(P<0.01)。结论黄根醇提物具有显著的抗肝纤维化的作用。 【关键词】  黄根 四氯化碳 肝纤维化Abstract：ObjectiveTo study the protective effects of the alcohol extract from Prismatome

4、ris  tetrandra against liver fibrosis in mice induced by carbon tetrachlotide (CCl4). MethodsMouse model with liver fibrosis was induced by the multiple subcutaneous injections of 40% CCl4, 3 ml/kg, twice a week for 8weeks.The indexes of the liver and spleen in mice were calculated.ALT and AST

5、activities and contents of TP，Alb in serum were examined,meanwhile  the ratio  of the ALB and GLB were calculated.The four indexes of liver- fibrosis(HA，LN，PC，C) were determined in liver tissue. SOD activities and MDA，GSH levels in liver tissue were determined. Results The alcohol extract

6、from Prismatomeris tetrandra could obviously inhibit the increase of liver and spleen indexes(P<0.01)in liver fibrosis mice, and the increase of ALT and AST in serum (P< 0.01) , elevate the contents of TP，ALB ，A/G in serum(P<0.01),suppress the content of HA，LN ，PC，CIV ，GLB in liver tissue(P

7、<0.01)  ,  decrease the MDA levels in liver tissue(P<0.01), and improve SOD activity and GSH level in liver tissue(P<0.01) ConclusionThe alcohol extract from Prismatomeris tetrandra has remarkable protective effects on liver fibrosis in mice.Key words:Alcohol extract from Prismato

8、meris tetrandra;  Carbon tetrachlotide;   Liver fibrosis肝纤维化是慢性肝病重要的病理特征，也是进一步向肝硬化发展的主要中间环节1。目前研究认为肝纤维化是一个动态过程，尚属于可逆性病变，其转归与肝损伤因素是否持续存在有关，如果得到及时彻底治疗，肝损伤停止发展，则肝纤维化多可逆转；病情如不断发展则可能导致肝硬化甚至肝癌2。因此，肝纤维化的防治在临床上具有十分重要的意义。黄根Prismatomeris tetrandra，为壮医用药，具有软坚散结、利湿退黄等功效3，广西民间多用其治疗慢性肝炎4。本研究采用四氯化碳(

9、CCl4)所致慢性大鼠肝纤维化模型，探讨黄根醇提物对肝纤维化的影响。本文实验尚属首次。1  器材1.1  药品谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）试剂盒（批号 20060620），超氧化物歧化酶（SOD）测试盒（批号 20060610），丙二醛（MDA）测试盒（批号 20060615），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）测试盒和考马斯亮兰蛋白测定试剂盒（批号 20060620），以上试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品。秋水仙碱，为昆明制药药品销售有限公司产品，批号 20060418。四氯化碳(CCl4，分析纯)，为重庆川江化学试剂厂产品，批号  20050426

10、，实验时用花生油配成0.08%四氯化碳溶液。黄根，由广西药材站购进，经广西中医学院药用植物教研室韦松基副教授鉴定为茜草科植物三角瓣花Prismatomeris tetrandra（Rox -b.） K. Schum. 的根。1.2  动物清洁级Wistar大鼠，雌雄各半，体重160200 g。由广西医科大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK桂20030003。1.3  黄根醇提物的制备将黄根粉碎成粗粉，用乙醇加热回流提取两次，合并提取液，滤过，浓缩至无醇味，加水稀释致所需浓度，于4冰箱保存备用。1.4  仪器Biofuge strutos型高速低温离心机（Ken

11、dro Laboratory products）。JY92-2D型超声波细胞粉碎机（宁波新芝科器研究所）。YKH-I型液体快速混合器（江西医疗器械厂）。Agilent8453紫外分光光度计。ZFQ-85A型旋转蒸发仪（上海安亭电子仪器厂）。2  方法52.1  造模采用CCl4造成大鼠肝纤维化模型，除正常组外，其余各组每只大鼠首次于背部皮下注射纯CCI4 5 ml/kg，以后皮下注射40%(V/V) CCl4花生油3 ml/kg，每周注射2次，共8周。2.2  分组与给药将大鼠随机分为6组，每组各16只，即正常组，模型组，阳性组，黄根醇提物高、中、低剂量组。造模与

12、给药同时进行。各组每天灌胃（ig）给药，给药容量为20 ml·(kg-1·d-1)，连续8周。正常组和模型组给予蒸馏水，阳性组给予秋水仙碱0.2 mg/kg，高、中、低剂量组分别灌胃黄根醇提物12，6，3 g 生药/kg。股动脉取血，常规分离血清，大鼠处死前禁食不禁水24 h。2.3  检测指标检测血清中的谷丙转氨酶(ALT)、血清谷草转氨酶(AST)的活性及其总蛋白（TP）、白蛋白(ALB)的含量，计算白蛋白与球蛋白的比值（A/G）；并检测血清中的肝纤维化四项指标，即检测型前胶原(Procollagen,PC)、IV型胶原（Collagen Type IV，CIV）、透明质酸(Hyaluronicacid,HA)和层粘连蛋白(Laminin,LN)的含量。取肝脏、脾脏称量，计算肝指数、脾指数；并用肉眼观察大鼠肝脏的外形、体积、颜色、质地的改变，一部分肝脏用生理盐水制成10%的肝匀浆，用于检测肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）的活性、羟脯氨酸（Hyp）的含量、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）的水平。2.4  数据处理各组实验数据均以±s表示，采用统计软件SPSS13.0进行组间t检验，P<0.05有统计学意义。3  结果3.1