酵母β-葡聚糖扩大使用范围

1、补正资料第 4 部分公开征求意见用内容酵母 - 葡聚糖安琪酵母股份有限公司目 录1. 通用名称、功能分类、用量和使用范围2. 证明技术上确有必要和使用效果的资料或者文件2.1 酵母 - 葡聚糖的功能类别及作用机理2.2 在拟添加的食品中添加与否的效果对比2.3 与同一功能类别的食品添加剂使用效果的对比资料3. 质量规格要求、 生产使用工艺和检验方法， 食品中该添加剂的检验方法或者相关情况说明3.1 质量规格要求3.2 生产使用工艺和检验方法3.3 食品中该添加剂的检验方法或者相关情况说明1. 通用名称、功能分类、用量和使用范围通用名称、功能分类、用量和使用范围1、通用名称酵母 - 葡聚糖2、功

2、能分类食品添加剂营养强化剂3、拟扩大使用范围申请将酵母 - 葡聚糖的使用范围扩大到 13.01 婴幼儿配方食品、 13.02 婴幼儿辅助食品、 13.03 特殊医学用途配方食品（ 13.01 中涉及品种除外）的食品类别。4、在上述使用范围的使用量，相应使用范围及使用量详见表1：表 1 酵母 - 葡聚糖申报扩大使用范围食品分类号食品类别（名称）使用量（ g/kg ）13.01婴儿配方食品0.21 0.6713.02婴幼儿辅助食品0.21 0.6713.03特殊医学用途配方食品（13.01 中涉及品种除外）0.21 0.672、证明技术上确有必要和使用效果的资料或者文件证明技术上确有必要和使用效果

3、的资料或者文件2.1酵母 -葡聚糖的功能类别及作用机理功能类别：营养强化剂-葡聚糖为 D-葡萄糖单体借由糖苷键连接形成的多糖，主要化学结构为-1,3 葡聚糖和 -1,6葡聚糖，其中前者具有抗肿瘤活性，可极大提高人体自然免疫力，此外，其作为益生元还可调节肠道菌群结构等。 - 葡聚糖广泛存在于各种真菌和植物中，主要来源于新鲜的食物如啤酒酵母、燕麦、食用菌等。其中，酵母 - 葡聚糖是存在于酵母细胞壁中的一种具有增强免疫力活性的多糖，由酵母细胞经自溶、酶解、纯化后精制而成，分子量约为 1000KD，主要以 -1,3-D- 葡聚糖为主链，该结构有别于一般糖类线形分子结构，为一种独特的三重超微螺旋结构。

4、这种特殊的超微螺旋型分子结构为免疫活性最强且最易被人体吸收的结构形式， 故而在动物实验中表现出非特异性免疫增强作用。研究表明， - 葡聚糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗感染等多种生物活性和功能 1 。 - 葡聚糖作为非特异性的免疫调节剂，主要是通过影响内皮系统的功能来实现免疫调节。大量药理试验结果证明，葡聚糖不仅能激活 T 、B淋巴细胞、巨嗜细胞 (MT)、自然杀伤细胞 (NK) 、细胞毒细胞 (CTL) 、淋巴因子激活的杀伤细胞 (LAK) 、树突状细胞 (DC) 等免疫细胞，还能促进细胞因子生成， 激活补体系统，促进抗体产生， 对免疫系统发挥多方面的调节作用。 近年来从分子水平研究结果表明，多糖

5、通过与巨噬细胞和嗜中性粒细胞、 淋巴细胞表面多糖受体相结合， 影响细胞的信息传递过程， 从而影响这类细胞基因表达和淋巴细胞功能， 调节机体免疫功能，淋巴细胞的多种功能均与细胞内 cAMP和 cGMP的含量及其比值变化有关。研究结果显示， - 葡聚糖具有调节细胞内 cAMP和cGMP水平的功能。另外， - 葡聚糖对免疫细胞 NO 生成具有明显的促进作用，并与干扰素具有协同促进作用，多糖可影响淋巴细胞前列腺素的分泌，调节免疫功能。酵母 - 葡聚糖的生物活性 2酵母 - 葡聚糖的特殊结构等，使得其具有降低胆固醇和血脂、增加机体免疫力等生理活性。大量研究证明，酵母- 葡聚糖的免疫调节机制是其能与动物及

6、人类的免疫细胞（包括单细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和自然杀伤细胞）发生特异性结合，通过刺激动物体内淋巴细胞、 活化动物体内的巨噬细胞而产生对机体的免疫活性。因此，酵母- 葡聚糖具有多方面的免疫功能。1. 抗癌、抗肿瘤目前研究抗癌功能的主要目标就是加强人体组织中的巨噬细胞的活性，葡聚糖正具有此种功能。 Cheung NK等用免疫缺陷性异种移植肿瘤模型研究 -(1 3)- 葡聚糖，并检测了其抗肿瘤效应与理化特性之间的关系， 研究发现，口服 -葡聚糖大大增加抗肿瘤单克隆抗体(mAb)在小鼠体内建立的抗肿瘤作用。2. 抗氧化、抗辐射 - 葡聚糖能够有效地清除体内的自由基，保护巨噬细胞在遭受辐射期间和辐射

7、后都能免受自由基的攻击， 使这些巨噬细胞继续正常发挥作用。 细胞培养实验表明，羧甲基 - 葡聚糖能够抑制紫外线照射下抗氧化分子的消耗，促进角质素的增长，从而保护皮肤细胞。 Pathchen ML等的研究表明，水溶性葡聚糖能够增强由钴 -60 诱导辐射后的快速痊愈。 用- 葡聚糖治疗经辐射的小鼠， 可以增强小鼠恢复的能力，并能够提高骨髓活力， 使白细胞数量增加， 同时增强脾细胞数。3. 促进伤口愈合由于巨噬细胞活性在外科和伤口愈合上起到重要的作用，- 葡聚糖因此具有能够参与机体的自然防御和加速皮肤创伤愈合的功能。Waisun等研究发现，20100mg/ml酵母葡聚糖搽抹动物腿部受伤处，能明显加速

8、其伤口愈合，应用0.1 0.2mg/kg 体重的可溶性葡聚糖，可降低腹胸外科手术后的感染率。4. 降低胆固醇和血脂 - 葡聚糖的特殊结构能促进脂蛋白、脂肪酸释放，使血液中大分子的脂质分解成小分子， 因而对血脂过多引起的血清浑浊有澄清作用， 能明显降低血胆固醇。Nicolosi 等对 15个肥胖的高胆固醇男性进行了研究， 在研究中病人保持着相同的身体重量，在第 7周能够明显降低血液中总胆固醇含量的 8，在第 7周的基础上第 8周又降低了 6，可见酵母葡聚糖能够显著降低血浆中胆固醇含量。作用机理：-1,3-D- 葡聚糖的免疫调节作用机制1. 通过多糖受体发挥作用3大量研究表明， -1,3-D- 葡

9、聚糖是通过结合到单核细胞、巨噬细胞、嗜中性细胞和NK 细胞表面的葡聚糖受体发挥作用。Yan 等从受体水平揭开了-1,3-D- 葡聚糖作用于补体 3型受体介导抗肿瘤效应， 他认为：许多免疫细胞如巨噬细胞、 NK 细胞、中性粒细胞上存在补体 3(CR3) 受体，该受体含有 2个功能域，一个与补体 3裂解片段 (iC3b) 结合，称为 iC3b 结合位点；另一个结构域与 - 葡聚糖结合，称作凝集素 (lectin)位点。巨噬细胞、 NK细胞、中性粒细胞通过补体3(CR3) 受体结合位点，可以结合iC3b 调理的肿瘤细胞，但此时并不能杀伤肿瘤细胞，只有 CR3的凝集素结合位点与 - 葡聚糖结合后， 使

10、上述免疫细胞处于预激活化状态，通过 iC3b 为纽带，使效应细胞和靶细胞结合在一起，才能杀伤肿瘤细胞。- 葡聚糖介导的细胞毒素作用可被抗CR3的抗体所抑制。 Engstad 等认为 - 葡聚糖的作用机制是通过调节一些细胞如巨噬细胞上的细胞受体而发挥作用。而且 Joegensen等认为哺乳动物巨噬细胞和单核细胞具有特异性的 - 葡聚糖受体，在 - 葡聚糖存在的情况下，能够产生一些如白三烯、细胞因子和前列腺素等免疫调节物质。研究表明， 1,3- -D- 葡聚糖特异性受体，存在于单核细胞和巨噬细胞表面，随着葡聚糖配体结合到单核细胞表面受体上后，可导致NF-kB激活， IL-6mRNA的表达以及葡聚糖

11、的内化。近几年研究也表明，多糖也可以通过作用于 Toll 样受体 (TLRs) 介导免疫效应，酵母 - 多糖可通过 TLR2激活转录因子 NF-kB，进而启动 TNF-a基因转录，促进 TNF-a 的产生。最新研究也表明，酵母 - - 葡聚糖也可通过结合于单核 / 巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞上的树突状细胞相关 C型凝集素 - 1 (dectin-1)受体介导免疫反应，如介导于巨噬细胞，产生TNF-a。2. 通过调节相关基因表达量发挥作用多糖促进细胞因子的分泌， 原因在于促进细胞因子基因表达。 在免疫应答反应中，有几种基因的表达牵涉其中，如 iNOS 基因，常在转录水平上被 NF-kB所调

12、节。 Young 等研究了酵母多糖促进巨噬细胞 TNF合成的分子机制，发现酵母多糖可显著提高 NF-kB 活性，进而提高 TNF基因启动子活性和 TNF的表达。3. 通过影响免疫细胞的信号传导发挥作用（1）对 NO 产量的影响NO 是机体内一种主要的具有广泛生物活性的细胞信号分子， 它可参与神经、免疫等调节作用，从而如影响 T 淋巴细胞的增殖、 T 淋巴细胞和巨噬细胞的细胞因子的分泌、 增强巨噬细胞杀灭微生物和肿瘤细胞的能力等。 免疫调节剂可刺激巨噬细胞表面 iNOS 表达，诱导巨噬细胞产生大量的 NO，抑制病原微生物的生长。 Ohno 等研究表明 -1,3-D- 葡聚糖可促进巨噬细胞 NO

13、的释放。 Luvone 等应用溶解在 0.01%的 DMSO中的 -1,3-D- 葡聚糖溶液 , 刺激单核巨噬细胞 J 774 , 单独可显著提高 NO产量 , 且NO的产量与水溶性 -1,3-D- 葡聚糖刺激量呈现剂量浓度效应，Western bloting 检测结果也表明 iNOS 蛋白的表达产量随 -1,3- D- 葡聚糖添加量的提高而增加。（2）对钙离子传导的影响细胞内钙离子是一种重要第二信使分子，细胞内Ca2+激活蛋白激酶 C(PKC) ,与 DAG 有协同作用，共同促进其他信息传递蛋白及效应蛋白活化，对细胞免疫功能起主要作用，如调节淋巴细胞的分裂增殖、 促进 T 淋巴细胞 IL-2

14、 的释放、 介导巨噬细胞的吞噬作用等。陈宏亮等研究了香菇多糖可以升高脾细胞内的 Ca2+浓度、促进脾淋巴细胞产生 NO。（3）对 cAMP、cGMP的影响cAMP、cGMP是细胞内重要的第二信使分子， cGMP作用与 cAMP相反，细胞增殖时细胞内 cAMP浓度升高，细胞增殖停止时， cGMP浓度升高。 研究表明葡聚糖可调节淋巴细胞内 cAMP、cGMP浓度，对机体免疫功能起调节作用。（4）对前列腺素分泌的影响前列腺素对免疫细胞的活化和抗体的合成具有抑制作用。 Cleary 等报道 -1,3-D- 葡聚糖可促进体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞前列腺素E2和 IL-1 的分泌。Falch 等研究表明酵

15、母多糖通过与肺巨噬细胞表面的葡聚糖受体结合促进其前列腺素的分泌。 Castro 等研究认为 -1,3- 葡聚糖可影响花生四烯酸的代谢。（5）其他信号途径 - 葡聚糖可诱导巨噬细胞内 PKA的活性，可通过激活肌醇磷脂激酶、 蛋白激酶 C、Src 家族酪氨酸激酶、 p38丝裂原激活的蛋白激酶 (MAPK)等信号途径，促进中性粒细胞的吞噬和趋化作用。2.2在拟添加的食品中添加与否的效果对比（一）婴儿配方食品奶粉添加一定量酵母 -葡聚糖后，检测奶粉中酵母-葡聚糖含量，如下表：表 3-1 调制乳粉中添加酵母 -葡聚糖前后使用效果对比表批次无添加含酵母 -葡聚糖含酵母 -葡聚糖含酵母 -葡聚糖奶粉奶粉 -

16、1奶粉 -2奶粉 -3酵母 -葡聚糖含量050.1249.9950.11mg/100g与无添加奶粉相比，添加酵母 -葡聚糖奶粉含量达到 50mg/100g，酵母 -葡聚糖通过激活体内巨噬细胞的活性，从而达到增强人体免疫系统活性的功能，可增强婴幼儿免疫力。（二）婴幼儿辅助食品米粉添加一定量酵母 -葡聚糖后，检测米粉中酵母-葡聚糖含量，如下表：表 3-2 米粉中添加酵母 -葡聚糖前后使用效果对比表批次无添加含酵母 -葡聚糖含酵母 -葡聚糖含酵母 -葡聚糖米粉米粉 -1米粉 -2米粉 -3酵母 -葡聚糖含量050.0550.1250.07mg/100g与无添加奶粉相比，添加酵母 -葡聚糖奶粉含量达到

17、 50mg/100g，酵母 -葡聚糖通过激活体内巨噬细胞的活性，从而达到增强人体免疫系统活性的功能，可增强婴幼儿免疫力。（三）特殊医学用途配方食品婴儿配方奶添加一定量酵母 -葡聚糖后，检测婴儿配方奶中酵母-葡聚糖含量，如下表： 表 3-3 婴儿配方奶中添加酵母 -葡聚糖前后使用效果对比表批次无添加婴儿含酵母 -葡聚糖含酵母 -葡聚糖含酵母 -葡聚糖配方奶婴儿配方奶-1婴儿配方奶-2婴儿配方奶-3酵母 -葡聚糖含量021.0521.1221.07mg/100g与无添加特殊医学用途婴儿配方奶相比，添加酵母-葡聚糖奶粉含量达到21mg/100g，酵母 -葡聚糖通过激活体内巨噬细胞的活性，从而达到增强

18、人体免疫系统活性的功能，早产 / 低出生体重儿配方食品中添加酵母-葡聚糖可增强婴幼儿免疫力。2.3与同一功能类别的食品添加剂使用效果的对比资料国家卫生和计划生育委员会：我司欲申报的食品添加剂酵母 - 葡聚糖，因该食品添加剂于 2010 年中华人民共和国卫生部（ 2010 年第 9 号）公告规定为新食品原料，于 2012 年中华人民共和国卫生部（ 2012 年第 6 号）公告规定为食品添加剂新品种， 暂无同一功能类别的食品添加剂， 故无法提供与同一功能类别的食品添加剂使用效果的对比资料，特此说明。安琪酵母股份有限公司2015年 11月3. 质量规格要求、 生产使用工艺和检验方法， 食品中该添加剂

19、的检验方法或者相关情况说明质量规格要求、生产使用工艺和检验方法食品中该添加剂的检验方法或者相关情况说明3.1 质量规格要求3.2 生产使用工艺和检验方法3.3 食品中该添加剂的检验方法或者相关情况说明3.1质量规格要求酵母 葡聚糖符合QB/T 4572-2013 中华人民共和国轻工行业标准酵母 葡聚糖质量规格要求。3.2生产使用工艺和检验方法（一）、生产工艺1、生产工艺简图1 复合蛋白酶和1水解蛋白酶酶解酿酒酵母12 小时离心离心液NaOH 1%浓 缩碱 提 取3 小时干 燥加水分离两次调节 pH 值 4.5加水酵母抽提物离 心固形物加水离心固形物喷雾干燥包装酵母 葡聚糖2、工艺说明2.1将酵

20、母溶于水中，浓度达到20%，升温到50， pH 值调到 4.5 ，保温 30分钟。2.2.加入1的诺维信复合蛋白酶（PROTAMEX）和1的诺维信水解蛋白酶（ ALCALASE 2.4L），进行酶解 12 小时。2.3用高速离心机离心。2.4离心的固型物加水稀释到浓度为5%的乳液，加入 NaOH使其浓度达到 4%，在 90保温 3 小时。2.5加水用高速离心机分离两次。2.6加入 1%的盐酸调节 pH值至 4.5 ，再加水离心洗涤两次。2.7离心的固型物加水稀释到浓度为20%的乳液，采用喷雾干燥的方法进行干燥，得到酵母葡聚糖粉末。干燥进风温度为160，出风温度为80-90 ，塔内负压 -300

21、Pa。2.8经按企业标准检验合格后入库。3.3食品中该添加剂的检验方法或者相关情况说明（一）、检验方法（二）、食品中该添加剂 ( 营养强化剂 ) 的检验说明（三）、安琪酵母 葡聚糖检测报告（一）、检验方法按照企标附录 A 中 A.1 的方法测定。（二）、食品中该添加剂 ( 营养强化剂 ) 的检验说明食品中该添加剂 ( 营养强化剂 ) 的检验说明附后。酵母 葡聚糖检测说明我国目前还没有酵母 葡聚糖的检测方法的国家标准， 主要是因为酵母 葡聚糖的不溶性，常用的检测方法有：苯酚 - 硫酸法、酶法、荧光法等方法。其原理基本都是先将酵母 葡聚糖进行水解， 然后测定水解后的葡萄糖， 再换算为酵母 葡聚糖的

22、含量。我司酵母 葡聚糖含量检测方法是依据中华人民共和国轻工行业标准 QB/T4572-2013( 酵母 葡聚糖 ) 中规定的方法进行检测。原理是用盐酸水解，然后用高效液相色谱法测定水解产生的D-葡萄糖，再换算为酵母 葡聚糖的含量。安琪酵母股份有限公司2015 年 11 月（三）、安琪酵母 葡聚糖检测报告检测报告附后。国家教育部STATE EDUCATION MINISTRY江南大学分析测试中心Analysis & Testing CenterJiangnan University检测报告ANALYZING AND TESTING REPORT报 告 编 号： LC090720SERIE

23、S NUMBER样 品 名 称：安琪酵母 -葡聚糖SAMPLE NAME委 托 单 位：安琪酵母股份有限公司CLIENT UNIT委托单位地址： 湖北省宜昌市城东大道168#CLIENT UNITADDRESS检 测 类 别：委托检测DETECTING TYPE检测机构（盖章）：江南大学分析测试中心ANALYZING AND TESTING UNIT报告发送日期： 2009 年 9 月 28 日REPORTING DATE第1页共4页地址：无锡市蠡湖大道1800 号 .邮编（ P.C.）：214122.电话 (Tel)dd.：1800 Lihu Road，Wuxi

24、,P.R.China传真 (Fax)-mail Add.： ceshi江南大学分析测试中心检测报告ANALYZING AND TESTING REPORT本报告共 4 页，附 9 页（其中：图： 9 页，表： / 页）样品名称（ Sample Name）：（Total Pages for This Report）安琪酵母 -葡聚糖样 品编 序号 （ Sample No. ）样品类别（ Sample Type）样品数量（ Sample Number）LC090720Y1 LC090720Y3生物制品3样品外观 (Sample Appearance)报告编号（ Rep

25、ort No.）文件存档名称（ File Name）淡黄色粉末LC090720LC090720检测项目及要求（ Analysis Item）检测依据（ Method or Reference Cited）基本成分分析 ,1,3 糖苷键比例 ,单糖组成 ,分子量GB/T5009.35-2003,JY/T024-1996,GB/T 6040-2002 ，分布 ,红外光谱及核磁共振（1H, 13C）分析JY/T 007-1996检测结果（ Result of Analysis）：基本成分分析结果（， w/w ）原样品号1#2#3#葡聚糖76.382.777.7脂类10.802.409.28蛋白3.1

26、62.802.97水分4.214.713.85灰分1.293.461.261,3-糖苷键比例：根据13C NMR 图谱 (见附件4)中被取代的C3(86.17ppm) 和 C6(69.89ppm) 两信号强度的比值， 可计得1#、2#、3#三个葡聚糖样品中1,3-糖苷键和1,6-糖苷键的相对量比值为5.4:1、3.6:1 、5.5:1 ，或1,3-糖苷键所占两种糖苷键相对百分比依次为84.4%、 78.1%、 84.6%。单糖组成分析结果（mol %）：原样品号1#2#3#Man1.51.51.5GlcN2.51.52.0Glc96.097.096.5(HPLC图谱见附件1)注：1#为安琪 7

27、0%含量酵母 -葡聚糖， 2#为安琪 90%含量酵母 -葡聚糖，3#为美国 70%含量酵母 -葡聚糖（以下同）。授权签字人（Authorized Signatory）：日期（ Date）：2009 年9 月28 日（机构盖章）第2页共4 页说明： 1本报告任何涂改增删无效，复印件未加盖本单位印章无效；2本报告只对来样负责；3若对本报告有异议，请于报告发出之日起15 日内向本中心提出，逾期不予受理；4本报告附页加盖骑缝章方有效；5未经本中心同意，任何单位或个人不得用本报告及本中心的名义作广告宣传。江南大学分析测试中心检测报告ANALYZING AND TESTING REPORT本报告共 4 页

28、，附 9 页（其中：图： 9 页，表 / 页）样品名称（ Sample Name）：（Total Pages for This Report）安琪酵母 -葡聚糖样品编序号（ Sample No）.样品类别（ Sample Type）样品数量（ Sample Number）LC090720Y1 LC090720Y3生物制品3样品外观 (Sample Appearance)报告编号（ Report No.）文件存档名称（ File Name）淡黄色粉末LC090720LC090720检测项目及要求（ Analysis Item）检测依据（ Method or Reference Cited）基本成

29、分分析 ,1,3 糖苷键比例 ,单糖组成 ,分子GB/T5009.35-2003, JY/T 024-1996， GB/T 6040-2002，量分布 ,红外光谱及核磁共振（1H,13C）分析JY/T 007-1996检测结果（ Result of Analysis）：相对分子量分布( 图谱见附件 2)：原样品号相对分子量范围峰面积百分比重均分子量总重均分子量(Mw, Dalton)(%)(Mw, Dalton)(Mw, Dalton)12793813 53088427.2227745381#530884 3926445.6424109883767139264 376720.532001937

30、676356.61199910764652161808013.7634173482#1608080 5888455.9355328080340558884 331124.10221903311 6846.21199911274218 61944828.2827625873#619448 3706844.8422789291909837068340420.86188683404 6846.031977红外光谱分析结果：3 个样品在 3400cm-1 附近均有一个较宽、 较强的吸收峰， 是糖类的 O-H 的伸缩振动，同时在2900cm-1 附近也均有一较弱吸收峰，是糖类C-H 伸缩振动。这两组峰是

31、糖类的特征吸收，谱图说明3 个级分均为多糖。 3 个样品均在 889 cm-1有 -构型的特征吸收，说明三者均为 -葡聚糖。（图见附件3）授权签字人（Authorized Signatory）：日期（ Date）：2009 年9 月28 日（机构盖章）第3页共4 页说明：1本报告任何涂改增删无效，复印件未加盖本单位印章无效；2本报告只对来样负责；3若对本报告有异议，请于报告发出之日起15 日内向本中心提出，逾期不予受理；4本报告附页加盖骑缝章方有效；5未经本中心同意，任何单位或个人不得用本报告及本中心的名义作广告宣传。江南大学分析测试中心检测报告ANALYZING AND TESTING REPORT本报告共 4 页，附 9 页（其中：图： 9 页，表 / 页）样品名称（ Sample Name）：（Total Pages for This Report）安琪酵母 -葡聚糖样品编序号（ Sample No）.样品类别（ Sample Type）样品数量（ Sample Number）LC090720Y1