生物制品简介和研究进展-单抗

1、单抗药物基础单抗基础知识2单抗研究进展3 生物制品及进展简介1生物制品定义和历史定义：是以微生物、动物或人体的组织、体液等为起始原材料，采用生物学技术，制备成免疫学制剂，用于人类疾病的预防、治疗和诊断。 明朝隆庆年间（15671572），将天花轻型患者的痂皮研磨成粉状，吹入健康人的鼻腔，可预防天花。 1796年，英国牛痘疫苗的产生，生物制品开始面世。生物制品分类预防用生物制品预防用制品：主要用于传染病的免疫预防，及疫苗类制品。治疗用生物制品治疗用制品：主要用于疾病的治疗和特殊人群使用。诊断用生物制品诊断用制品：主要用于疾病的筛查、诊断或疗效观察。生物制品主要技术生产用菌毒种的管理生产用菌毒种和

2、原料血浆等原材料是生物制品生产的根本必须有清晰的来源和历史必须经过检测以证明其可用性和安全性必须有合适的保藏方法（2-8冷藏、超低温保藏和冷冻干燥保藏）细菌、细胞和病毒培养蛋白及多糖的分离纯化纯化是为了去除杂质，提高目标物的纯度，降低使用时的不良反应纯化的技术手段盐析沉淀：蛋白等电点超滤：蛋白大小超速离心：蛋白的沉降系数、质量、密度、大小和形状层析吸附：蛋白大小和形状、带电情况、疏水性、离子强度分包装技术生物制品制备完成后须分装至合适的容器中，方便患者使用分装时应注意保证：制品不受污染、装量均一包装形式根据使用需要而定，如西林瓶和注射器等预充式注射器西林瓶检定安全性：安全性： 原辅料进厂后重新

3、检验 中间产品的严格控制 生产过程中成熟的病毒灭活工艺 产品上市前需企业和国家检验机构检验 有效性：有效性： 充分的临床试验数据 严格执行国家批准的工艺生产 有效成分的控制高于国家药典标准生物制品发展趋势1.工艺的革新：培养：无血清培养基代替传统含血清培养基 发酵罐培养代替转瓶培养纯化：材料革新，如层析介质的换代、膜包材料的改变等 设备更新，如全自动超速离心机、大容量层析柱等 方式的叠加，如一步纯化改为两步甚至多步纯化生物制品发展趋势2.生物制品种类的扩展科技发展的必然科技发展的必然：重组技术的发展使得生物制品发生重大改变，如乙肝疫苗由传统的提取灭活疫苗换代为重组疫苗，部分血液制品如凝血因子也

4、不依赖血浆，可以通过重组表达方式生产。临床用药的需求临床用药的需求：为了减少免疫针次，联合疫苗较单价疫苗更被使用者接受；另外，传统粗放的治疗方式使得临床用药不良反应较多，精细化治疗成为现代医学的重要手段，如成分血或特种免疫球蛋白，单克隆抗体治疗肿瘤（生物导弹）等。单抗基础知识1.1.定义定义2.2.结构结构3.3.功能功能4.4.用途用途5.5.制备过程制备过程6.6.质量控制质量控制1.抗体及单抗定义抗体（antibody）：指机体的免疫系统在抗原（antigen，Ag）刺激下，由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中，也分布

5、于组织液及外分泌液中。单抗（Monoclonal antibody，mAb）：全称单克隆抗体，即遗传背景、结构和功能高度一致的抗体。抗体示意图混合抗体单抗2.抗体结构抗体由两条重链和两条轻链共4条肽链组成。 每条肽链均包括两个区域：可变区（抗原结合部位）和恒定区。3.抗体功能A 识别并特异性结合抗原3.抗体功能B 介导免疫细胞活性3.抗体功能C 激活补体系统4.单抗的起源及发展 1975年,生物学家克勒Kohler与米尔斯坦Milstein发明了用来制备单克隆抗体的杂交瘤技术，1984年获得诺贝尔医学和生理学奖。 利用培养或小鼠腹腔接种的方法，便能得到大量的、高浓度的、非常均一的抗体，其结构、

6、氨基酸顺序、特异性等都是一致的，而且在培养过程中，只要没有变异，不同时间所分泌的抗体都能保持同样的结构与机能。这种单克隆抗体是用其他方法所不能得到的。鼠源鼠源抗体抗体全人源全人源抗体抗体人鼠嵌人鼠嵌合抗体合抗体人源化人源化抗体抗体4.单抗应用v临床治疗：临床治疗：将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接，利用单克隆抗体的导向作用，将药物或放疗物质携带至靶器官，直接杀伤靶细胞，称为肿瘤导向治疗肿瘤导向治疗。 抗感染； 抗肿瘤如结肠癌、乳腺癌等； 治疗自身免疫性疾病类风湿； 抗移植排斥v临床诊断和筛选：临床诊断和筛选：ELISAELISA试剂盒试剂盒 病原微生物抗原抗体检测 ；肿瘤抗

7、原检测；细胞因子检测 放射免疫显像技术：将放射性标记物与单克隆抗体连接，注入患者体内可进行放射免疫显像，v蛋白提纯：亲和层析蛋白提纯：亲和层析 单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的 固相基质（如Speharose 2B、4B、6B等）上，并制备成层析柱。当样品 流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合， 其余成分不能与之结合。 5.单抗的制备v经典方法经典方法细胞融合细胞融合 脾细胞：脾细胞：能够产生抗体但不能无限繁殖 骨髓瘤细胞：骨髓瘤细胞：不能产生抗体但能无限繁殖 杂交瘤：杂交瘤：脾细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞，既能产生抗体又能无 限增殖，将这种

8、杂交瘤作单个细胞培养，可形成单细胞系， 即单克隆。v新方法新方法基因重组基因重组 采用基因重组技术，将抗体基因转入能够无限繁殖的细胞中，筛选得到阳性克隆，通过扩增阳性细胞并使其分泌抗体5.单抗的制备-经典的细胞融合5.单抗的制备-新方法基因重组5.单抗的制备-重组单抗生产流程图5.单抗的制备-细胞培养转瓶培养发酵罐培养5.单抗的制备-抗体纯化层析系统离心系统超滤系统6.单抗质量控制 蛋白含量 无菌检查 等电点 异常毒性检查 N末端氨基酸序列 内毒素 活性测定 CHO细胞DNA残留量 肽图 CHO细胞蛋白残留量 分子量 蛋白A残留量6.单抗质量控制-检定设备PCR仪HPLC仪毛细管电泳仪水分测定

9、仪仪单抗研究进展单抗药物的经典品种介绍单抗药物的临床前景单抗药物的市场单抗的经典品种美罗华（Mabthera）通用名：利妥昔（Rituximab）第一个被FDA批准的单抗人鼠嵌合型单克隆抗体用于治疗非霍奇金淋巴瘤（NHL）静脉注射单抗的经典品种修美乐（Humira）通用名：阿达木（Adalimumab）全人源化单克隆抗体抗风湿药，用于治疗类风湿性关节炎皮下注射单抗的经典品种单抗的经典品种赫赛汀（赫赛汀（Herceptin）通用名：曲妥珠（Trastuzumab）人源化单克隆抗体用于治疗转移性乳腺癌（HER2过度表达）冻干，静脉注射用单抗的经典品种阿瓦斯汀（Avastin）通用名：贝伐（Beva

10、cizumab）人源化单克隆抗体用于治疗直肠癌静脉注射用单抗的临床前景 未来，全球单克隆抗体药依旧会保持较高的增长率。到2015年，有望达980亿美元左右。单抗在国内的市场潜力 “十二五”期间，我国“重大新药创制”专项将获中央财政下拨资金100亿元，配套资金300亿元。国内的单克隆抗体药物从无到有，将在我国医药市场发挥越来越重要的作用。单抗药物国外已上市品种美国FDA批准的单抗药物序号商品名开发商批准时间（年份）序号商品名开发商批准时间（年份）1Orthoclone-OktOrthoBiotech198618TysabriBiogen IDEC20042ReoproCentocor199419

11、VectibixAmgen20063ZenapaxRoche199720LucentisGenentech20064RituxanGenentech199721SolirisAlexion Pham20075SimulectNovartis199822CimziaUCB Inc20086RemicadeCentocor199823SimponiCentocor20097SynagisMedimmune199824IlarsNovartis2009SHerceptinGenentech199825StclaraCentocor20099MylotargWyeth200026ArzerraGSK2

12、00910Campath-1HMillennium200127ActemraRoche201011HumiraAbbot labs200228ProliaAmgen201012ZevalinIDEC Pharm200229BenlvstaHGS/GSK201113RaptivaGenentech/XOMA200330YervovBMS201114XolairGenentech200331AdcetrisRoche201115BexxarCorixa/Gsk200332PerjetaGenentech201216AvastinGenentech200433AbthraxGSK201217Erbi

13、tuxImclone2004 34Simponi Aria JANSSEN BIOTECH 2013中国FDA批准的单抗药物单抗药物国内已上市品种序号抗体名称开发商批准时间（年份）1Muromonab-CD3古巴分子免疫学中心19992注射用抗人T淋巴细胞CD3单抗武汉生物制品研究所19993DaclizumabRoche20004RituximabRoche20005TrastuzumabGenentech20036碘131I肿瘤细胞核人鼠嵌合单克隆抗体注射液上海美恩生物技术有限公司20037抗人白介素-8鼠单抗乳膏大连亚维药业有限公司20038BasiliximabNovartis20049CetuximabMerck200510注射用人型TNFR-抗体融合蛋白上海中信国健药业有限公司200511InfliximabCentocor200612碘131I美妥昔单抗注射液成都华神生物技术有限责任公司200613尼妥珠单抗注射液百泰生物药业有限公司200814BevacizumabGenentech201015AdalimumabWyeth201016EtanerceptWyeth201017注射用人型TNFR-抗体融合蛋白上海赛金生物医药有限公司201118重组抗CD25人源化单克隆抗体注射液上海中信国健