荧光分析法测定黄花参肝舒茶中大黄素的含量(一)

1、荧光分析法测定黄花参肝舒茶中大黄素的含量(一)    作者：杨立芳， 杨东爱， 马少妹 ，尹显洪【关键词】 黄花参肝舒茶；,荧光分析法,；,大黄素摘要：目的荧光分析法在黄花参肝舒茶中测定大黄素含量方法探讨。方法采用荧光分析法,吸附剂为硅胶G，展开剂为石油醚醋酸乙酯甲酸（1550.5），激发光波长214 nm，荧光光谱波长569 nm进行测定。结果大黄素线性回归方程为：Y=1.532 3X + 552 .14 ，r=0.998 6；平均回收率为98.88%，RSD值为2.16%（n=5）。结论 该方法灵敏度高、操作简便、重现性好、结果准确，可用于黄花参肝舒

2、茶制剂的质量控制。 关键词：黄花参肝舒茶； 荧光分析法 ； 大黄素 Determination of Emodin in Content Huanghuashen Ganshu Tea by Spectrofluorimetry Key words：Huanghuashen Ganshu tea ； Spectrofluorimetry ； Emodin 黄花参肝舒茶是广西壮医医院根据壮族民间治疗肝炎有效验方研制而成的袋泡茶剂。由黄花参、黄芪、虎杖、白术等多种中草药组成，具有清热毒、除湿、疏肝健脾、通龙路利水道作用。临床上用于治疗湿热邪毒所致急慢性肝炎及乙肝病毒携带者。虎杖为处方中的臣药，含有

3、蒽醌类及二苯乙烯类物质，其中主含大黄素（Emodin）、大黄素甲醚(Emodinmonomethyl ether)和大黄酚(Chrysophanic acid, Chrysophanol)1等。本文采用荧光分析法测定复方中虎杖的大黄素含量，克服了用薄层扫描测定含量误差大、用HPLC法直接进样对色谱柱污染大等缺点，排除了复杂组分间的干扰，取得了准确性可靠的结果，为建立黄花参肝舒茶质量控制提供依据。1 仪器与试药 PerkinElmer荧光分光光度计（美国）；三用紫外光灯（江阴市申港电光仪器厂）；KQ100DB数控超声波提取器（昆山市超声仪器有限公司）；800型离心机（上海手术器械厂）；硅胶G（青

4、岛海洋化工厂生产）；大黄素（中国药品生物制品检定所提供，批号：7568902）；黄花参肝舒茶（广西壮医医院药剂科提供）；所用试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 薄层色谱条件吸附剂为硅胶G薄层板（2.5 cm×7.5 cm，厚0.5 mm）；展开剂为石油醚醋酸乙酯甲酸（1550.5）。2.2 对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品适量，置容量瓶中，加无水乙醇溶液使溶解制成 0.301 2 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。2.3 供试品溶液的制备 取本品约6袋，研细，精密称取20 g，置150 ml烧瓶中，加甲醇50 ml，称定重量，加热回流30 min，放冷至室温，称定重量，加甲醇

5、补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 ml，置水浴上蒸干。残渣加水20 ml，加盐酸2 ml，氯仿20 ml，置100 ml烧瓶中，加热回流30 min，放冷，置分液漏斗中，分取氯仿层；酸水层再用氯仿萃取两次（20，20 ml），收集氯仿液，合并，回收至干，残渣加无水乙醇使溶解，置50 ml容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2.4 测定方法分别精密吸取上述两种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视，画出与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，定量刮取置具塞试管中，用无水乙醇超声提取二次（2，1.5 ml）,

6、30 min/次，合并上清液，置离心机中，以2 500 r/min离心约10 min，倾取上清液置5 ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，照荧光分析法（2000年版中国药典部附录），在激发光波长214 nm；荧光光谱波长569 nm处室温(25±1)测定荧光，读数，计算，即得。 2.5 线性关系分别精密吸取上述对照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 l。按照含量测定方法中薄层色谱法点样、展开、刮板、提取和荧光分析法测定含量，以浓度为横坐标，荧光强度（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=1.532 3 X + 552 .14 ，r=0.998 6（n=5）。 结果

7、表明，大黄素在0.060 20.301 2 g/ml 范围内其荧光强度与浓度呈良好线性关系。2.6 重复性实验取供试品溶液(批号：040720)分别于0，2，5，10 d进样1次, 依上法测定，测定结果表明大黄素含量无明显变化，RSD分别为0.98%，0.75%，1.04%，0.55%。见表1。表1 重复性考察实验放置（略）2.8 加样回收率实验精密称取同批样品5份（批号：040720 已知大黄素含量0.223 mg/g），每份5.0 g，每份加入大黄素对照品4 ml（大黄素0.301 2 mg/ml），按2.3项下方法操作，得供试品溶液。精密吸取10 l点于硅胶G薄层板上，按2.4项下方法操

8、作，分别进行荧光测定。 计算回收率，实验结果见表2。表2 大黄素加样回收率实验结果样品中大黄素含量（略）2.9 样品含量测定在上述色谱条件下测定5批样品的大黄素含量，分别取供试品溶液进行荧光测定，结果见表 3 。表3 5批样品含量测定结果（略）3 讨论3.1 虎杖中的主要化学成分为蒽醌类和二苯乙烯类物质，使虎杖具有清热祛湿、活血通络的功效。其中蒽醌类化合物具有保肝利胆、抗病毒的作用4，为主要药效成分之一，在黄花参肝舒茶中具有加强君药黄花参清利肝胆湿热的功效。为此选择大黄素作为指标，对其进行含量测定。3.2 据文献资料，大黄素含测方法有高效液相色谱法2,3、薄层扫描法5及分光光度法6。本文采用荧

9、光分析法测定，操作简便、准确度、精密度高、重现性好。实验结果，虎杖中大黄素回收率为 98.88% ；RSD为2.16 %，可作为该制剂含量测定，以控制其质量。3.3 实验通过对大黄素的激发光谱扫描其在214 nm处荧光强度最强，荧光光谱扫描其在569 nm处荧光强度最强，因此本文确定采用在激发光谱为214 nm，荧光光谱为569 nm处测定黄花参肝舒茶中大黄素的含量。见图12。参考文献：1江苏新医学院，中药大辞典，上册M.上海：上海人民出版社，1986：1329.2唐小波，吴健儿，赵绪元. 高效液相色谱法测定虎杖中大黄素的含量J.基层中药杂志，2000，14(4)： 17.3赵建平. 五灵健肝片中大黄素的含量测定J. 中成药，200