NBQX对脑缺血再灌注后成年大鼠大脑少突胶质前体细胞的保护作用

1、NBQX对脑缺血再灌注后成年大鼠大脑少突胶质前体细胞的保护作用         11-06-07 10:25:00     编辑：studa20          作者：李华杰 吴 坚 盛世英 朱林凤 张菊美【摘要】  目的 探讨脑缺血再灌注后成年大鼠大脑少突胶质前体细胞的变化及MK801和NBQX对其保护作用。方法 以线栓法制作成年SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(阻塞90mi

2、n再灌注1d、7d和14d)，分别向其大脑皮质缺血区立体定向注射5mmol/L 的MK801和50 mmol/L的NBQX各1l，用免疫荧光组织化学法检测脑缺血再灌注后成年大鼠早期大脑梗死中心区、梗死周边区和缺血对侧NG2和O4阳性细胞数量。结果 脑缺血再灌注后成年大鼠大脑皮质梗死中心区NG2 和O4阳性细胞逐渐减少， NBQX组大鼠NG2和O4阳性细胞数减少的幅度较少。脑缺血再灌注后梗死周边区NG2和O4阳性细胞数逐渐增加，NBQX组大鼠增加更明显，而MK801组与生理盐水组无明显差别。结论 成年SD大鼠脑缺血再灌注后梗死周边区少突胶质前体细胞增多。NBQX对少突胶质前体细胞早期的缺血性损伤

3、有保护作用。 【关键词】  缺血;再灌注;少突胶质前体细胞;NBQX【Abstract】 Objective To explore the change of oligodendrocyte precursor cells in adult rats after focal cerebral ischemia and the protection of MK801 and NBQX to them. Methods Focal cerebral ischemia and reperfusion model in male adult SD rats was established b

4、y occluding the right middle artery with 40 nylon thread (blood flow blocked for 90 minutes and then reperfusion for 1 day, 7 days and 14 days.One microliter MK801 (5mmol/L) and NBQX (50mmol/L) were respectively injected into the cerebral ischemic area of SD rats under stereodirectional instrument r

5、ight after ischemia.Then NG2,O4 positive cells in the ischemic core, ischemic penumbra and contralateral area of rats were determinated at each timepoint after reperfusion by immunofluorescence histochemistry. Results The number of NG2 , O4 positive cells within the ischemic core decreased significa

6、ntly at each timepoint with the NBQX group in less amount. The number of NG2 and O4positive cells within ischemic penumbra increased gradually after reperfusion with the NBQX group in higher amount. Conclusion The marked increase of oligodendrocyte precursor cells is observed in the periinfarct area

7、 during the postischemic reperfusion period in the adult rat brain. And NBQX has some neuroprotective effect to oligodendrocyte precursor cells in postischemic brain injury.【Key words】 Ischemia; Reperfusion; Oligodendrocyte precursor cells; NBQX兴奋性氨基酸毒性损伤作用是脑创伤和脑卒中等中枢神经系统(central nervous system，CNS)

8、疾病中神经元死亡的主要因素之一1。而少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells, OPC)膜上含有大量的兴奋性氨基酸受体2。MK801和NBQX分别是N甲基D天冬氨酸(NmethylDaspartate，NMDA)受体和氨基3羟基5甲基4异唑丙酸盐(alphaamino3hydroxy5methyl4isoxazole propionate，AMPA)受体的拮抗剂。我们观察了脑定向注射MK801和NBQX对大鼠脑缺血再灌注后早期大脑皮质NG2和O4表达的影响，报道如下。1 材料和方法1.1 动物和分组 成熟雄性SD大鼠(苏州大学实验动物中心提供)28032

9、0g，共60只，随机分为正常对照组(缺血前)、生理盐水组、MK801组和NBQX组，缺血再灌注后1d、7d及14d共10个小组，每组6只大鼠。1.2 动物模型制作 大鼠脑缺血再灌注损伤模型制作参照Kitagawa H3的方法，用40的无创单股尼龙手术线由近端向远端插入颈总动脉、颈内动脉，至大脑中动脉起始段，由此造成大鼠局灶性脑缺血，于90min后拔除尼龙线，开始再灌注。对照组麻醉后分离出右侧颈总动脉，然后缝合。麻醉及手术期间使大鼠肛温保持在3737.5。大鼠清醒后具备以下表现者为动物模型制作成功，记入实验组：大鼠朝左侧转圈爬行，或者左前肢无力并向左侧方爬行3。NBQX组和MK801组大鼠脑缺血

10、后即刻在KOPF TAXIC500900型立体定位仪下分别向其脑内缺血区注射NBQX(50 mmol/L)和MK801(5mmol/L)各1l，注射速度0.2 l/min5。生理盐水组大鼠依照上述方式注射1l生理盐水。1.3 组织标本制备 用3.6%水合氯醛腹腔注射将大鼠麻醉后，经主动脉先后灌注4的生理盐水和4%多聚甲醛300ml，然后断头取脑，4%多聚甲醛室温下固定2h，30%蔗糖溶液过夜，用冰冻切片机连续冠状切取10m厚切片。1.4 NG2、O4检测 采用免疫荧光组织化学间接法，先后加一抗，小鼠抗大鼠NG2 IgG、小鼠抗大鼠O4 IgM，二抗，兔抗小鼠IgG+MFITC(华美生物工程公司)，然后在荧光显微镜下观察NG2、O4阳性细胞形态并计数。1.5 NG2、O4阳性细胞计数 将缺血再灌注的冠状面前囟处脑组织浸入2%氯化2,3,5三苯基四氮唑(TTC)溶液中，37避光孵育30min，如图1